ZEITSCHRIFT FÜR WISSENSCHAFTLICHE MIKROSKOPIE UND FÜR MIKROSKOPISCHE TECHNIK Unter besonderer Mitwirkung von Prof. Dr. Leop. Dippel üi Darmstadt Prof. Dr. P. Schieflferdecker Prof. Dr. R. Brauus 111 Boiin in Giessen herausgegeben von Dr WILH. JUL. BEHRENS in Göttingeii Band XVI (Jahrgang 1890) Mit einer Steindriicktafel und 4G Holzsclinitten BRAUNSCHWEIG HARALD B R U H N Verlagsbuchhandlung für Naturwissenschaft und Medicin 1899 Alle Recbte vorbehalten. ^7f 1 11 h a 1 1 s y e r z e i c li 11 i s s. I. Abhandlungen. Seite Amaun, J., Neue Beobaclitun.o-siuetlien 38 Arndt, (i., Apparat zum Aufblasen der Froschlunge intra vitam . . oOO Behrens, W., Notizen über optische Projection I (Elektrischer Hand- regulator für mikroskopische Projectionen. — Zur Projection mikroskopischer Uebersichtspräparate) 183 Dimmer, F., Eine Moditication der X'elloidinserienmethode .... 44 Gaylord. H. R., Complete Photo -micrographic Apparatus .... 289 Heydenrexh, L. , Einige Neuerungen in der bacterioiogischen Technik 145 Jordan, H., Ein neuer Apparat zur Orientirung kleiner mikroskopi- Objecte 33 — , — , Nachtrag zu „Technische Mittheilungen" 48 Katz, J. , Ein eigenthümlicher Fall von Bewegung mikroskopisch kleiner Objecte, hervorgerufen durch Diffusionserscheinungen 431 Köhler, A., Beleuchtungsapparat für gleichmassige Beleuchtung mikro- skopischer Objecte mit beliebigem einfarbigem Licht .... 1 3Iayer, P., Ueber Hämatoxylin, Carmin und verwandte ]\Iaterien . . 19G Mayer, P., u. Schoebel, E., Neue Messerhalter der Firma R. Jung 29 Schatfer, J., Eine Zuschneide -Vorrichtung für Paraffinblöcke . . . 417 — , — , Eine Vorrichtung zum raschen Entwässern histologischer Objecte 422 Ssobolew, L. W., Zur Technik der Safraninfärbung 42.") Starliuger, J, , Zur Marchi-rjehandhmg. — Ein Apparat zur Zer- legung in dünne, vollkommen planparallele Scheiben .... 179 VirchoAV, H., Ein Schneide- Apparat zum Zertheilen flächenhafter Präparate „Membran -Zertheilor" 295 I y Inhaltsverzeicliniss. Seite Wasielewski. W. v., lieber Fixining-sHüssigkeiten in der bota- nischen Mikrotec'linik , • • -^OÜ WoUr. E.. Ueber ("olloVdineinbettunf? und Färbung- von Tul)erkel- bacillen in {'clloKUnisclinitten 427 II. Referate. Abel, R. , Taschenbuch für den bacteriologischen Prakticanten, ent- haltend die wichtigsten technischen Detailvorschriften zur bacteriologischen Laboratoriumsarbeit 482 Adloff, P., Zur Entwicklungsgeschichte des Nagethiergebisses ... 75 Ahneida, de, Zur Kenntniss der Vacuolen des Fettzellenkerns . . 3G1 Arcangeli, A., Uli studi dello Czapek sui tessuti lignificati ed i pro- cessi per colorarli stabibuente ")12 Arnold. J. , Zur JMorpliologie der intravasculären Gerinnung und Pfrupfbildung 230 Aiickeuthaler, Beitrag zur Diagnose des Diplitheriebacillus .... 392 Ballowitz, E., Zur Kenntniss der Ilornhautzellen des Menschen und der Wirbelthiere 449 Bari, A. E., wosbudimossti mosgowoi kory novoroshdennych shiwotnych 243 Becke, F., Optische Orientirung des Anortliits vom Vesuv .... .517 — , — , Zur Bestimmung der Plagioklase in Dünnschliffen in Schnitten senkrecht zu M und P 519 — , — , Zur optischen Orientirung des Anorthit 518 Behrens, H., Anleitung zur mikrochemischen Analyse 515 Behrens, J., Die Brauntleckigkeit der Rebenblätter und die Plasmo- diophora vitis 504 Belajett', W., Ueber die Centrosomen in den spermatogenen Zellen . 395 — , — , Ueber die männlichen Prothallien der Wasserfarne (Hydro- pterides 118 Berkeley, H. J., Preparing central nervous System 94 Berthold, G., Untersuchungen zur Physiologie der pflanzlichen Or- ganisation. 1. Th .399 Bettniaun, S. , Ueber den Einfluss des Arseniks auf das Blut und das Knochenmark des Kaninchens 92 Bietti, Anatomische Untersuchungen über die Regeneration der Ciliar- nerven nacli der Neurectomia optico-ciliaris beim Menschen . 479 Boccardi, G. , Sopra una moditicazione a'metodi per la colorazione delle cellule nervöse secondo Nissl 471 Bochenek, A., Die Keifung und Befruchtung des Eies von Aplysia depilans 445 (1 Inliultsverzeiclmiss. V Seite Bos(i, J. J., Les parasites du t-aiK-er et du sarcome (coloratinn. strue- ture. cycles de reproduction. diiuorpliisiue evolutif) .... 392 Boiiiii, M., et Bouin, P., Siir la piesence de formations ergastoplas- miques dans l'oocyte d'Asterina gibbosa [Forb.] 357 Bowhill, Th., Manual of bacteriological teclinique and special bacte- riulog'v -lÖ — , — , Zur bacteriologischen Teclmik. — Zur Cultur der Hefen auf Gypsflächen — Eine neue Platinnadel 249 Brasch, F., lieber den Einfluss der Wasserentziehung auf die Nerven- zellen Klö Brodmanu, K. , Ueber den Xachweis von Astrocyten mittels der WEiCxERT'schen Gliafärbung 24:0 Bütsehli, O., Ueber die Lcislichkeit des (Schwefels in Wasser und (^lycerin 273 Buscalioni, L., Der Sudan III und seine Verwendung in der bota- nischen Mikrotechnik 26(j Catterina, G., Ricerche suU'intiiua struttura delle spore dei batteri . 110 Cavalie, M. , Innervation du diaphraguie par les nerfs intereostaux chez les mammiferes et chez les oiseaux - 242 Cavara, F., Osservazioni citologiche suUe Entomophthoreae .... 504 Clialon, J. , Coloration des parois cellulaires, III. serie d'experiences 511 Coe, W. R., The maturation and fertilization of the egg of Cere- bratulus • • 358 Colassak, R., Die Herkunft des Myelins. Ein Beitrag zur Physio- logie des Nervenstützgewebes 373 Cox, AV. H., Die Selbständigkeit der Fibrillen im Neuron. Eine Studie über das Granulanetz und die Fibrillen der Spinalganglien- zellen 101 Czapek, F., Ueber die sogenannten Ligninreactionen des Holzes . . 119 — . — , Zur Biologie der holzbewohnenden Pilze 39(3 Dqb.ski. K., Weitere Beobachtungen an Chara foetida Desv. . . . 2()7 Deterniaun, Klinische Untersuchungen über Blutplättchen .... 8G Dogiel, A. S., Ueber den Bau der Ganglien in den Geflechten des Darmes und der Gallenblase des Menschen und der Säugethiere 378 — , — , Zur Frage über den Bau der HERBSx'schen Körperchen und die Methylenblautixirung nach Bethe 451 Dreier, Ueber Protargol 383 Ehlers, H., Zur Kenntniss der Anatomie und Biologie von Oxyuris curvula Rud 70 Eminerling, O., Zur Kenntniss des Sorbosebacteriums 394 Enderlein, G. , Beitrag zur Kenntniss des Baues der quergestreiften Muskeln bei den Insecten 443 Enderlen, Histidngische Untersuchungen bei experimentell erzeugter Osteomyehtis 460 Engel, C. S., Ueber embryonale und pathologische rothe Blutkörper- chen mit Demonstration mikroskopischer Präparate .... 88 Esoherich, Th., Ueber Streptokokkenenteritis im Säuglingtalter . . 388 \1 Inhaltsverzeicliniss. Seite Ewing, J. , Studies of ganglion cells. A preliniinary coiumunication 95 Federow, E. v., ("onstatirung der optischen Anomalien in l'lagid- klasen 519 Fölizet, G., et Branca, A., Histologie du tcsticiile cctopique ... 7fi Fischoeder, Das Schicksal replantirter Knochenstücke vom histolo- gischen Gesichtspunkte aus betrachtet 3G2 Foä, P., Beitrag zum Studium des Knochenmarks 231 Fraenkel, C, lieber das Vorkommen des Meningococcus intra- cellularis bei eiterigen Entzündungen der Augenbindehaut . 387 Friedmanu, F., Ueber die Pigmentbildung in den Schmetterlings- flügeln 72 Fritz, F., Ueber die Structur des Chiasma nervorum opticorum bei Amphibien 479 Fuchs, E., Beiträge zur Kenntniss der Entstehung, des Vorkommens und der Bedeutung eosinophiler Zellen mit besonderer Berück- sichtigung des Sputums 447 Gardiner, E. G., Early development of Polychoerus caudatus, Makk 71 Geliuchteii , A. van, et Nelis, Ch., Quelques points concernant la structure des cellules des ganglions spinaux 242 Giglio-Tos, E., Une coccidie parasite dans les thrombocytes de la grenouille G7 Gise, E. A., ssosstawnych tschasstjach bellago weschtschesstwa sspinogo mosga tscheloweka po metodu raswitija 241 Glaser, F., Haben die Muskelprimitivbündel des Herzens eine Hülle? 85 Götz, G., Ueber die Entwicklung der Eiknospe bei den Characeen . 118 Goldscheider, A., u. Flatau, E., Normale und pathologische Ana- tomie der Nervenzellen auf Grund der neueren Forschungen 102 GolowkofF, A. J., Ueber Nährböden für die bacteriologische Diphtherie- diagnose 107 {iothard, M. de, Modifications ä la methode de Nissl 60 Grassberger, R., Beiträge zur Bacteriologie der Influenza .... 259 — , — , Zur Frage der Scheinfädenbildungen in Influenzaculturen . . 383 Graupner, R. , Beiträge zur normalen und pathologischen Anatomie des sympathischen Nervensystems 98 Grünstein, N., Zur Innervation der Harnblase 457 Grundsätze für die Reinigung von Oberflächenwasser durch Sand- filtration 264 Günther, A., Untersuchungen über die im Magen unserer Haus- wiederkäuer vorkommenden Wimperinfusorien 69 Hansteen, B., Ueber Eiweisssynthese in grünen Phanerogamen . . 399 Harris, H. F., Amtx'bic dysentery 437 — , — , A new method of „ripening" hiBmatoxylin 434 — , — , Two new methods of staining the axiscylinders of nerves in the fresh state. Some microchemic reactions of toluidin-blue 60 Heinersdorf, H. , Zur Schnelldiagnose der Diphtherie, speciell der Diphtherie der Conjunctiva 494 Heller, Zur Technik der Celloi'dineinbettung 353 Inhaltsverzeichniss. \'{l Seite Hendricksou , W. . A study of Hio museulaturc ot" tlie entire extni- liepatic biliary systoiu, inoludin:^ that of duuilcnal purtion ot" the common bileduct and of the sphincter 368 Henry, A., Phenomenes de bourgeonnement nucleaire degeneratif dans Tosteosarcome 7") Hesse, R., Unteisuchungen über die Organe der Lichtempfindung bei niederen Thieren. ö. Die Augen der polychäten Anne- liden 70 Hesse, W., Ein neues Verfahren zur Züchtung des Tul)erkelbacillus 492 Heiirck, H. van, Traite des Diatomees 498 Hibler , E. y., Beiträge zur Kenntniss der durch anaerobe Spalt- pilze erzeugten Infectionskrankheiten der Thiere und des Menschen, sowie zur Begründung einer genauen bactoriolo- gischen und pathologiscii- anatomischen Difierentialdiagnose dieser P'rocesse 485 Hibsch, J. E., Die Tiefengesteine des böhmischen Mittelgebirges . . 403 Hubert, P., Ueber das constante Vorkommen langer Streptokokken auf gesunden Tonsillen und ihre Bedeutung für die Aetiologie der Anginen 495 Hippel, E. V., lieber das normale Auge des Neugeborenen .... 79 Hofmanu. H. , Beiträge zur Kenntniss der Entwicklung von Disto- mum leptostomum Olsson 70 Hopkins, G. S., On the enteron of american Ganoids 74 Hermann, u. Morgenroth, Ueber Bacterienbefunde in der Butter . 497 Hoyer. H., Ueber das Verhalten der Kerne bei der Conjugation des Infusors Colpidium colpoda St 08 Longo, B., Contriltuzione alla eromatolisi (picnosi) nei nuclei ve- getali ölO Lord, J. R., A new Nissl method 59 Lutz, A., Beiträge zur Kenntniss der Drüsen des dritten Augenlids 233 Luxenburg, J., Ueber morphologische Veränderungen der Vorder- hornzellen des Rückenmarks während der Thätigkeit . . . 477 MacCallum, J. B., On the histogenesis of the striated muscle fibre, and the growth of the human sartorius muscle 231 3Iänner, H., Beiträge zur Entwicklungsgeschichte der Wirbelsäule bei Reptilien 4(j0 Mahalanobis, S. C, Microscopical observations on the muscle tat in tlie salmon 74 Marcauo, G., De l'action du formol sur les globides rouges du sang 3(;4 Marzinowsky, E. J., Ueber eine neue Methode der Differentialfärbung der Mikroorganismen der menschlichen und \'ögeltuberculose, Lepra und Smegma 264 Maxiinow, A., Die histologischen Vorgänge bei der Heilung von Hoden Verletzungen und die Regenerationsfähigkeit des Hoden- gewebes 457 Meves, F., Ueber Structur und Histogenese der Samenfäden des Meer- schweinchens 459 Meyer, S., Ueber centrale Neuritenendigungen 47(j Migula, W., System der Bacterien. Handbuch der Morphologie, Ent- wicklungsgeschichte und Systematik der Bacterien .... 480 Mihalkowics, V. v. , Nasenhöhle und jAKOBSON'sches Organ. Eine morphologische Studie 7i) Minerviui, R., Particolaritä di struttura delle cellule muscolari del cuore 84 MoeUer, A., Ein Mikroorganismus, welcher sich morphologisch und tinctoriell wie der Tuberkelbacillus verhält 258 Möller, W., Anatomische Beiträge zur Frage von der Secretion und Resorption in der Darmschleiudiaut 450 Mönckeberg, G., u. Bethe, A., Die Degeneration der markhaltigen Nervenfasern, der Wirbelthiere unter hauptsächlicher Berück- sichtigung des Verhaltens der Primitivtibrillen. Zugleich ein Beitrag zur Kenntniss der normalen Nervenfasern .... 244 X Inlialtsverzeichniss. Seite Molisch, H., botanische Beob;iclitiini;('n auf .Java IN': lieber Psciido- indican , ein neues Chromogcn in ) , die Helligkeit des Collectorbildes also nur noch die Hälfte der maximalen. Figur 4 c endlich zeigt, dass die fragliche Fläche für die Farbe 630 unendlich klein wird, die Helligkeit des Collectorbildes ist daher Null. Bestimmt man auf diese Weise die HeUigkeit der CoUectorbilder für eine Anzahl von Farben, so kann man ebenfalls eine HeUigkeits- curve construiren, Figur 4 c? giebt ungefähr ihre Form wieder. Be- sonders charakteristisch ist der rasche Abfall der HelUgkeit in der Nähe der Farben 590 und 510 [Xfx-^ er bewirkt, dass die zwischen diesen liegenden Wellenlängen hauptsächlich zur Geltung kommen, und unter ihnen besitzt wieder eine Farbe — 550 jW;i«. — die grösste Intensität. Die von der Curve und der Abscissenachse eingeschlossene Fläche ist ein Maass für die Gesammtintensität : ein Vergleich zwischen den Figuren 3 b und 4 d in dieser Hinsicht ist aber nicht zulässig, denn der Maassstab der Ordinaten ist auf beiden Figuren ein ausser- ordentlich verschiedener. Es lässt sich jedoch auf anderem Wege zeigen, dass die Gesammtintensität immer der Spaltbildbreite propor- tional ist. Aelmlich liegen die Verhältnisse auch , wenn die Breite des Spaltbildes kleiner ist als der Blendendurchmesser ohne unendlich klein zu sein : eine Farbe hat immer die grösste Helligkeit, dieselbe nimmt für die benachbarten erst langsam, dann schneller ab. Das wird aber anders , wenn die Spaltbildbreite grösser wird als der Durchmesser der Blende. Für den Fall, dass das Spaltbild doppelt so breit ist wie die Condensorbleude, giebt Figur 5 a bis c die Lage von drei Spaltbildern wieder, Figur ha zeigt, dass die Farbe 550 juju die ganze Condensor- öffnung erfüllt , dasselbe ist aber (Figur 5 b) auch für die Farbe 590, und der Symmetrie wegen auch für 510 der Fall. Ferner ist klar, dass auch alle zwischen 510 und 590 liegenden Farben die XVI, 1. Köhler: Belcuchtungsapparat für gleichraässige Beleuclitung. 21 <- ?t c: »^ ^ f* iC ^ i^ i^ ^ "^ 5. 22 Köhler: Beleuchtungsapparat für gleichmiissige Beleuchtung. XVI, 1. ganze Condensoröffnung ausfüllen. Die von all' diesen Farben er- zeugten CoUectorbilder haben daher die gleiche maximale Helligkeit, wie sie in dem zuletzt besprochenen Fall dem von der Farbe 550 entworfenen Bild allein zukam. Erst für die Farben, deren Wellen- länge grösser als 590 oder kleiner als 510 /.i/^i ist, findet ein Abfall der Helligkeit statt, und zwar genau so wie in dem vorigen Fall. Statt weiterer Erörterungen verweise ich auf die Figur 5 d , welche die Helligkeitscnrve für unseren Fall darstellt. Das der Abscissen- achse parallele, gerade Stück zeigt die gleiche Helligkeit der Farben 590 bis 510, der rasche Abfall findet sich bei GoO und 470, die Grenze bei 670 und 430. Der Maassstab der Ordinaten ist in dieser Figur derselbe wie in Figur 4f/, daher giebt das Verhältniss der von beiden Curven und der Abscissenachse umschlosseneu Flächen zugleich das Ver- hältniss der Gesammtintensitäten des in beiden Fällen durchgelassenen Lichtes. Es lässt sich leicht zeigen, dass die Fläche in Figur bd doppelt so gross ist als die in Figur 4 d dargestellte Fläche ; die Gesammtintensität ist also im letzteren Fall nur halb so gross als in ersterem, was auch dem Verhältniss der Spaltbildbreiten entspricht. Die besprochenen drei Fälle zeigen zur Genüge , wie man im Stand ist, einfach durch Verändern der Spaltweite die Reinheit des zugelassenen Lichtes in bequemster Weise zu reguliren, viel besser als es bei Verwendung von Lichtfiltern durch Aendern der Concen- tratiou oder Schichtdicke möglich ist. Daher ist die Spaltbreite bei meinem Apparat veränderlich. Am besten wäre ein Spalt mit sym- metrisch verschiebbaren Backen und Mikrometerschraube zur Be- stimmung der jeweilig eingestellten Spaltweite ; nur der Billigkeit wegen habe ich der Revolverscheibe mit Spalten von abgestufter Weite den Vorzug gegeben. Ausser der Reinheit ändert sich aber mit der Spaltbildbreite, wie wir eben sahen, auch die Helligkeit, und zwar dieser proportional. Vergleicht man die Aenderung der Helligkeit mit der gleich- zeitigen Aenderuug der Reinheit , so kommt man zu einem für die Construction und den Gebrauch des Apparates wichtigen Resultat. Nehmen wir für den ersten Fall, da sich ein reines Spectrum ja nicht verwirklichen lässt, die Breite des Spaltbildes gleich ^J^qq des Blendendurchmessers an, die Intensität des gesammten durch- gelassenen Lichtes werde dann willkürlich gleich 1 gesetzt. Im zweiten Fall ist dann die Lichtstärke gleich 100, im dritten gleich 200. Der Spielraum, innerhalb dessen die Wellenlänge des durch- XVI, 1. Kühler: Beleuchtungsapp;ii;it für gleiclnuässige Beleuchtung. 23 gelassenen Lichtes schwankt, ist im ersten Fall ein wenig grösser als 590 — 510 = 80 /t^a, im zweiten beträgt er 630 — 470 = ItiO fXfx^ ist also doppelt so gross, und im dritten ist er 670 — 430^240 fifx oder dreimal so gross. Den reciproken Werth der Grösse dieses Spielraumes wollen wir nun als ein Maass für die Reinheit des durehgelassenen Lichtes ansehen und im ersten Fall die Reinheit der Farbe auch gleich 1 setzen , dann ist sie im zweiten ^j^ , im dritten ^/g. Das weist darauf hin , dass das Verengern des Spaltes unter eine gewisse Grenze unvortheilhaft wird, weil die Helligkeit augenscheinlich viel rascher abnimmt als die Reinheit zunimmt. Eine bestimmte allgemein gültige Regel wird sich natürlich nicht angeben lassen, doch wird man meistens keine Spalten verwenden, deren Bilder sehr viel grösser oder kleiner wer- den als die Blendenöffnung des Condensors. Wird ein noch reineres Licht gefordert als bei der engsten, ohne zu starke Einbusse an Helligkeit verwendbaren Spaltbildbreite erreichbar ist, so rauss man Sorge tragen, dass die einzelnen Spalt- bilder , ohne ihre Breite zu ändern, weiter aus einander fallen. Wird ihr Abstand von Mitte zu Mitte gemessen, beispiels- weise verdoppelt, so rückt das Spaltbild der Farbe 530 an die Stelle von 510, dieses an die Stelle von 470 und so fort. Die Figuren 3 und 4 a bis c stellen die Lage der Spaltbilder auch für diesen Fall dar , nur gelten jetzt die oben stehenden Zahlen zur Bezeichnimg der Wellenlängen. Bei dem grösseren Abstand der einfarbigen Spaltbilder lässt die Blende selbst bei weitem Spalt, wie Figur 4 c zeigt, nur die Farben 510 bis 590 hindurch, also nicht mehr, als nach Figur 3a (unten stehende Zahlen) bei dem kleineren Abstand der Spalt- bilder und unendlich engem Spalt durchgelassen würden. Beidemale treten die Grenzfarben nur durch unendlich kleine Theile der Rand- zone der Condensorblende hindurch, die anderen Farben erfüllen aber im ersten Fall Segmente der Blendenöffnung, deren Grösse von beiden Seiten her schliesslich zum Betrag der vollen Condensoröffuung an- wächst, im zweiten Fall dagegen sind es nur sehr schmale Streifen, deren Länge bis zur Grösse des Blendendurchmessers steigt. Dass die Helligkeit im ersten Fall ausserordentlich viel bedeutender ist als im zweiten, liegt auf der Hand. Eine gewisse Abnahme der Helligkeit tritt natürlich auch bei der Vergrösserung des Abstandes der einzelnen einfarbigen Spalt- bilder ein : in unserem Fall z. B., bei Verdoppelung des Abstandes — 2 4 Köhler: Beleuchtunf?sapparat für gleichmässige Beleuchtunff. XVI, 1. inul doppelter Reinheit der Farbe — sinkt die Helligkeit auf die Hälfte , denn es kommen da nur halb soviel Farben zur Wirkunsi:. Dieser Lichtverlust steht aber immer im Verhältniss zur Zunahme der Reinheit und wächst nicht so rapid, wie es bei starker Ver- engerung des Spaltes der Fall ist. Den erforderlichen grossen Abstand der einzelnen farbigen Spalt- bilder können wir nun auf zwei AVegen erreichen. Man kann einmal das Spectrum in entsprechend grösserem Abstand von dem Prisma auffangen. Dabei ändert sich allerdings gleichzeitig die Breite der Spaltbilder, mau muss daher den Spalt wieder in angemessener Weise verengern, damit das Verhältniss zwischen Spaltbildbreite und Durch- messer der Blendenöffnung unverändert bleibt. Diese Verkleinerung der Spaltbreite und besonders der grössere Abstand vermindern natürlich die Helligkeit des reellen Spectrums, man darf aber nicht denken, dass deshalb das Bild der Collectoröffnung in der Object- ebene mehr an Helligkeit eiubüsste als der grösseren Fteinheit des zugelassenen Lichtes entspricht: in Folge des grösseren Abstandes, in dem sich der Collector befindet, wird nämlich das CoUectorbildchen kleiner, und dadurch wird die geringere Helligkeit des auf der Oondensorblende entworfenen reellen Spectrums ausgeglichen. Dies Kleinerwerden des CoUectorbildchens setzt aber auch der Vergrösserung des Abstandes zwischen Spectralapparat und Mikro- skop Grenzen, da das Bildchen bald so klein wird, dass es auch das Gesichtsfeld starker Objective nicht mehr ganz ausfüllt. Dann bringt man die einzelnen einfarbigen Spaltbilder besser dadurch noch weiter aus einander, dass man Prismen von grosser Disper- sion wählt. Aus diesem Grunde, und weil Glasprismen von der erforder- lichen Grösse und Vollkommenheit zu theuer sind, verwende ich ein Schwefelkohlenstoffprisma. Falls der Kostenpunkt keine Rolle spielt, wäre ein geradsichtiges Prisma von grosser Oeffnung und grosser Dispersion zu empfehlen, das Wegfallen der Ablenkung würde meines Erachtens das Arbeiten wesentlich bequemer gestalten. Die gleichmässige Färbung des Sehfeldes bildet einen dritten Punkt, auf den besonders bei photographischen Auf- nahmen unbedingt zu achten ist. Die Erfüllung dieser Forderung setzt voraus , dass kein reelles oder virtuelles Bild des Spectrums vom Condensor in der Nähe der Objectebene entworfen wird. Das ist aber sicher nur dann der Fall, wenn die einfarbigen Spaltbilder, welche die in Betracht kommende Region des Spectrums zusammen- XVI, 1. Köhler: Beleiichtungsapparat für gleichmässi;2:e Beleuclitiintr. 25 setzen, immer genau in die Ebene der Condeusorblende fallen, Ist die Collectorlinse nicht achromatisch, so muss man daher für jeden Farbenbezirk den Spalt — bei gleichbleibendem Abstand zwischen Prisma und Condeusorblende — anders einstellen. Um dies zu ver- meiden, wälilte ich eine achromatische Linse ; die Aenderung in der Einstellung, die auch hier der secundären Farbenabweichung wegen erforderlich ist, bleibt dann so gering, dass wenigstens ein Nach- stellen der Lichtquelle oder des SpaltcoUectors meist unuöthig wird. Störender noch als die chromatische Abweichung wäre eine starke sphärische Aberration. Denn dann würden die einzelnen Zonen des Collectors verschiedene gleichfarbige Spaltbilder in ver- schiedenen Ebenen entwerfen, von denen natürlich immer nur eins in die Blendenebene fallen könnte. Die oben aufgestellte Bedingung wäre dann höchstens für einzelne Zonen des Sehfeldes , also die Mitte oder den Rand, zu erfüllen. Diesem Umstand schreibe ich es zu, dass bei meinen Versuchen das Opernglasobjectiv von 25 mm Oeffnung und 12 cm Brennweite bessere Resultate ergab, als ein anderes von 30 mm Oeffnung und 9 cm Brennweite, das eben seiner Ausmaasse wegen sonst vortheilhafter gewesen wäre. Am besten wäre wohl ein System ähnlich den verkitteten Fernrohrobjectiveu, über die Harting^ berichtet. Objective mit nicht verkit- teten Linsen sind nicht zu brauchen: die dünne Luft- schicht veranlasst das Entstehen NEWTON'scher Farbenringe. Auch der Condensor muss hinreichend frei von sphärischer und chromatischer Aberration sein. Sphärisch corrigirt muss er sein, damit die den einzelnen Farben zugehörigen Collectorbilder, die von der ganzen Oeffnung oder von grösseren Theilen derselben erzeugt werden, jedes für sich möglichst scharf sind. Sollen sich diese farbigen Einzelbilder vollkommen decken, so ist auch eine ausreichende chromatische Correction erforderlich ; auch hier werden aber , der geringen Verschiedenheit der in Frage kommenden Wellenlängen wegen, Fehler in dieser Beziehung weniger störend sein als Mängel der sphärischen Correction. Das gewöhnliche Condensorsystem von 1*2 resp. 1*4 numerischer Apertur ist daher nur bei engen Blenden brauchbar, und selbst dann hat man beim Uebergang zu schiefem Licht oder zu einer anderen Farbe immer die Einstellung zu verändern, damit das Bild des Col- ^) Harting, H. , Zur Theorie der zweitheiligen verkitteten Fernrohr- objective (Zeitschr. f. Instrumentenk. Bd. XVIII, 1898, p. 357). 26 Köhler: Beleuchtungsapparat für gleichmässige Beleuchtung. XVI, 1. lectors in der Objectebene scharf bleibt ; die besten Resultate erhalte ich bei der Verwendung von Mikroskopobjectiven an Stelle des Con- densorsystems , gleich gute wird wohl der achromatische Condensor liefern. Beim Gebrauch von Objectiven ändert sich im allgemeinen mit der Oetfuung der beleuchtenden Lichtkegel auch die Grösse des beleuchteten Sehfeldes, da Objective von verschiedener Apertur auch meist verschiedene Brennweite haben. Objective von grosser Apertur, etwa 0*6 und darüber, geben insbesondere der geringen Brennweite halber auch kleine Bilder des CoUectors, die unter Umständen noch nicht einmal das Sehfeld des zur Aufnahme dienenden Objectivs aus- füllen. Das schadet jedoch nichts , denn bei grosser numerischer Apertur der beleuchtenden Strahlenkegel ist das Gesichtsfeld immer so stark gekrümmt, dass doch nur ein kleiner Theil desselben auf der photographischen Platte scharf eingestellt werden kann ; zu dessen Beleuchtung reicht aber auch ein stark verkleinertes Bild des CoUectors aus. Ferner ist zu bedenken, dass bei kleiner Brenn- weite der lineare Durchmesser der Oetfnung ebenfalls klein ist, so dass dementsprechend auch der Abstand des Spectralapparats, ohne dass eine Einbusse an Reinheit der Farbe zu befürchten ist, ver- kleinert werden kann : dadurch wird aber das Bildchen der Collector- öffnung trotz der kurzen Brennweite hinreichend gross. Gleichmässige Helligkeit des ganzen erleuchteten Seh- feldes ist hier, wie bei jedem für mikrophotographische Zwecke be- stimmten Beleuchtungsverfahren unbedingt nothwendig. Das setzt voraus, dass die Oetfnung des CoUectors resp. die hintere Prismen- fläche gleichmässig erleuchtet sei. Fällt das Licht von der Flamme unmittelbar auf den Collector, so trifft dies, einzelne ganz beson- dere Fälle ausgenommen , ohne weiteres zu. Geht das Licht aber erst durch einen Spalt, so ist es anders. Der Spalt entwirft näm- lich — wie jede enge Oetfnung — ein , wenn auch verwaschenes Flammenbild auf der Collectoröffnuug. Soll dieses die ganze Collector- öffnung bedecken, so muss entweder die leuchtende Fläche ziemlich gross sein oder sich dicht hinter dem Spalt befinden , beide Forde- rungen sind aber nicht immer zu erfüllen. Ausserdem würden aber auch alle Unregelmässigkeiten in der Helligkeit der liclitstrahlenden Fläche — bei engem Spalt weuigsteus — in diesem Bilde und da- mit auch in dem in der Objectebene liegenden Bild des CoUectors sichtbar werden. Um dies zu vermeiden , entwerfe ich durch den sogenannten Spaltcollector ein schwach vergrössertes Flammenbild auf dem Spalt. XVI, 1. Kühler: Beleuchtunjjsapparat für gleiclimässige Beleuchtung. 27 Dadurcli wird einmal der Spalt hinreichend gleichmässig beleuchtet, und dann kann er kein Flammenbild mehr auf dem CoUector ent- werfen, sondern nur noch ein Bild von der Oeffnung des SpaltcoUectors, das genügend gleichmässig hell, und — ausreichenden Durchmesser des SpaltcoUectors vorausgesetzt — auch hinreichend gross ist, um die Oetinung des CoUectors gleichmässig zu beleuchten. Besonders hohe Anforderungen an den Correctionszustand des SpaltcoUectors werden nicht gestellt, eine Zusammensetzung auf zwei einfachen Plan- oder Biconvexlinsen genügt. Die Brennweite darf nicht zu gross sein, sonst wird der Apparat zu sperrig. Die Einstellung verschiedener Farben. Der Apparat soll gestatten, innerhalb der durch die Absorption der angewandten Medien gezogenen Grenzen jeden beliebigen Farbenbezirk des Spec- trums zu benutzen. Zu diesem Zweck muss er um einen , der Zer- streuung des Prismas entsprechenden Winkel drehbar sein. Bequem ist es, wenn das von dem Prisma entworfene virtuelle Bild der CoUectoröffnung , das ja in die Objectebene projicirt wird, dabei seinen Ort nicht ändert. Diese Forderung ist hinreichend genau er- füllt, wenn die Drehungsachse durch das Prisma hindurchgeht. Zur Bestimmung der Wellenlänge des angewandten Lichtes kann man die Scala des Sectors auf Wellenlängen aichen, mit Sonnenlicht unter Benutzung der FRAimHOFER'schen Linien oder mit Hülfe von einigen charakteristischen Emissionspectren. Man fängt das reelle Spectrum zu diesem Zweck nicht auf einem Schirm auf, sondern beobachtet es mit Hülfe eines in geeigneter Weise aufgestellten Fadenkreuzoculars. Durch Drehen des Spectralapparats kann man dann die einzelnen Linien nach und nach auf das Fadenkreuz einstellen und die er- forderliche Drehung z. B. in Bezug auf die D-Linie als Ausgangs- punkt mit Hülfe der Theilung des Sectors bestimmen. Ich habe meinen Apparat so mit Hülfe der stärkeren FRAUN^HOFER'schen Linien geaicht und nach den Messungen eine Wellenlängenscala angefertigt, die das Einstellen einer bestimmten Farbe mit ausreichender Genauigkeit gestattet, wenn man nach den Seite 13 gegebenen Anleitungen verfährt. Der Umstand, dass der ganze Apparat mitsammt der Licht- quelle gedreht werden muss , ist ein Fehler der Vorrichtung , ich sehe aber keinen praktischen Ausweg. Eine Verschiebung des Spaltes senkrecht zur optischen Achse , wie sie bei dem Hartnack' sehen Apparat angewandt ist , gestattet natürlich auch keine feste Auf- stellung der Lichtquelle , sie müsste mit dem Spalt und dem Spalt- collector zugleich verschoben werden. 28 Köhler: Beleuchtungsapparat für gleichmässige Beleuchtung. XVI, 1. Die Einstellung auf die verschiedenen Farben könnte aueli durch Drehen des Prismas bewirkt werden , und auf den ersten Blick scheint es, als ob man dann alle übrigen Theile fest aufstellen könnte. Das ist aber in Folge besonderer Eigcntliümlichkeiten der durch Prismen erzeugten Bilder nur dann möglich, wenn der Strahlengang wie beim Spectroskop und Spectrometer telecentrisch ist. Den Spalt hätte man also in der Brennebene des CoUectors aufzustellen, der dann die Rolle der CoUimatorlinse spielen würde ; das bei jeder Stellung des Prismas in unendlicher Entfernung entstehende vir- tuelle Spectrum wäre dann durch eine zweite, vor dem Prisma auf- gestellte Projectionslinse in der Bleudenebene des Condensors reell abzubilden. Diese Linse würde das Objectiv des Spectrometerfern- rohres vertreten. Ich glaube aber doch nicht, dass eine derartige Einrichtung eine Verbesserung des Apparates bedeuten und seine Handhabung wesentlich erleichtern würde ; denn abgesehen davon, dass so noch eine neue Linse hinzukäme , wäre man auf einen ein- zigen, der Brennweite der Projectionslinse gleichen Abstand zwischen Mikroskop und Spectralapparat beschränkt, für jeden anderen Ab- stand hätte man eine andere Projectionslinse zu verwenden. Ausser- dem wären Verschiebungen und Verzerrungen des CoUectorbildes unvermeidlich. Zum Schluss möchte ich noch darauf hinweisen , dass sich der Apparat, wenn man ihn mit Quarzlinsen und Quarzprisma ausstattet, iu Verbindung mit einem Mikroskopcondensor aus Quarz dazu eignen würde, mit ultraviolettem Licht zu arbeiten. Die mir hier zur Ver- fügung stehenden Hülfsmittel gestatten mir leider nicht. Versuche in dieser Richtung anzustelleu. ^ö [Eingegangen am 13. April 1899.] XVI, 1. Mayer u. Schoebel: Neue Messerhalter der Firma R. Jung. 29 Neue Messerlialter der Firma R. Jung, Von P. Mayer und E. Schoebel in Neapel. Hierzu zwei Holzschnitte. Seit einigen Jahren achtet mau genauer auf die Grösse der Neigung des Messers gegen die Horizontale. In der That lassen sich die meisten Objecte, wenn die untere, plane Fläche des Messers horizontal oder nur wenig abwärts gerichtet ist, nicht ordentlich schneiden: statt dass die Schneide in den Paraffinblock eindringt, um eine Scheibe von der gewünschten Dicke abzutragen, biegt sie sich gern nacli oben, und nun gleitet das Messer über den Block bin und drückt ihn, wenn der Schlitten sehr schwer ist, etwas zu- sammen oder hebt einen leichteren Schlitten ein wenig aus den Schienen. Beim nächsten Versuche zu schneiden wiederholt sich dies, auch wenn man die Mikrometerschraube vorwärts gedreht hat, und das kann so lauge dauern, bis der Block genug gehoben ist, um der Schneide das Gleiten unmöglich zu macheu; aber dann er- hält man oft nicht nur einen Schnitt von der mehrfachen Dicke, sondern die Schneide biegt sich nun im Block nach unten, und so resultirt ein Keilschnitt, der meist ganz unbrauchbar ist. Dieser Uebelstand ist längst bekannt,^ und man hat ihm da- durch schon einigermaassen abgeholfen, dass man die Messerhalter von vornherein absichtlich für eine geringe Neigung des Messers construirt hat; ferner kann man — dies ist allerdings weniger be- kannt — die Neigung des Messers dadurch um einige Bogengrade vermehren, dass man es mit der concaven Fläche nach unten ein- spannt. Noch besser sind natürlich Halter, die die Neigung des Messers zu variireu gestatten, und solcher giebt es mehrere. In- dessen scheinen uns sämmtliche bisher angegebene Modelle dieser 1) S. die ausführliche Discussion dieses und ähnlicher Punkte bei ApAthy, St., Ueber die Bedeutung des Messerhalters in der Mikrotomie (Med. Nat. Mitth. Siebenbürgen 1897), dessen Auseinandersetzungen uns in den meisten Fällen das Richtige zu treffen scheinen. 30 Mayer u. Schoebel: Neue Messerhalter der Firma R. Jung. XVI, 1. Art^ entweder zu unbequem in der Handhabung zu sein oder nur eine zu geringe Neigung zu erlauben oder beim Neigen des Messers eine starke Verschiebung des Objeets in der Höhe nöthig zu machen — kurz nicht das zu leisten, was sie sollten und könnten. Auch wir hatten vor Jahr und Tag einen Halter construirt, der in gewisser Beziehung ganz neu war und uns auch befriedigte, besonders nach- dem ihn die Firma Jung uns vortrefflich ausgeführt hatte. Indessen haben wir von seiner Publicirung und Empfehlung Abstand genommen, da der von Jung selbst erdachte, von uns nur in Einzelheiten modi- ficirte Halter uns noch vortheilhafter erscheint. Dieser grosse JuNG'sche Messerhalter (er wird in den Preislisten als Modell l bezeichnet Averden) ermöglicht die Drehung des Messers um die Schneide als gedachte horizontale Achse in aus- giebigster Weise. Das gewährt den bedeutenden Vortheil, dass das Object auch bei der stärksten Veränderung der Neigung der Messer- fläche nur ganz unmerklich gehoben oder gesenkt zu werden braucht. 1) So der Halter f von Jung (Preisliste von 1895, No. 129; diese Zeitschr. Bd. XH, 1895, p. 444), der von Hesse (Diese Zeitschr. Bd. XIV, 1897, p. 13) und der von Apäthy (ibid. p. 157 u. 332) ; bei letzterem wird übrigens die Neigung durch Keile zu Wege gebracht, die untergeschoben werden, also keinen integrirenden Bestandtheil des Halters bilden. XVI, 1. Mayer n. Schoebel: Nene Messerhalter «ler Firma R. Jung. 31 so dass einige Umgänge der Mikrometerschraube hierzu volhuif aus- reichen. Jung hat dabei als typisch Messer von etwa 34 mm Breite angenommen. Noch breitere dürften kaum in Gebrauch sein, und uin nun auch schmälere mit demselben Effect verwenden zu können, lialx'H wir hinten am beweglichen Theil des Halters ein Paar Schräubchen (Figur 1, d) angebracht, die um etwa 5 mm hervor- gedreht werden können, mithin Breiten bis zu 29 mm hinab zu corrigiren gestatten. Geneigt wird das Messer nach Lösung der beiden starken Klemmschrauben j)}? durch die Schraube a; hat die Neigung das gewünsche Maass erreicht, das mau an der Gradtheilung bequem ablesen kann, so zieht man die beiden Schrauben pp wieder an und erhält so das Messer unverrückbar fixirt. Zum Einspannen des Messers ist nur eine, aber sehr kräftige Schraube (e) vor- gesehen. Der Schlitz im Halter ist auf unseren Wunsch so weit gemacht worden, dass selbst Messer von über 10 mm Dicke am Rücken noch hineingehen. Anderseits gewähren die drei ebenfalls von uns angegebenen Basalschrauben , nämlich die unpaare bjJ und und das Paar ba, ba die Möglichkeit, auch dünue Klingen, ja selbst Basirmesser zu verwenden. Die drei Basalschrauben ba, ba und bj) haben noch eine andere gute Eigenschaft : mau kann mit ihnen sehr ausgiebig die Neigung des Messers verändern, nämlich durch Höhersehrauben von bj) sie vermehren, durch die gleiche Bewegung von ba sie ver- ringern. (Natürlich muss das geschehen, bevor mau das Messer einspannt.) Beides wird allerdings selten nöthig werden, denn in der Regel genügen die 16^ der Verstellbarkeit durch Schraube a vollauf; 6 bis 8^ davon dürften der Norm entsprechen, während die höheren oder niederen Grade für die Ausnahmefälle reichen. Da aber bei 0^ der Theilung nur die plane Unterfläche des Messers genau horizontal liegt, nicht etvv^a auch die untere angeschliffene Facette der Schneide, so kann man sich der Basalschrauben be- dienen, um letztere horizontal zu richten, bevor man die Schraube a zu Hülfe nimmt. — Endlich dienen die beiden vorderen Basal- schrauben (ba, ba) dazu, die Schneide der Länge uacli genau hori- zontal zu stellen, was unter Umständen, namentlich bei grossen Objecten, von Werth sein kann. Um noch mit ein Paar Worten die Beschreibung des neuen Halters zu vervollständigen, so sei erwähnt, dass in der Figur 1 e, bp, ba der bewegliche Theil ist, der sich an dem graduirten Stücke — es ist ein Abschnitt eines Hohlcylinders — durch Drehen der 32 Mayer u. Schoebel: Nene Messerhalter der Firma R. Jung. XYI, 1. Schraube a verschieben lässt und durcli die Spiralfeder (bei s) wieder in seine frühere Lage zurückgebracht werden kann. Der feste Theil des Halters wird wie gewöhnlich auf dem Messerschlitten angeschraubt. Der Preis des Halters beträgt 25 Mark. Wesentlich billiger (nur 8 Mark), allerdings auch nicht so universell in seinen Leistungen, wie der eben beschriebene, ist der einfache Halter (Modell (/, Figur 2). Bei ihm erhält die plane ünterfläche eines JuNo'schen Messers von selbst eine Neigung von etwa 8*^ nach unten, und diese genügt meist; spannt man das Messer verkehrt ein, so er- höht sie sich auf etwa 12*^. Dies sind aber auch die beiden ein- zigen Möglichkeiten zur Aenderung der Neigung. Festgeklemmt wird das Messer ebenfalls mit nur einer Schraube. Die Basalplatte ist zu einem Dreiecke abgeschrägt und stösst daher, auch wenn das Messer schmal ist, nicht gegen das Object. Für Rasirmesser ist dieser Halter nicht verwendbar , dagegen für alle gewöhnlichen und die ganz dicken Klingen. Auf unseren Wunsch liefert Jung diesen Halter auch mit den fünf Schräubchen [d, d, bp, ha, ha) des grossen Halters. Wir sind der Ansicht, dass dieses Modell (7^), da es die Neigung des Messers enorm zu variiren gestattet , also einen Theil der Vorzüge des grossen besitzt , dem einfachen {g) wesentlich überlegen ist , und empfehlen es daher sowie Avegen des relativ geringen Preises (9 Mark) Allen, denen der grosse Halter zu theuer ist. [Eingegangen am 25. März 1899.] XVI, 1. Joi'(l;in: Apparat zur Orientirung kleiner mikrosk. Objecto. 33 [Aus der Zoologischen Station zu Neapel.] Ein neuer Ai)parat zur Orientirung kleiner mikroskopischer Objecte. Von Stud. phil. H. Jordau in Neapel. Hierzu zwei Holzschnitte. Den Anlass zu dieser Mittlieihmg gab die mir gestellte Auf- gabe, Selachier- Embryonen von diirchschnittlicb 2 mm Länge, die auf ihrer Umwacbsungshaut waren, so zu schneiden, dass mindestens der Kopf sagittal getroffen wurde. Ueber die Orientierung kleiner Objecte liegt eine zahlreiche Litteratur vor, von der ich das Wichtigste unten angebe.' Sehen wir von der SAMTER'schen Methode ab, welche speciell für kugelige Objecte beschrieben wird, so bleibt uns eigentlich nur die Hoff- MANN'sche zu besprechen, da sie im Grunde nur eine Verbesserung der früheren, diese überflüssig macht. Wie bekannt, verfährt Hoff- MAXN so : er nimmt eine Glasplatte mit eingravirten Orientirungs- liuien, bringt auf diese das mit Nelkenöl - Collodium durchtränkte Object in einen Tropfen gleicher Flüssigkeit und orientirt durcli Strömungen in genanntem Medium , die er mit Pipetten hervorruft. Dann wird das Ganze in Xylol gebracht und mit Paraffin umschlossen. Ich bin überzeugt , dass diese Methode für ganz kleine kugelige Objecte (also für solche, wie sie Hoffmann braucht) ganz vorzüg- liche Dienste leistet, bei Objecten der Art, wie ich sie zu behandeln habe, ist sie so wenig wie alle anderen citirteu zu brauchen. Wir ^) Besonders: Woodworth, W.McM., (Bull. Mus. Comp. Zool. vol. XXV, 1893, no. y, p. 45; vgl. diese Zeitsch. Bd. XI, 1894, p. 31)-, Field und Martin (Diese Zeitschr. Bd. XI, 1894, p. 11): Samter (Diese Zeitschr. Bd. XIH, 1897, p. 441); Patten (Diese Zeitschr. Bd. XI, 1894, p. 13); Hoffmann (Diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 312); Schydlowski (Diese Zeitschr. Bd. XIII, 1896, p. 200). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVI, 1. 3 34 Jordan: Apparat zur Oricntirunji: kleiner raikrosk. Objecte. XVI, 1. wollen ganz davon absehen, ob es ratlisiun ist, Embryonen von 2 mm lind mehr Länge mit Nelkenöl-Collodinni zn dnrclitränken ; in erster Linie ist es nnmögiich , sie innerhalb eines Tropfens in der Lage zu halten, in der man es wünscht. Ja, wenn die Sagittal- ebene der Embryonen immer etwa senkrecht zu der der Umwachsungs- haut wäre ! Dies ist jedoch eine seltene Ausnahme ; meist bilden genannte Ebenen einen ganz l)eliebigen Winkel mit einander, nn^^^j „ ,.^^i^ ,^^^>-^^^^.-^^i-^^^i^7) sehr nahe kommt, hellt es vegetabilische Präparate so stark auf, dass die Zellmembran darin l)einahe unsichtbar wird. Das Chlorphenol eignet sich also in erster Linie zur Isolirung des P 1 a r i s a t i n s 1) i 1 d e s organischer Präparate, indem Structur- und Farbbilder darin beinahe zum Verschwinden gebracht werden. Es zeigt im übrigen die wertlivollen entwässernden Eigenschaften des Phenol ; es hat vor diesem den Vortheil, dass es bei einer weit niedrigeren Temperatur krystallisirt. Ein kleiner Nachtheil des Chlor- plienol ist sein an Jodoform erinnernder Geruch, welcher an Händen und Kleidern sehr lange haften bleibt. Die zarten Gewebeelemente werden durch das Chlorphenol nicht contrahirt-, die Zellwand quellt es auch nicht auf. Die Farbe des Chlorophylls bleibt darin ziemlich gut erhalten. Diese wertlivollen Eigenschaften des Chlorpheuols haben mich bewogen, es in Verbindung mit Chloral und Milchsäure anzuwenden. 5. eil 1 )• a l c li lorphe n o l. B e r e i t u n g s we i s e : Chloralhydrat wird in das gleiche Gewicht p-Monochlorphenol unter Erwärmen aufgelöst. Dicke ölige Flüssigkeit, mit Wasser mischbar. Ni, = 1-5491 Anp-e =-0.01567 (bei 12" C). Besitzt die Eigenschaften des Chlorphenol, )virkt aber in höherem Maasse wasserentzieheud und aufhellend. Eignet sich, wie das erste Medium, zum Sichtbarmachen des Nucleus und der Nucleusstructur. Erlaubt ebenfalls frische und wasserreiche Präparate in Balsam ein- zuschliessen ; die Technik ist ganz dieselbe wie bei Chloralphenol. Zum Präpariren von Zell- und Gefässkryptogamen hat es mir ganz vorzügliche Dienste geleistet. Auch für Phanerogamen- und thierische Präparate dürfte es sich sicher als vorzügliches Aufhellungs- und entwässerndes Mittel empfehlen. 6. Lactu c h l o r p h e n o l. Bereitungsweise: p-Monochlorphenol 2 Theile , Milchsäure 1 Theil, werden zusammengemischt. Bietet vor dem Lactophenol, XVI, 1. AiiKinn: Neue Beobachtungsmedion. 43 dessen J^igenschaften es sonst besitzt, den Vorzug günstiger Brechungs- verhältnisse: yj^= 1-5265 AnF-c = 0-01174 (bei 12" C). Quollt die Zelhvand etwas auf und contrahirt den Zellkern ziemlich stark. 7. Cltlorall a ctoclilo rp lie.no l. B e r e i t u n g s w e i s e : Gleiche Gewichtstheile p-Mouochlorphenol, Chloralhydrat und Milchsäure werden zusammengeschmolzen und gemischt. Brechungsverhältnisse : Xn= 1-4995 AnF-c== 0-0 1221 (bei 12« C). Höher brechend und stärker aufquellend und aufhellend als Lactochlorphenol und Chlorallactophenol. Präparate, welche in Bal- sam eingeschlossen werden sollen, müssen, nach der Einwii-kung des Chlorallactochlorphenols, mit Chloralchlorphenol entwässert werden. Die Technik ist ganz dieselbe wie bei Chlorallactophenol. Für sehr zarte und delicate Präparate , wie Fadenalgen etc., empfiehlt sich, eine schonendere Zwischenbehandlung mit Mischungen der beiden Medien und des Chloralchlorphenols mit Balsam einzuschalten. 8. KiLpfermedien. Wo besonderes Gewicht auf die Erhaltung der grünen Farbe der Präparate gelegt wird , kann dies durch einen geringen Zusatz von Kupferchlorid, in der Form einer concentrirten wässerigen Lösung und im Verhältnisse von ungefähr 2 pro Tausend zu obigen Medien leicht erzielt werden. Versuche mit Mischungen der neuen Medien mit Glyceringelatine sind im Gange, und werde ich später darauf zurückkommen. 9. Chinolin. Zum Schluss möchte ich noch auf das Chinolin als Beobach- tungsmedium mit relativ hohem Brechungsindex aufmerksam machen. Die optischen Constanten dieses Körpers habe ich wie folgt bestimmt : 44 Dimmer: Eine Modification der Celloidinserienmethode. XVI, 1. N„ = 1-6248 Auk_c = 0-0;}009 (bei 12« C). Es eignet sich gut z. H. für Diatomaceenpräparate. Da es sioli selir langsam vertiüclitigt , bleiben damit angefertigte provisorische Präi)arate bei geeigneter Aufbewahrung ohne jeglichen Verschluss sehr lange in gutem Zustande. Ein Nachtheil des Chinolins ist sein durchdringender Geruch. Lausanne, im April 1899. [Eingegangen am 2. Mai 1899.] Eine Moditication der Celloidinserienmethode. Von Dr. F. Dimmer, Professor der Augenheilkunde in Innsbruck. Das Verfahren, das ich im Folgenden beschreiben will, hat mir für in Celloidin eingebettete Präparate dann sehr gute Dienste ge- leistet , wenn dieselben bereits in toto vor dem Schneiden gefärbt waren, oder wenn es sich darum handelte, die Schnitte behufs Fär- bung der Markscheiden der Nervenfasern nach Weigert oder Weiüert- Pal zu behandeln. Für den letzteren Zweck hat man sich bestrebt, Methoden zu ersinnen , bei denen die Schnitte nicht wie bei der ursprünglichen WEiGERx'schen Celloidinserienmethode zwischen zwei Schichten von CoUodium eingeschlossen, sondern auf der einen Seite freigelassen und so der Einwirkung der Färbeflüssigkeiten zugäng- licher gemacht werden. Nach Obregia^ übergiesst man bekanntlich grössere Glasplatten mit einer Zuckerlösung, belegt die so präpa- rirten Glasplatten mit den Schnitten und überschüttet diese mit einer Photoxylinlösung , nach deren Erstarren die Platte in Wasser ge- bracht, wodurch der Zucker gelöst und die die Schnitte enthaltende Photoxylinschicht von der Glasplatte abgehoben wird. ') Obregia, A., Serienschnitte mit Photoxylin oder Celloidin (Neurol. Centralbl. 1890, No. 10). XVI, 1. Di mm er: Eine Alodification der C'elloidinserienmethode. 45 Ich luibe mui statt der Ziickerlösiing eine Gelatinelösung ver- wendet , was mir in vieler Beziehung vortlicilhafter erscheint. Es werden etwa IG g Gelatine in oOO g warmen Wassers gelöst, ^lit dieser Lösung werden grössere Glasplatten, die vorher etwas er- wärmt worden sind, in nicht zu dünner Schicht Übergossen und dann, mitglichst horizontal gelagert und vor Staub geschützt aufbewahrt, bis die Gelatineschicht vollkommen getrocknet ist, was bei gewöhn- licher Zimmertemperatur einen bis 2 Tage braucht. Man bereitet in dieser Weise gleich eine grössere Anzahl von Glasplatten, da sie jedenfalls mehrere Tage vor dem Gebrauche aufbewahrt werden können. Die Schnitte werden nun auf die gewöhnliche Weise mit Stücken Ciosetpapier vom Messer abgenommen und einzeln oder mehrere auf einmal auf die mit der eingetrockneten Gelatinelösung bedeckten Glasplatten aufgelegt und mit TOprocentigem Alkohol feucht erhalten. Ist eine Glasplatte ganz mit Schnitten bedeckt, so werden dieselben noch ein- eventuell zweimal mit einem grösseren, die ganze Platte bedeckenden Stück Ciosetpapier an die Glasplatte gut angedrückt und damit gleichzeitig der Alkohol abgetrocknet. Zur Bezeichnung der Glasplatte oder der einzelnen Schnitte verwendet man kleine Stücke Seidenpapier, auf denen die betretfeuden Nummern mit Tusche notirt sind. Dieselben werden nach Befeuchtung mit TOpro- centigem Alkohol gleichzeitig mit den Schnitten an die Glasplatte angedrückt. Dann übergiesst man die Schnitte mit Photoxylinlösung (Photoxylin 6 g ; absoluter Alkohol und Aether ää 100 cc). Ist diese etwas angetrocknet, so wird die Glasplatte in ein Gefäss mit Wasser von 50 bis 55*' C. gelegt, nachdem man nocli früher die Photoxylin- schicht unweit vom Rande der Platte mit einem scharfen Messer eingeritzt hat, um dem warmen Wasser den Zutritt zu der Gelatine- schicht zu ermöglichen. Im Wasser heben sich nun die Pbotoxylin- platten meist leicht von den Glasplatten ab und können mit einem grösseren Stück Ciosetpapier aufgefangen und in die Hämatoxylin- lösung gebracht oder eventuell der Aufhellung mittels Carbolxylol zugeführt werden. Sollte sich das Photoxylin nicht rasch vom Glase ablösen, so ist es am besten, die Glasplatte nach einiger Zeit in ein zweites Gefäss mit Wasser von derselben Temperatur zu übertragen und dasell)st durch mehrere Stunden , eventuell bis zum nächsten Tage zu belassen. Das Verfahren ist leicht und bequem auszuführen ; das Ueber- giessen der Glasplatten mit Gelatine gelingt leicht, und das Ein- 46 Jordan: Nachtrag zu „Technische Mittheilungen". X^'I, 1. trocknen derselben braucht nicht allzu lange Zeit. Auch verschieben sich die Schnitte, wenn sie nur gut an die Gelatineschiclit angedrückt worden sind, beim Uebergiessen mit Photoxylin gar nicht. Wie ein- gangs bereits erwähnt, ist der hier beschriebene Vorgang aber nur für in toto gefärbte Präparate, oder solche, bei denen die WEiGEUT'sclie Färbung der Nervenfasern angewendet werden soll, geeignet. Bei anderen Tinctionsverfahren stören häufig kleine gefärbte Gelatinereste die Deutlichkeit des Präparates. [Eingegangen am 30. März 1899.] Nachtrag zu „Technische Mittheilungen". Von Stud. phil. H. Jordan in Neapel. U e b e r die Brauchbarkeit einiger ätherischer l) e 1 e in der mikroskopischen Technik.^ Ich gebe in meinen Tabellen „lieber die Brauchbarkeit einiger Oele" Oleum cajuputi viride und Oleum cajuputi album als in jeder Beziehung brauchbar an, und thue das daraufhin, dass ich eine ganze Reihe von Schnitten in angegebener Weise in genannte Oele übertragen und zum Theil bis zu 3 Tagen darin gelassen habe. Ich muss jedoch berichten, dass bei beiden Oelen in der praktischen Verwendung in einigen Fällen Lösung des Celloidins vorgekommen ist. Wodurch dieser Unterschied begründet ist , vermag ich nicht anzugeben , vermuthe jedoch, dass das Celloidin der letzgeuannten Fälle nicht demjeingen gleich war, welches mir bei meiner Untersuchung diente. Auffällig ist ferner, dass Lösung häufig nach Anwendung der Bindegewebs- färbung nach Calleja eingetreten sein soll. Bemerkt sei noch, dass Oleum Linaloes sich trefflich bewährte. Anmerkungsweise möchte ich darauf aufmerksam machen, dass ') Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 50. XVI, 1. Jordan: Nachtraj? zu „Technische Mittheilun^en". 47 Carnoy und Lebrux^ Essence Cajepiit als Lösnnfj'smittel für ('ellni'din, •welches mit absolutem Alkohol (hirclitränkt ist , anf^'ebeu. In wie fern eine Aehnliolikeit zwischen dieser und unserem Oleum caje])uti ist, weiss ich nicht. ^) Carnoy, J. B., et Lebrun, H., La fecondation chez rAscaris mega- h.cephala (La Cellule t. XIII, 1897, fasc. 1, p. 11). [Eingegangen am 3. Mai 1899.] 48 Referate. XVI, 1. Keferate. 1. Lehr- und Handbücher. Leiss, C. , Die optischen Instrumente der Firma R. F u E s s , deren B e s cli r e i b u n g , J u s t i r u n g und An- wendung. Leipzig (Engelmann) 1899 m. 283 Figg. u. 3 Tfin. In dem vorliegenden Werk hat der Verf. es unternommen , die in der I. Abtheilung der FuESs'schen Werkstätten hergestellten wissen- schaftlichen Instrumente im Zusammenhang und eingehend zu be- schreiben. Es werden beschrieben im I. Abschnitt : 8 p e c t r o m e t e r und Refractometer (Spectrometer , Attribute zu den Spectro- metern , Universalspectrometer , Apparat zur Beleuchtung mit homo- genem Licht, Totalreflectometer und Refractometer), im II. Abschnitt : S p e c t r p h 1 g r a p h i s c h e Apparate (Quarzspectrographen, Vacuumspectrograph, Hülfsinstrumente zu den Spectrographen, Spectro- graphen mit RowLANü'schen Concavgittern j , im III. Abschnitt: Ap- p a r a t e zum St u d i u m u n d zur Demonstration p h y s i k a - 1 i s c h e r Vorgänge in k r y s t a 1 1 i s i r t e u und amorphen Körpern (Wärmeleitung in Krystallen, Pyroelektricität, Einwirkung mechanischer Kräfte auf amorphe Körper und Krystalle), im IV. Ab- schnitt : K r y s t a 1 1 g r a p h i s c h e und mineralogische Ap- parate (Goniometer, Polarisations- und Achsenwinkelapparate, Uni- versalapparat [Neuconstruction] für krystallographisch-optische Studien, Absorption des Lichtes in Krystallen , Mikroskope für physikalische und mineralogische Studien), im V. Abschnitt: Präparate und Utensilien für I n t e r f c r e n z e r s c h e i n u n g e n , und K r y - XVI, 1. Referate. 49 st a Ilp la 1 1 (' 11 , im VI. Abschnitt: Schneide- im d Sclileif- apparate und deren H ü 1 t's u t en s i 1 i e n zur Herstellung von optischen Präparaten, im VII. Abschnitt: Ilülfs- instrumeute für physikalische Untersuchungen (Llir- werkheliostaten, Kathetometer und Ablesefernrohre, verschiedene HiUfsinstrumeute) und im VIII. Abschnitt: Projections- und mikro photographische Apparate. Obwohl die meisten der hier beschriebenen Apparate seit länger bekannt oder in den letzten Jahren beschrieben sind , so ist doch die Literatur recht zerstreut, und es dürfte daher Vielen diese über- sichtliche Zusammenstellung willkommen sein. Die hier beschriebenen Neuerungen an Mikroskopen für mineralogische Untersuchungen sind in dieser Zeitschrift regelmässig besprochen worden. R. Brauns. Bowllill, Th. , Manual of bacteriological technique and special b acteriology. Edinburgh (Oliver a. Boyd) 1899. 273 pp. w. 100 i\gg. BowHiLL hat ein neues Lehrbuch der Bacteriologie geschrieben. Xach einer kurzen Einleitung werden zunächst Classification und Morphologie der Bacterien , danach die Sterilisationsmethoden ab- gehandelt. Dann folgen in Theil 1 die Methoden der bacteriologiscli- mikroskopischen Technik. In Theil 2 werden die Nährmedieu und ( 'ulturmethoden beschrieben ; Theil 3 behandelt die specielle Bacterien- kunde, Theil 4 die Pilze, Theil 5 die Hefen, Theil 6 Protozoen. Anhangsweise ist ein kurzer Abschnitt über Photomikrographie bei- gegeben. Auf 105 Abbildungen im Text (theils Holzschnitte, theils Zinkographien) und auf 4 Tafeln CoUotypien sind die wichtigsten Apparate und Mikroorganismen dargestellt. Leider lassen manche der Abbildungen doch noch viel zu wünschen übrig. Das liegt wohl z. Th. an der Reproduction, z. Th. aber sicher an den Negativen und namentlich daran, dass die zur photographischen Aufnahme bestimmten Präparate nicht sorgfältig genug ausgewählt sind. Nach des Verf.'s Photogrammen zu urtheilen, scheint seine Orcein - Geisselfärbungs- methode selbst in seiner Hand keine besonders schönen Resultate zu geben. Mit renommirten, ähnlich angelegten, deutschen bacteriolo- gischen Werken wie Günther und Heim lässt sich das BowHiLL'sche Buch keinesfalls vergleichen. Czapletvski (Köln). Slater, Ch., a. Spitta, E., An atlas of bacteriology con- taining oue hundred and eleven original pho- Zeitschr. f. wias. ilikroskopie. XVI, 1. 4 50 Referate. , XVI, 1. t om i crogr apli s witli exp 1 n ii a t or y text. London (Sei. Press) 1898. 120 pj). Slatkr nnd Spitta geben nach Muster des I'raenkel und PFEiFFEii'schen Atlas der Bacterienkunde einen Atlas der Bacterio- logic, in welchem durch 110 Photogramme nach Bacterienpräparaten und Culturen die wichtigsten Mikroorganismen, welche in bacterio- logischen Cursen vorgeführt zu werden pflegen, mit kurzem begleiten- den Text geschildert werden. Bis auf ganz wenige Nummern sind die Mikrophotogramme ganz hervorragend scliön, trotzdem zur Re- production nur Zinkographie, allerdings auf besonderen Tafeln, Ver- wendung fand. Um solche gute Resultate zu erzielen und die vielen Schwierigkeiten ihrer Aufgabe zu überwinden, müssen die Verff. vor- zügliche Präparate, einen trefflichen mikrophotographischeu Apparat und eine brillante photographische Technik besitzen. Das sehr hübsch und gediegen ausgestattete Werk sei Interessenten bestens empfohlen. Cxapleivski (Köln). 2. Präparationsmethoden im allgemeinen. Hageotte, J. , Note sur un nouveau microtome ä cer- veau (Compt. Reud. de la Soc. de Biol. [10] t. VI, 1899, p. 202—203). Verf. giebt eine kurze Notiz über eine neue Mikrotomconstruc- tion , welche Dumaige (Constructeur - opticien , 3 rue des Poitevins, Paris) nach seinen Angaben hergestellt hat. Das Messer wird an beiden Enden auf einem Schlitten fest gespannt, welcher auf zwei Bahnen zu beiden Seiten des Objectes läuft. Der Objecthalter ähnelt dem des GuDDEN'schen Mikrotoms. E. Schoehel (Neapel). Wermel , M. B. , Kombinirowanny sspossob fikssazii i okrasski mikrosskopitschesslcich preparatow [ C m b i n i r t e F i x i r u n g s - und F ä r b u u g s m e t h o d e für mikroskopische Präparate] (Medizinskoe Obos- renie 1897, p. 829—833). Verf. bespricht zunächst die bis jetzt vorhandenen Methoden, um Präparate auf dem Deckglas oder Objectträger zu härten oder zu färben. Eine der bequemsten Fixirungsmethodeu besteht in dem XVI, 1. Referate. 51 (Ireimaligen Durchziehen des Ulijectträgers durch die IJuusentiauiuie. Für viele Präparate ist dieses Verfaliren ausreichend, niclit dagegen für Blut, Eiter, llarnsedimente. wenn dieselben auf Gonokokken hin g-etarbt werden sollen. Allerdings hat Mamurowsky^ auch Uhit- präparate in der Hitze mit gutem Erfolge fixirt, doch ist die Technik hierbei sehr schwierig und erfordert viel Uebung, noch mehr I)ei den Harnsedimenteu. Die Methode von Ehrlich ist gut, aber sehr mühevoll und zeitraubend und liat deshalb keine weite Ausbreitung gefunden. Nikiforow"^ hat vorgeschlagen, das auf den Objectträger aufgestrichene Präparat in einer Mischung von absolutem Alkohol und Aether zu gleichen Theilen in 20 bis 30 Minuten zu fixiren. Diese Methode ist gut und erfordert verhältnissmässig wenig Zeit. Es muss aber der Alkohol sehr wasserfrei und das Mengenverhältniss zu dem des Aethers sehr genau sein ; namentlich muss man ein Uebermaass des Aethers vermeiden. Ist dieses Verhältniss nicht genau richtig, so tritt keine gute Fixirung ein, wie Wlassow'^ schon gefunden hat. Wlassow* empfiehlt, die Präparate in erwärmtem Gel zu fixiren (dreiviertel bis eine Stunde in Oel von 120 bis 130^, 1 bis 3 Minuten in Oel von 150*^). Diese Methode ist ausserordent- lich mühsam und noch zeitraubender als die von Nikoforow und er- giebt dabei keine besseren Resultate. Benario'' empfiehlt, die Prä- parate für eine Minute in einprocentige alkoholische Formaliulösung zu tauchen. Die Anweudungsweise ist die folgende : Von dem käuf- lichen 40 Procent Formaldehyd enthaltenden Formol wird eine lOpro- centige wässerige Lösung hergestellt, von dieser letzteren eine 10- procentige alkoholische. Die Flüssigkeit muss jedesmal frisch bereitet werden , die Präparate verbleiben in ihr eine Minute und können direct ohne Abtrocknen in die Farblösung (Eosin, Hämatoxylin) ge- bracht werden. Verf. hat die letztere Methode benutzt, da sie als die am wenigsten mühsame und am schnellsten gehende erschien und gleichzeitig sehr gute Resultate lieferte. Gefärbt wurden die Prä- ^) Mamurowski, Ssbornig' sstatei posswiaschtscheny prof. J. F. Kleixx (Medizinskoe Obosrenie 1892, Xo. 18, p. 267). -) NiKiFOROW, M. , Kratki utschebnik mikrosskopitschesskoi teohniki. 4. Isd. p. 18G. ^) Wlassow, G., Nowy spossob fikssazii krowi (Trudy moskowsskago, Terapewtitschesskago obschtchesstwa 1896, p. 78). ■*) Wlassow, G., 1. c. p. 77 ff. ^) Benario, Deutsche med. Wochenschr. 1895, p. 572; vgl. Limbeck, Orundriss einer kUnischen Pathologie des Blutes, p. 374. 4* 52 Referate. XVI, 1. parate uacli Gabritschewski. -^ Zuerst erhielt Verf. hierbei Nieder- schläge von Methylenblau in Form eines blauen Staubes. Nach vielen Versuchen gelang es indessen, eine gute Blutfärbung zu erhalten. Hierfür war es uöthig , die Präparate , nachdem sie eine Minute in der FormoUösung verweilt hatten, mit einem reichlichen Wasserstrom abzuwaschen, sie abzutrocknen und dann zu färben. Verf. ver- wandte übrigens nicht jedesmal, wie er ausdrücklich bemerkt, eine frisch bereitete Fixirungsflüssigkeit, sondern eine Menge von 100 cc, welche in dem Maasse erneuert wurde , als er sie verbrauchte. In gleicher Weise wie das Blut wurden auch Präparate aus dem Secret der Harnröhre und von Harnniederschlägen fixirt. Da diese Methode so gute Resultate ergab, versuchte sie Verf. dadurch zu vereinfachen, dass er die Fixiruag und Färbung zusammenzog. Er untersuchte zu diesem Zwecke eine ganze Reihe von Farbstoffen in FormoUösung. Es zeigte sich dabei , dass alle untersuchten Farbstoffe sich gut in Formol lösten, ausser Fuchsin, welches in Formol ausfällt. Der Er- folg dieser Farblösungen war ein sehr guter: Die Elemente wurden nicht nur gut fixirt, sondern gleichzeitig auch tadellos gefärbt. Be- sonders gut gelingt die Färbung der Harnsedimente. Die Krystalle sowohl wie die geformten Elemente bleiben völlig unverändert, die Färbung ist dabei auffallend gut. Auf dieselbe Weise wurden auch gute Färbungen von Mikroorganismen erhalten. Aus irgend einer Reincultur wurde etwas auf den Objectträger aufgestrichen, dann Trocknen an der Luft, Aufgiessen des in Formol gelösten Farbstoffes auf den Objectträger. Nach einigen Minuten, resp. bei Erwärmung schon nach einer Minute gründliches Abwaschen des Präparates mit Wasser , dann Abtrocknen , Beobachten unter dem Mikroskop. Die Präparate zeigten sich immer gut gefärbt und hafteten fest am Object- träger. Die Mikroorganismen waren sämmtlich abgetödtet, wovon sich Verf. durch Versuche überzeugte. Als die besten empfiehlt Verf. die folgendem Formolfarblösungen : 1) Methylenblau F A: Methylenblau, gesättigte alkoholische Lösung . . . 30 cc Formol, 2-5procentige wässerige Lösung 100 „ In Bezug auf die Concentration des Farbstoffes entspricht diese Lösung der LöFFLER'schen. In dieser Mischung verbleiben die Prä- ^) Gabritschewski , G. N. , Otscherk normalnoi i patologitschesskoi morfologn krowi, p. 7. XYl, 1. Referate. 53 parate (ist das Präparat auf den 01»jectträger gestrichen, so werden die Farblösungen auf diesen aufgeträufelt) 5 bis 8 Minuten, dann Abwaschen in Wasser, Abtrocknen, Balsam. Diese Farblösung wurde als Universalfärbemethode benutzt; sie stand in keiner "Weise der von LöFFLER oder Kühne angegebenen nach, übertraf sie dagegen insofern bei weitem, als sie keine vorausgegangene Fixirung erforderte. 2) Eosin F: Eosin (bläulich), einproc. Lösung in GOprocentigem Alkohol 100 cc Formol, lOprocentige wässerige Lösung 20 „ Will mau hiermit Blut färben, so verfährt man in folgender Weise : 1) Aufstreichen des Blutes auf den Objectträger mittels Karten- papiers. 2) Das Präparat wird an der Luft getrocknet und für 2 Minuten in dem aufgeträufelten Farbstofi" gelassen. 3) Abgiessen des überflüssigen Farbstoffes. 4) Auf das nicht abgetrocknete Prä- parat träufelt man für 2 Minuten Methylenblau F B. b) Gründliches Abwaschen in Wasser , Abtrocknen , Balsam oder Aufträufeln eines Tropfens Immersionsöls ; dann bedeckt man das Präparat mit einem Deckglase. Ea tritt nicht nur die morphologische Structur der Erythro- cyten und Leukocyten hervor, sondern auch die der Plasmodien. Spirochäten etc. 3) Methylenblau F B: Methylenblau, gesättigte wässerige Lösung . . 1 Th. Formol, 4procentige wässerige Lösung .... 1 „ Färbung für Eiter oder Gonokokken (Neisser) im Harn Sediment. Methode: 1) Das auf den Objectträger auf- gestrichene und an der Luft getrocknete Präparat wird für 2 Minuten mit Eosin F übergössen. 2) Gründliches Abwaschen in Wasser. 3) Methylenblau in gesättigter wässeriger Lösung (ohne Formol, vor der Anwendung verdünnt mit Wasser im Verhältniss von 1 : 3j 30 Secunden. 4) Gründliches Abwaschen in Wasser. 4) Gentiauaviolett F (zur Färbung nach Gram) : Gentianaviolett, lOprocentige alkoholische Lösung . 10 cc Formol, 2-5procentige wässerige Lösung 100 „ Methode : 1) Gentianaviolett V 5 Minuten, bei Erwärmung noch weniger (1 bis 2 Minuten). 2) Jod-Jodkaliumlösuug 2 Minuten. 3) Ent- färbung in lOprocentiger, alkoholischer (95procentiger) Lösung von Aceton (nach Nicolle). 4) Abwaschen in Wasser. 5) Contrast- färbung (Bismarckbraun 30 Secunden). 6) Abwaschen in Wasser 54 Referate. XVI, 1. und Trocknen. — Zu bemerken ist, tlass die Conceutration des For- raols keine grosse Rolle spielt. Man kann 2 bis 5 Procent anwenden. Ist das Formol verraucht, so wird zu der Farblösung etwas frisches Formol hinzugesetzt , dann kann die Lösung wieder von neuem ver- wandt werden. — Alle Farblösungen in Formol müssen in dunkeln Gefässen gehalten werden. Schieffoxlecke}' (Bonn). Saint -Hilaire, Ueber einige mikrochemische Reac- tionen (Zeitschr. f. physiol. Chem. Bd. XXVI, H. 1, 2, 1898, p. 102—109). Verf. hat versucht, eiue Methode zum Nachweis der Harnsäure in loco zu linden. Die Methoden waren folgende: 1) Die in Alkohol gehärteten, in Celloidin eingebetteten Präparate wurden geschnitten, und die Schnitte kamen für einige Stunden in eine 10- bis öprocen- tige Kupfersulfatlösung , dann direct für eine bis 2 Minuten in eine siedende gesättigte Lösung von Natriumbisulfit. Hierdurch wird die Reduction des Kupferoxyds und damit die Bildung des schwer lös- lichen harnsauren Kupferoxyduls bewirkt. Dann nach sorgfältigem Auswaschen Behandlung mit einer Lösung von Ferrocyankalium. Dieselbe Reduction gelingt auch gut , wenn das unfixirte Organ für einige Zeit direct in eine heisse Lösung des Natriumbisulfits, welche mit soviel Kupfersulfat versetzt ist, dass kein Niederschlag entsteht, gelegt wird. Darauf wird das Organ ausgewaschen, zerzupft oder in Schnitte zerlegt, die mit Ferrocyankalium behandelt werden. 2) Die Schnitte werden in eine alkalische Kupferoxydullösung gebracht, welche durch Auflösung von Natriumhyposulfit , Seignettesalz und Kupfersulfat (nach dem Recept von Arthaud und Butte) ^ bereitet und zu der ein Zusatz von Natriumcarbonat gemacht war, um eine schwach alkalische Reaction hervorzurufen. Nach sorgfältigem Aus- spülen in Wasser wurden die Schnitte in Ferrocyankaliumlösung übertragen. Die beiden Methoden geben fast gleiche Resultate. Die Harnsäureconcremente sind roth gefärbt. An einigen Präparaten machte Verf. nun die Beobachtung, dass auch das Chromatinnetz der Zellkerne gefärbt war. Es lag der Oedanke nahe , dass hier die Alloxurkörper, welche sich aus dem Nuclei'n abspalten, die Ur- sache der Reaction waren, was sich auch bestätigte. Die durch die Kupferoxydulreaction erhaltene Kerufärbung war aber sehr un- l)eständig. Es zeigte sich , dass sie constanter wurde , wenn die 1) Maly, Jahresber. f. Thierchem. Bd. XX, p. 180. XVI, 1. Keferate. 55 Natriumcarbonatlösung n a e li der Mischung von Arthaud gebraucht wurde. Audi wenn man an Stelle der AiiTHAUD'schen Lösung zu- nächst eine Lösung von schwefelsaurem Kupferoxyd (O'Sprocentig) und dann eine Natriumcarbonatlösung (0*2procentige wässerige oder alkoholische Lösung) einwirken lässt, oder, wenn man die violette alkalische Lösung anwendet, welche man erhält, wenn man Pepton, Histon und andere Stoffe mit Natronlauge und Kupfersulfat versetzt. In heissen Lösungen geht die Reaction schneller und vollkommener vor sich. Kupfersulfat allein giebt nur eine diöuse Färbung, die Gegenwart von Alkali ist also nothwendig. Man kann nach der Kupfersulfatlösung anstatt Natriumcarbonat auch andere alkalische Lösungen anwenden, wie z. B. eine schwache Lösung von Natrium- hydrat. Bei Behandlung mit Alkalien nach Kupfersulfat bekommt der Schnitt einen violetten Farbenton wie bei der Biuretreaction, weshalb Verf. auf den Gedanken kam, direct eine alkalische Pepton- Kupferlösung anzuwenden. Die letztere giebt oft gute Resultate, selbst in dem Falle, wo die zwei ersten Methoden sich als erfolglos erwiesen. Man bekommt dabei Bilder, die lebhaft an eine schöne Carminfärbung erinnern. Das alles beweist, dass die Kernfärbungs- reaction andersartig ist als die oben geschilderte harusaure Reaction. Sie hängt nicht von der Gegenwart des Kupferoxyduls ab, son- dern wird durch Kupfer x y d salz bei Gegenwart von Alkali hervor- gerufen. Wir sind berechtigt, sie als eine modificirte Biuretreaction zu betrachten und zunächst auf diejenigen Bestandtheile der Gewebe zu beziehen^ welche die Biuretreaction geben. Der Umstand aber, dass die Reaction auch manchmal in Kupferoxydullösung vorkommt, kann dadurch erklärt werden, dass manche Kernstoffe (Histon, Pro- tamin) durch Kupferoxydul fällbar sind. Für die Untersuchungen wurden sehr verschiedene Objecto gebraucht, wie: Gewebe von Triton und von Frosch , Niere des Kindes und der Ratte , Thymus des Kalbes, Haut der Ratte, Muskeln und andere Organe des Fluss- krebses, Leber und Zwitterdrüse von Helix und andere. Die meisten dieser Präparate sind sehr gut gelungen. Bei manchen konnte aber auch keine Kernfärbung hervorgerufen werden, wie z. B. bei der Niere von Triton. In diesem Falle war an Stelle des Kernes das Protoplasma gefärbt. Die nähere Untersuchung zeigte , dass der Grund dieser Erscheinung in der Fixirung des Objectes lag. Bei weiterer Untersuchung ergab sich, dass der fragliche Stoff im Kern sich wahrscheinlich in einem gebundenen Zustand befindet. Für die Fixirung kann man sehr viele Lösungen anwenden : Alkohol, Sublimat, 56 Referate. XVI, 1. verdünnte Essigsäure, Clilorwasserstoffsäure, Magnesiumsulfat, Ammo- niumsulfat, Kupfersulfat (lOproeentigj. Wie es scheint, kann der fragliche Stoff sehr leicht aus dem Kern ins Protoplasma übergelieu. Eine rasche Fixirung ist also nothwcndig. In einem grossen Stück, besonders eines compacten Gewebes, kann man oft bemerken, dass in den inneren Schichten das Protoplasma, in den äusseren dagegen der Kern gefärbt ist. Sodann versuchte Verf. an gut fixirten Prä- paraten (z. B. mit Alkohol) vor der Kupferbehandlung den fraglichen Stoff zu lösen. Es gelang dies durch Mineralsäurelösungen ; besonders gut aber dann , wenn die Schnitte etwa 5 Minuten der Wirkung siedenden Wassers ausgesetzt wurden. Nach der Säurewirkung (10 Minuten) lässt der Kern noch ein zartes Chromatinnetz mit feinen, rothen Körnchen erkennen. Nach der Extraction mit heissem Wasser bekommt man keine Kernfärbung mehr, ebenso wenig nach dem Kochen mit schwachen Säurelösungen. In diesem Falle färbt sich gewöhnlich das Protoplasma anstatt des Kernes. Das Chromatin wird aber bei diesen Einwirkungen nicht gelöst und kann leicht mit Hämatoxylin gefärbt werden. Die Auflösung des die Kupferreaction gebenden Körpers wird auch durch warmes (60^ oder 3.5°) und selbst durch kaltes Wasser bewirkt (24 bis 48 Stunden). Verf. führt noch weitere Reactiousbilder an, wegen deren auf das Original ver- wiesen werden muss. Er zieht aus den Reactionen den Schluss, dass die Kernfärbung nicht von Adenin oder anderen Alloxurbasen abhängt , wie man vermuthen könnte , da diese nur mit Kupfer- oxydul unlösliche Verbindungen geben und sich in Alkalien mehr oder weniger leicht lösen. Dagegen spricht vieles für das Histon, welches, wie weitere Reactionen beweisen, in den untersuchten Ge- weben wahrscheinlich als Nucleohiston vorliegt. Schiefferdecker {Bonn) . Zacharias, E., lieber Nachweis und Vorkommen von Nuclein (Ber. d. Deutschen Botan. Gesellsch. Bd. XVI, 1898, p. 185 — 198). Gegenüber den Angaben Heine's,^ dass Salamander -Spermato- zoenköpfe und Mitosen sich durch 1- bis l^/.^stündige Pepsinverdauung völlig auslaugen lassen, und dass dabei von den Chromosomen nur die PlastinhüUeu übrig bleiben, hat Verf. schon früher- hervor- 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIV, 1897, p. 48. 2) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIV, 1897, p. 121. XVT, 1. Referate. 57 ut'liobcu , dass bei den von ilim ausj^eführten Verdauungsversuclien das „Kernniiclein" weder quillt noch sich löst. Lediglich gewisse Eiweissstoft'e gehen in Lösung. Diese können demnach vom Keru- nuelein auf mikrochemischem Wege scharf unterschieden werden.^ Ebenso wenig wie die üblichen Farbstofflösungen darf die Ver- (lauungsüüssigkeit als allgemeines Reagenz auf Zellkerne betrachtet werden, nur als ein Reagenz aut bestimmte in den meisten unter- suchten Zellkernen nachgewiesene Substanzen. Das von Miescher- angewandte „Verfahren zur vollständigen und sicheren Isolirung der Kerne der Hodenzellen (des Lachses), das auch bei anderen Ge- weben verwendbar ist'', führte bei den vorläufigen Versuchen des Verf. mit pflanzlichen Zellkernen nur zu negativen Resultaten. Bei Behandlung mit einer Lösung von krystallisirter Galle oder taurochol- saurem Natrium und Chlorcalcium sah Miescher das gesammte Proto- plasma der untersuchten Hodensubstanz verschwinden und nur die Zellkerne intact bleiben. Die Versuche des Verf. mit taurocholsaurem Natrium (Grübler) und Chlorcalcium (Merck), sowie glykochol- saurem Natrium führten nicht zu entsprechenden Resultaten. Verdauungsversuche mit Lachssperma ergaben in allen Fällen, dass die Kopfhüllen der Spermatozoon, welche der Sitz der Nuclein- säure sind, nicht gelöst werden. Dieselbe Widerstandsfähigkeit zeigten die Nucleinkörper in den Kernen der Epidermiszellen von Arum itali- cum. Spiritusmaterial und frische Ptiauzentheile verhalten sieh in diesem Punkte gleich. Tingirt man die Epidermiszellen nach mehr- stündiger Einwirkung der Verdauungsflüssigkeit mit Methylenblau- Fuchsin S , so färben sich die Nucleinkörper intensiv blau , die Plasmareste hell rosa. Spermatozoen von Triton taeniatus wurden mit einer aus Hunde- magen gewonnenen Verdauungsflüssigkeit (nach Klug'^) behandelt. Die Köpfe blieben deutlich couturirt, niemals erschienen sie aus- gelangt. Vom Mittelstück blieb nur eine feine Membran übrig. „Da das Mittelstück vom Ceutrosom abgeleitet wird, dürfte es von Werth sein, zu betonen, dass die chemische Beschaffenheit des Mittelstücks nach obigem von derjenigen der untersuchten Kerngerüste und auch 1) Betreffend die vom Verf. angewandte Verdauungsflüssigkeit vgl. Botan. Zeitg. Bd. XXXIX, 1881, p. 1G9 ff". '-) Miescher, Physiologisch-chemische Untersuchungen über die Lachs- milch. Leipzig 1896, p. 50. ^) KluCt, Untersuchungen über Pepsinverdauung (Pfltjger's Arcli. f. d. ges. Physiol. Bd. LX, 1895). 58 Referate. XVI, 1. der Nucleolen wesentlich abweicht." Abweichungen zeigten auch Versuche mit Mcthylenbhiu-Fuchsin S. An frischen Spermatozoon, die auf drei Stunden in 0"28procentige Salzsäure gebracht worden waren, färbten sich in der g-enannten Farbstotflösung nur die Köpfe rein himmelblau , die übrigen Formbestandtheile färbten sich roth , be- sonders intensiv das Mittelstück. Ueber die Wirkung von glaubersalzhaltigen Methylgrünlösungeu auf Sperma hat Verf. schon früher Mittheilungen veröffentlicht.^ Neue Versuche mit lebendem Lachssperma ergaben eine völlige üeber- einstimmuug im Verhalten der Kopfhüllen der frischen Spermatozoon und der Zellkern-Chromatinkörper. Lässt man die Methylgrünlösung (auf 100 g Wasser 10 g Glaubersalz „puriss. cryst. pro analysi" Merck und 1 g concentrirte Essigsäure) beispielsweise auf frische Blattepidermis von Tradescantia sp. einwirken, so quellen bei vielen Kernen nach 4 Stunden die Chromatinkörper deutlich auf, ihre Um- risse sind oft gar nicht mehr zii erkennen. Bei den Spermatozoen verquillt der Kopf; Schwanz, Mittelstück und Centralstäbchen bleiben unverändert und ungefärbt. „Diese Lösung, welche die Spermatozoen- schwänze so scharf couservirt, dürfte mit Erfolg für die Untersuchung derjenigen Substanzen zu verwenden sein, welche Strasburger unter dem Namen Kinoplasma zusammengefasst hat." Die Nucleolen enthalten kein Nuclein. Die entgegengesetzten Angaben anderer Forscher konnte Verf. nicht bestätigen. Die Nach- prüfung der von Carnoy ^ beschriebenen Versuche mit Batrachier- eikerneu ergab, dass die Nucleolen durchaus nucleinfrei sind. Als Reagenz diente die von Carnoy empfohlene Methylgrünessigsäure. Die abweichenden Resultate , zu welchen neuerdings Mitzke- wiTSCH^ und andere Forscher gelangt sind, sprechen nicht für die von diesen angewandten Methoden. Trotz allen Raffinements ist die bevorzugte Mikrotom- und Tinctionstechnik nicht geeignet , die ge- wünschten Aufschlüsse zu bringen, wenn nicht andere Arten der Untersuchung mit ihr combiuirt werden. Küster {Charlottenburg). Laslett, E. , Note on a modification of the Weigeut- Pal method for paraffin sections (Lancet 1898, 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIV, 1897, p. 121. -) Carnoy, J. B., et Lebrun, H. , La cltodierese de l'oeuf. La vesi- ciile germinative et les globales polaires chez les Batraciens (La Cellule t. XII, fasc. 2, 1897, p. 191). *) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 511). XA'T, I. Referate. 59 Aug; vgl. Xeurul. Ceutralbl. Bd. XVII, 1898, No. 24, p. 1129). Die Methode ist die folgende: 1) 14tägige Härtung in Ml'lleu- sclier Flüssigkeit ; 2) Einlegen kleiner Stücke von 2 mm Dicke in MARCHi'sche Flüssigkeit für eine Woche ; .3) Auswaschen und Paraffin- einbettung; 4) Aufkleben der Schnitte auf den Objectträger mit Wasser; 5) Nach Entfernung des Paraffins 12stündiges Färben in Essigsäure - Hämatoxyliulösung ; 6 ) Behandlung nach der PAL,'schen Methode. Schiefferdecker {Bonn). Lord, J. R., A new Nissl method (Journ. Mental Sei. 1898, Üct.; vgl. Neurol. Centralbl. Bd. XVII, 1898, No. 23, p. 1088 — 1089). Ein Stück ganz frischen Gehirns von etwa 2 cm Dicke nebst adhäreuter Pia lässt man auf dem Mikrotom anfrieren, so dass die Pia nach dem Beobachter gerichtet ist ; etwas Gummi erleichtert das Frieren. Die angefertigten Schnitte kommen sofort in Wasser, werden mit einem Objectträger aufgenommen, dann mit etwas Pikro- formol (gesättigte wässerige Lösung von Pikrinsäure mid 6proceutige, wässerige Formollösung zu gleichen Theilen) übergössen , so dass der Schnitt anf dem Fixirungsmittel schwimmt. Nach 5 bis 15 Se- cnnden kommt der Schnitt in Wasser zurück. Wieder mit dem Objectträger aufgenommen, wird er mittels einer Pipette mit einer O'öprocentigen, wässerigen NissL'schen Methyleublaulösung (Methylen- blau Patent B) in derselben Weise beträufelt wie vorher mit Pikro- formol. Dann Erwärmung bis die erste Blase aufsteigt; Abkühlung. Der üeberschuss der Farbe wird abgewaschen und eine lOproceutige Lösung von Anilinöl in absolutem Alkohol über den Schnitt gegossen bis keine Farbe mehr heraustritt. Abtrocknen mit Fliesspapier, dessen Oberfläche glatt sein muss. Zur Aufhellung wird Origanumöl auf- geträufelt und wiederum mit Fliesspapier entfernt. Die letzten Reste des Oeles werden mit Benzin beseitigt. Die Einbettung in Colo- phonium geschieht folgendermaassen : Etwas Colophonium wird in einer Porzellauschale geschmolzen unter Zufüguug einer nur geringen Menge von Benzin; das geschmolzene Colophonium wird mittels eines Glasstabes auf den Schnitt gestrichen, dann wird ein Deckglas dar- über gelegt und so lange erwärmt, bis es die richtige Lage hat (das Erwärmen geschieht auf einer dünnen Asbestplatte, welche auf einem Drahtgeflecht auf einem Dreifuss über einer Bunsenttamme ruht). — Bei der Benutzung der Gefriermethode wird die beim Härten er- 60 Referate. XVI, 1. folgende Sclirumpfuiig der Nervenzellen vermieden , das Fett der- selben wird nicht aufgelöst wie beim Gebrauch von Alkohol; die fettige Degeneration lässt sich daher genauer verfolgen. Innerhalb 30 Minuten nach dem Tode kann ein solches Präparat hergestellt werden. Der Inhalt des Gewebes lässt sich eingehend studiren, Neuroglia und Blutgefässe sind deutlich gefärbt. — Das Pikroformol eignet sich überhaupt gut zur Fixirung; von Präparaten, die einige Wochen darin gelegen haben, kann man Gefrierschnitte machen und färben. Bei der Methode von Lewis kann man zur Fixirung statt Osmiumsäure auch Pikroformol verwenden. Verf. hat mit seiner Methode unter anderem auch die fettige Degeneration der Nerven- zellen genau studirt. Die der Verfettung verfallende Substanz färbt sich erst dunkelblau, dann dunkelgrün, dann hellgrün und schliesslich gelb. Aber auch in normalen Zellen findet sich Fett als Zeichen des gewöhnlichen Stoffumsatzes oder eines natürlichen Verfalles der Zelle. Man kann die Fettsubstanz auch zur Darstellung bringen, wenn man ein Stück Gehirn in Pikroformol härtet (3 Tage), schneidet und die Schnitte für 12 Stunden in 0*25procentige Osmiumsäure- lösung legt und mit Methylenblau nachfärbt. Schiefferdecker {Bonn). Gothard, M. de, Modifications a la methode de Nissl (La Semaine Med. t. XVIII, 1898, no. 28, p. 230). Der schwierigste Theil der NissL'schen Methode ist die genaue Ditferenzirung der gefärbten Zelltheile. Nach vielfachen Versuchen hat Verf. die folgende Differenzirungstiüssigkeit gefunden : Cajeputöl 40 cc Xylol 50 „ Kreosot 50 >, Alkohol, absolut lt>0 „ Die Flüssigkeit durchdringt leicht die Schnitte , löst das Celloidin, das einer guten Ditferenzirung immer hinderlich ist, da es die Anilin- farbe festhält , und zieht den Farbstofl' überall da aus , wo er nicht besonders festsitzt. Schiefferdecker {Bonn). Harris, H. F., Two new methods of staining the axis- cylinders of nerves in the fresh state. Some m i c r c h e m i c r e a c t i o n s o f t o 1 u i d i n - b 1 u e (The Philadelphia med. Journ. 1898 May 14, p. 1—12). Das Toluidinblau ist chemisch dem Tliionin und Methylenblau XVI, 1. Referate. Gl nahe verwandt. Zu Färbungen sollton nur wässerige Lt>sungen ver- wendet werden. Die vom Verf. angewandten Lösungen scliwankteu in ilirer Concentration zwischen 0"1 und 2 Procent. Letzteres ist eine gesättigte Lösung, Starke Lösungen bieten keinen Vortheil, da die Resultate ganz unabhängig von der Concentration immer dieselben waren. Verf. hat der Farbstotflösung verschiedene Stoffe zugesetzt. Lösungen in Auilinwasser zeigten keinen Unterschied von einfach wässerigen Lösungen. Durch diese wird das gesammte Gewebe gleichförmig blau gefärbt ; nach Ditferenzirung in Alkohol zeigte sich aber, dass der Farbstoff an dem Chromatin der Kerne und dem Protoplasma bestimmter Zellen stärker haftet. Verwendet man sauere Lösungen , so wird nur das Chromatin und das Protoplasma der basophilen Zellen gefärbt. Die Färbung geht nicht so schnell, als wenn andere Lösungen verwandt werden. Ist die Farblösung alka- lisch , so färben sich die Kerne und das Protoplasma aller Zellen, elastisches, collagenes und Muskelgewebe intensiv. Die Färbung geht sehr schnell. Bei Formolzusatz ist die Färbung sehr ähnlich der der Säurelösungen, während Carbolzusatz Bilder ähnlich den alkalischen Lösungen giebt. Die Carbolsäure-Toluidinblaulösung ist sehr zu empfehlen, da sie schnell und intensiv färbt und noch so gründliches Auswaschen in Alkohol verträgt. Sie ist ferner noch insofern eine günstige Mischung , als ihre Reaction , wenn sie nicht sauer , sicher neutral ist. Die gefärbten Schnitte wurden in Lösungen von Sub- stanzen ausgewaschen , welche Toluidinblau fällen. Von diesen er- wiesen sich Ammoniummolybdat und das rothe und gelbe Blutlaugen- salz als gute Beize für die Färbung. Ditt'erenziren kann man ent- weder mit Alkohol allein oder mit angesäuertem (organische oder unorganische Säure 1 bis 2 Procent, Alkohol rein oder verdünnt). Auch wässerige Säurelösungen können angewendet werden, ebenso Anilinöl für sich oder in verschiedenen Mischungen mit Xylol oder Unna's Alaunanilin. Auch Lösungen von Tannin, Creosol und Uxna's Glycerinäther wirken gut. Styron ist für gewöhnlich das beste Difl'e- renzirungsmittel. Sind die Gewebe mit Beize behandelt, so kann eine Differenziruug nur durch die saueren Mischungen, am besten die der Mineralsäuren bewirkt werden. Hat die Beize länger als 1 oder 2 Secunden eingewirkt, so kann der Farbüberschuss auch durch sauere Lösungen nicht mehr genügend entfernt werden. Da- gegen kann, so intensiv die Beizuug auch gewesen sein mag, der Farbüberschuss langsam , aber in sehr electiver Weise durch eine wässerige Lösung von Tannin entfernt werden (gesättigte Lösung). 62 Referate. XVI, 1. — Man kann indessen nicht nur gehärtetes , sondern anch frisches Gewebe mit Toluidinblau färben. Gleich Methylenblau färbt es die Kittsubstanz zwischen Epithelzellen und den Achseucylinder lebender Nerven. Man kann die Lösung- entweder dem lebenden Thier ein- spritzen oder die frischen Gewebstiickehen in Lösungen legen. Zur Nervenfärbung ergaben Lösungen von 1 : 1000 bis 4000 die besten Resultate. Will man Stücke in die Lösung einlegen, so ist die fol- gende Mischung zu empfehlen : Toluidinblau in physiologischer Kochsalzlösung 1 : 1000 . . 2 Th. Ammoniumchlorid, wässerige, 0'25procentige Lösung. . . 1 „ Eiweiss 1 „ Die Lösung muss frisch hergestellt werden; das Gewebsstück darf niemals von der Lösung bedeckt sein, man muss nur von Zeit zu Zeit so viel zusetzen , dass es feucht bleibt. Die Färbung ist ge- wöhnlich in einer halben bis einer Stunde genügend. Am besten hält man die Gewebe während dieser Zeit in einer feuchten Kammer bei etwa 37^ C. Hat die Färbung ihr Maximum erreicht, so muss man sie fixiren , da sie sonst wieder sich abschwächt. Es kommen dabei Methoden zur Verwendung wie bei Methylenblau. Verf. em- pfiehlt speciell die folgende (auch für Methylenblau) : Ist der ge- wünschte Färbungsgrad erreicht, so wird das Präparat in Wasser abgespült und in eine gesättigte Lösung von rothem oder gelbem Blutlaugensalz übertragen, die eine Temperatur von nur wenigen Graden über Null hat. Ein Zusatz von etwas Osmiumsäure ver- hindert eine macerirende Einwirkung. In dieser Lösung verbleibt das Object bei der niedrigen Temperatur 3 bis 24 Stunden. Dann einstüudiges Auswaschen in destillirtem Wasser, Entwässerung in absolutem Alkohol (ebenfalls von niedriger Temperatur) , Aufhellen in Xylol oder Cederuholzöl , Einbettung in Paraffin. Zur Injection des lebenden Thieres verwandte Verf. gewöhnlich gleiche Theile einer Lösung von 1 : 1000 des Farbstoifes und von physiologischer Koch- salzlösung. Etwa eine Stunde nach der Einspritzung wird das Thier getödtet, kleine Stückchen werden ausgeschnitten und der Luft 10 bis 15 Minuten ausgesetzt. In dieser Zeit sind die Nerven gewöhn- lich gefärbt. Die Stücke müssen während dessen in Kochsalzlösung feucht erhalten werden ; Nachbehandlung wie oben angegeben. Die sensibeln Nerven färben sich schneller als die motorischen. Nach Verf. dürfte das Toluidinblau in einigen Punkten dem Methylenblau überlegen sein. So hat Verf. bis jetzt nie Fehlerfolge gehabt , ob- gleich er den Farbstoö' aus zwei verschiedenen Quellen bezogen hat. XVT, 1. Referate. 63 Ferner war es gleichgültig wie alt die Lösung war. Die Gewebe färben sich meist blau, während die Aehsencylinder eine Purpurfarbe annehmen, wodurch sie sich scharf abheben. Diese Farbe wird er- halten und sogar noch verstärkt, Avenn man Ammoniurapikrat zum Fixiren verwendet; sie wird wenigstens erhalten bei Anwendung von gelbem oder rothem Blutlaugensalz, sie verändert sich in Blau, wenn Ammoniummoh'bdat benutzt wird. Auch das Thionin leistete zur Färbung von frischen Nerven nicht nur dasselbe wie Toluidinblau und Methylenblau, sondern war diesen insofern noch überlegen, als das umgebende Gewebe sich nicht zu intensiv färbt. Die Aehsen- cylinder zeigen eine Purpurfarbe , die nicht so intensiv ist wie bei Toluidinblau, die Technik ist dieselbe. — Verf. theilt dann noch einige mikrochemische Pieactionen von Toluidinblau mit: Wie be- kannt, färben Gentianaviolett , Methylviolett, Methylgrün Amyloid- substanzen roth, doch hält sich die Färbung in Balsam nicht. Eine haltbare Färbung ist dagegen die folgende: Schnitte von in Alkohol gehärteten Stücken werden 3 bis 24 Stunden in Carbol-Toluidinblau gefärbt, in Wasser abgespült, 1 oder 2 Secunden in einer Lösung von gelbem oder rothem Blutlaugensalz oder Ammoniummolybdat gebeizt. Die Beize wird mit Wasser abgewaschen, Ditierenzirung in Säurealkohol (einprocentige Lösung von Oxalsäure oder Salzsäure in käuflichem Alkohol, Zusatz von etwa ,50 Procent Wasser zu dem Alkohol schadet nichts) 5 nach der Differenzirung Entwässerung, Auf- hellung und Einschluss. Vor der Entwässerung soll der Schnitt noch einmal mit einer der erwähnten Beizen behandelt werden falls das Präparat viel hellem Lichte ausgesetzt wird. Die Amyloid- substanz färbt sich roth, die übrigen Gewebstheile werden meist in den verschiedenen Abtönungen blau. Die Kerne treten scharf her- vor. Fibröses Gewebe färbt sich mehr oder weniger röthlich, aber niemals so intensiv als Amyloid. Versuche, dieselbe Färbung mit Methylenblau oder Thionin zu erhalten, gelangen nicht. Toluidinblau ist ferner ein specifischer Farbstoff für die Markscheiden von Nerven, die in Chromsalzen gehärtet worden sind. Wie für die WEiGERT'sche Färbung, so ist auch hier nöthig, dass die Präparate so lange in der Chromlösung verweilt haben bis sie braun geworden sind. Die Gewebsstückchen werden gewaschen, entwässert und in gewöhnlicher Weise eingebettet; die Schnitte werden mehrere Stunden in einer alkalischen Lösung von Toluidinblau gefärbt, dann in gesättigter, wässeriger Tanninlösuug differenzirt. Die Markscheiden sind dunkel- graublau , das umgebende Gewebe ist grünlich, die Kerne treten 64 Referate. XVI, 1, scharf hervor. Man kann aiii-h mit einer einprocentigen alkoliolischen Oxalsäurelösung diffcrenziren; dann werden die Bindegewebslnldungen roth, die Marksclieiden schwach gelb, die Achsencylinder dunkelblau. Das Resultat ist ähnlich dem nach der Methode von van Gieson erhaltenen. Soll eine alkalische Farblösnng benutzt werden, so ist besonders eine einprocentige wässerige Boraxlösung zu empfehlen, der ein Procent des Farbstoffes zugefügt wird. Zur Darstellung von Kernen oder basophilen Granulis in den Zellen scheint Verf. Toluidin- blau der beste Farbstoff zu sein. Die Gewebe können in irgend einer der gewöhnlichen Weisen fixirt sein. Die besten Resultate giebt Sublimat; die dem Gewebe noch anhaftenden Sublimatreste dienen augenscheinlich zur Beize. Die Färbung geht daher schnell und ist sehr schön. Die Schnitte können mit irgend einer der oben erwähnten Lösungen gefärbt werden, doch ist die wässerige carbol- saure Lösung die beste. Schnitte, die hierin einige Minuten gefärbt und dann in Alkohol differenzirt sind , zeigen die Kerne und das Protoplasma der basophilen Zellen intensiv blau , während das Protoplasma der Mastzellen stark dunkelroth ist; Bindegewebe und Muskel sind hellblau. Waren die Gewebe in FLEMMixG'scher oder HERMANN'scher Lösung fixirt, so sind die Mastzellen dunkelblau, die Kerne und das Protoplasma der Plasmazellen grünlich. Eine sehr schöne Doppelfärbung erhält man, wenn die Schnitte mit Eosiu oder Benzopurpurin vor der Toluidinblaufärbung behandelt werden. Nach Differenziruug in Wasser oder Alkohol mit Zusatz von ein Procent Säure wird das Protoplasma der Mastzellen glänzend roth, während das Bindegewebe und die Muskeln farblos sind. Wird Oxalsäure so angewandt, so zeigt das Bindegewebe eine schwach röthliche Farbe ; Tanninlösungen geben den protoplasmatischen und intercellulären Substanzen eine gelbe Färbung, während die Kerne intensiv gefärbt bleiben. Diese Methode liefert sehr klare Bilder für die Beziehung der Kerne zu dem Zellprotoplasma. Eine schöne Differenzirung aller histologischen Elemente erhält man bei Anwendung von Styron nach der Toluidinblaufärbung. Bei dieser Differenzirung wird die Farbe aus den glatten Muskelfasern sehr viel laugsamer entfernt als aus dem Bindegewebe, so dass die ersteren immer viel dunkler erscheinen. Bacterien färben sich mit Toluidiublau gut, be- sonders in alkalischer und wässeriger Carbolsäurelösung. Man kann hierbei auch die Beizen verwenden, die ähnlich wie bei thierischem Gewebe wirken. Sehr schöne Resultate ergiebt die Färbung von Ganglienzellen mit Toluidiublau ; die chromophile Substanz färbt sich XVI, 1. Referate. 65 liierbei viel intensiver als mit Methylenblau oder Thionin. Durch naohfolgendc Differenzirung kann man jeden beliebigen Färbungsgrad erreichen. Jene im Hyalin erscheinenden basophilen Körper, die man nach degenerativen Veränderungen so liäufig im Centralnerven- system antrifft, färben sich mit Toluidinblau intensiv. Die Toluidin- blaufärbung ist weit intensiver als die durch Methylenblau oder Thionin und zeigt mehr Neigung zur Polychromie 5 auch lässt sie sich nicht so leicht durch Säuren oder saure Farben entfernen. Toluidinblau hat weniger Neigung, Protoplasma und Bindegewebe zu färben als Methylenblau , während es anderseits nicht ein so reiner Kernfarbstoff ist wie Thionin. Es steht zwischen diesen beiden Stoffen in Bezug auf seine mikrochemischen Eigenschaften in der Mitte. Schiefferdecker {Bonn). 3. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. A. Niedere Thlere. Tsiljitani, J., U e b e r die R e i n c u 1 1 u r d e r A m ö b e n (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXIV, 1898, p. 666—670). Zu seinen Versuchen bediente sich Verf. hauptsächlich folgender drei Arten von Amöben : 1. eine Art der A. lobosa, welche von Heu- infus gewonnen wurde , 2. eine andere Art, welche dem Staube ent- stammt und 3. eine Art aus dem Boden. Diese drei Arten von Amöben entwickeln sich alle auf Nährböden bei Zimmertemperatur, besser jedoch bei Körpertemperatur; Gelatinenährboden wird durch sie verflüssigt. Da die Amöben verschiedene Bacterien verfolgen und fressen, suchte Verf. „sie nach einer schwach widerstandsfähigen Bacterienart abzuleiten und von anderen widerstandsfähigeren Ba- cterien zu trennen." Dazu wurden Cholerabacillen benutzt. Zunächst wurde eine Vorcultur gemacht. Eine Mischung von feingeschnittenem Stroh (30 g), Gigartina prolifera (10 g) und Wasser (1000 g) wird eine Stunde im Dampfsterilisator gekocht und dann durch ein reines Tuch filtrirt. Nach Zusatz von 1 bis 1*5 Procent Agar-Agar wird mit Normalsodalösung das Verhältniss 1 : 100 alkalisirt. Diese Mischung wird nochmals 30 bis 40 Minuten gekocht, in Reagenzgläser vertheilt und sterilisirt. Schliesslich wird amöbenhaltiges Material in das jCondensationswasser des schief erstarrten Nährbodens geimpft. Nach Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVI, 1. 5 66 Referate. XVI, 1. einigen Tagen entwickeln sieli AmiJbcn mit vielen Uacterien auf der NälirbodenMäclie. Weiter wurden auf einen alkalisirten Nährboden aus 1 bis 1*5 g Agar-Agar, 20 g gewöliulicher Nährbouillon und 80 g Wasser, nachdem er liltrirt, sterilisirt und im Reagenzglas scliief erstarrt war, Cholerabacillen gestrichen und in sein Conden- sationswasser Amöben aus der Vorcultur geimpft. Die Cholerabacillen entwickeln sich als eine Linie längs des Striches. Diese Linie wird mit der Zeit vom unteren Theile an allmählich von den Amöben auf- gefressen. Dieser Vorgang lässt sich in der PETRi'schen Schale unter dem Mikroskop genau verfolgen. In der Nähe der Grenzlinie zwischen dem bereits gefressenen und noch nicht gefressenem Theile der Cholerabacillen -Colonie findet man stets zahlreiche Amöben, in dem weiter davon entfernten unteren Theil Cysten. In der Nähe der Grenzlinie giebt es meist nur Amöben. Andere Bacterien, welche mit den Amöben in das Condensatiouswasser geimpft wurden , sind in der Regel dort nicht vorhanden. Sind andere Bacterien gelegent- lich beigemischt, so wiederholt man die gleiche Manipulation. Zur Verhinderung, dass sich andere Bacterien auf die ganze Fläche der Colonie verbreiten, ist zu empfehlen, dass man am 1. Tage die Cultur im Brütofen , dann erst bei Zimmertemperatur hält. Sind verschiedene Arten von Amöben gleichzeitig vorhanden, so kann man die einzelneu Arten leicht trennen, indem man die Amöbencysten mit sterilisirtem Wasser verdünnt, gleichmässig auf die erstarrte Nährgelatine oder Agar verbreitet und unter dem Mikroskop jede Art mit dem Platinspatel herausfischt. Man züchtet auf solche W^eise von anderen widerstandsfähigen Bacterien getrennte Amöben auf die Choleracultur und behandelt sie dann mit Alkali und Säure. Hierbei sterben die Cholerabacillen ab, während die lebendigen Amöbencysten zurückbleiben. Taucht man sterilisirte Seidenfäden in die Misch- cultur von Amöben und Cholerabacillen und trocknet sie im Schwefel- säureexsiccator, so bleiben ebenfalls nur die Amöben lebendig. Auf solche Weise rein isolirte Amöben lassen sich auf den verschiedenen gebräuchlichen Nährböden cultiviren. Impft man die Cyste auf Gelatine- oder Agarnährboden, so entwickelt sie sich zu ihrer vegeta- tiven Form. Eine Vermehrung tritt nicht ein. Solche hat nur statt bei Vorhandensein von lebenden oder abgetödteten Bacterien. Zur Herstellung von Deckglaspräparaten giebt man auf ein reines Deckglas ein Tröpfchen destillirtes Wasser, eine geringe Menge der Amöben- cultur und darauf eine Platinöse voll conceutrirter Lösung von salz- saurem Chinin. Nachdem man sie gleichmässig dünn ausgebreitet XVI, 1. Referate. 07 inid an der Luft getrocknet hat, wird diircli Alkohol-Aether-Misclmng tixirt und wieder getrocknet. Scldieöslich färbt man mit Methylenblau. E. Schoebel {Neapel). Giglio-Tos, E., Une coccidie parasite dans les throm- bocytes de la greuouille (Arch. Ital. de Biol. t. XXXX, 1898, p. 130—137, av. 6 figg. ; vgl. auch: Atti della R. Aecad. delle Scienze di Torino vol. XXXIII, 1898). Das auf den Objectträger dünn ausgestrichene und über der Flamme getrocknete Blut wurde nach der vom Verf. früher beschrie- benen Methylenblau-Methode^ gefärbt. Das wirkliche Cytoplasma der Zellen wird dabei in der Farbe des Preussischblau tingirt, während das Chromatin und die verschiedenen Granulationen sich ultramarin, rosa, violett färben oder auch ganz farblos bleiben. E. Schoebel {Nea2:)el). Zacharias , 0. , Ein neues C o n s e r v i r u u g s m i 1 1 e 1 für ge- wisse Flagellaten des Planktons (Zool. Auz. Bd. XXII, 1899, p. 70—72). Verf. weist auf die leichte Zerstörbarkeit der Familienstöcke von Uroglena volvox hin. Wenn die Plauktonfänge nur einiger- maassen abstehen, findet man nur noch Einzelwesen durch das ganze Wasser zerstreut, während von der Gallertmasse keine Spur mehr zu entdecken ist. Die Uroglena-Kugeln sind auch nicht mit Formol, Chromsäurelösung, IvLEiNENBERG'scher Flüssigkeit, FLEMfflNo'scher Mischung etc. zu conserviren, woraus sich wohl das häufige Fehlen in Plankton bisher erklärt. Verf. ist es gelungen, die Uroglena- Kugeln so zu fixiren, dass sie dann in verdünnter Formollösung oder in Alkohol unversehrt aufbewahrt werden können, und zwar mit einer Mischung aus 2 Voll, concentrirter Borsäurelösung mit 3 Voll, ge- sättigter Sublimatlösimg. Den in einem bestimmten Wasserquantum enthaltenen , ganz frischen Planktonfängen wird ungefähr ein Drittel jenes Quantums von obiger Mischung zugesetzt. Nach etwa Sstün- diger Einwirkungsdauer wird das Material sorgfältig auf dem Gaze- filter ausgewaschen und später in 2procentige FormoUüsung oder in öOprocentigen Alkohol gebracht, der später durch 70procentigen er- setzt werden muss. Die gleiche Conservirungsmethode kann man auf Planktonfänge anwenden, in denen die Colonien von Dinobrj^ou 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIV, 1897, p. 359. 5* 68 Referate. XVI, 1. den HauptbestMiultlieil ;nismachen. Mit den Uroglenen und Dinobryen werden auch die Baeillariaceen gut fixirt. Ebenso vertragen die Loricaten die angegebene Fixirung. Nielit ratlisam dagegen ist es, die kleinen Crustaceen mit dem Borsäuresubliniatgemisch zu behandeln. Für diese bleibt die Chromessigsäure zu empfehlen. E. Sehoebel {Neapel). Hoyer , H. , U e b e r das Verhalten der Kerne bei der Conjugation des Infusors Colpidium colpoda. St. (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LIV, 1899, p. 95—184 m. 2 Figg. u. 1 Tri.). Das Untersuchsmaterial stammte aus einem Heuaufguss , der mehrere Wochen ruhig gestanden hatte. Zur Fixirung diente eine Mischung einer Sublimat- und Kaliumbichromatlösung. Durch zahl- reiche Versuche wurde ermittelt, dass ein Gemisch aus 1 Vol. einer 5procentigen Sublimatlösung und 2 Voll, einer Sprocentigen Kalium- bichromatlösung die besten Resultate liefert. Verf. betont ausdrück- lich , dass dieses Miscliungsverhältniss sich lediglich für Colpidium günstig erweist , für andere Species aber erst wieder genau aus- probirt werden muss. Bei der Fixirung wurde so verfahren , dass die an der Oberfläche des Heuaufgusses gebildete Haut in ein grösseres Reagenzglas, welches das Fixirungsgemisch enthielt, übertragen wurde. Das nach leichtem Schütteln und Stehenlassen nach etwa einer Stunde gebildete Sediment wurde nach Abgiessen der Fixirungsflüssigkeit mit destillirtem Wasser so lange gewaschen, bis keine Gelbfiirbung mehr eintrat, dann nach Alkoholbehandlung in der für solche Objecte üblichen Weise in Paraffin eingebettet. Hat man nur wenig Material zur Verfügung, so empfiehlt es sich, die einzelnen Proceduren des Auswascheus und Einbettens statt im Reagenzglas in einer etwa 5 cm langen, 7 mm weiten Glasröhre, deren eines Ende abgeschlitfen und mit feuchtem Pergamentpapier Überbunden ist, vorzunehmen. Zum Schluss wird die Röhre nicht gesprengt , sondern der Pergament- verschluss abgenommen und der Paraffincylinder vom anderen Ende der Röhre hinausgestossen. Die Objecte liegen nun an einem Ende des Paraffincylinders in dünner Schicht, die bereits eine ebene Be- grenzuugsfläche besitzt. Schneidet man parallel zu letzter die Infu- sorieu-haltige Schicht ab und schmilzt die kleine Platte mit der Kante auf den Objectcylinder oder Aehnliches des Mikrotoms auf, so lassen sich ohne Verlust an Material Schnittserien anfertigen. Zur Färbung der mit Wasser aufgeklebten Schnitte benutzte Verf. sowohl XYI, 1. Referate. 69 (l:is Ehrlich -BiONDi'sclie Dreifarbengemiscli als auch die P2isen- llämatoxylin-Methode von Heidenhaix mit oder ohne Bordeaux -Vor- färbuug. Da bei ersterem Tinctiousverfahreii die cliromatischeu Elemente etwas schwach hervortreten, ist es gerathen, die Präparate erst mit EHRLicn'schem Hämatoxylin leicht vorzufjirben. Mittels dieser Conibination werden die chromatischen Elemente intensiv stahlblau oder violett tingirt, während die achromatische Substanz eine deut- liche rosarothe Färbung annimmt. Ausserdem lassen sich Fremd- körpereinschlüsse leicht von den eigentlichen Zellbestandtheilen unter- scheiden, was bei den nach der HEiDENHAix'schen Methode gefärbten Präparaten oft sehr schwierig ist. E. Schoebel {Neapel). Günther, A., Untersuchungen über die im Magen un- serer Hauswiederkäuer vorkommenden Wim- perinfusorien (Zeitschr. f. wiss. Zool, Bd. LXV, 1899, p. 529—572 m. 2 Figg. u. 2 Ttin.). Bei der Fixirung der Infusorien wurde folgendermaassen ver- fahren : Verf. liess nach Anstechen eines Pansens die Magentiüssigkeit direct in die Fixirungstlüssigkeit laufen. Als solche diente vor allem eine alkoholische conceutrirte Sublimatlösung, heiss oder kalt. Von Farben wurde mit gutem Erfolg Hämatoxylin und Eosin oder Methyl- griin-Eosin angewandt. Behufs Herstellung von Schnitten wurde im Uhrschälchen in Paraffin eingebettet. E. Schoebel {Neapel). Scliaeppi , Th. , Untersuchungen über das Nerven- system der Siphonop hören (Jenaische Zeitschr. f. Naturwiss. Bd. XXXHI, 1898, p. 483 — 550 ra. 11 Figg. u. 7 Tfln.). Vor allen Dingen wurden Macerationspräparate hergestellt unter Anwendung der HERTWia'schen und ScHXEioER'schen Flüssigkeiten (Osmiumessigsäure -Gemische). Zur Färbung wurde bei diesen Prä- paraten entweder BEALE'sches oder Pikrocarmin, vor allem aber und mit bestem Erfolg das langsame Verfahren mit EHRLicn'schem Hä- matoxylin angewendet. Zur Conservirung ausgestreckter Thiere wur- den die LoBiANCo'schen Gemische^ verwandt. Derartige ausgestreckt conservirten Thiere dienten nicht nur zur Einbettung und Herstellung von Schuittpräparaten , sondern vor allem zur Darstellung der ver- schiedeneu Elemente in situ. Eine nachträgliche Maceration an den 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. VIII. 1891, p. 55. 70 Referate. XVI, 1. gleichen Präparaten gelang durch 24- bis .-»Götüncliges Liegenlassen derselben in RANViER'schem Drittelalkohol. E. Schoebel (Neapel). Hesse, R., Untersuchungen über die Organe der Licht- empfindung bei niederen Thieren. 5. Die Augen der polychäten Anneliden (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXV, 1899, p. 446 — 516 m. 5 Tfln.). Die Fixirung mit Sublimat und Sublimat- Essigsäure nach Lang und Färbung mit Hämalaun oder nach Benda's Eisen -Hämatoxylin- methode erwiesen sich als günstige Behandluugsweisen. Fixirung mit Pikrinschwefelsäure gab weniger gute Resultate. E. Schoebel (Neapel). &' Ehlers , H. , Zur Kennt niss der Anatomie und Biologie von Oxyuris curvula Rud. (Arch. f. Naturgesch. Jahrg. 65, Bd. I, 1899, p. 1—26 m. 2 Tfln.). Als Fixirungsmittel bewährte sich am besten heisse gesättigte Sublimatlösung. Die Thiere verbleiben 5 Minuten darin. Die wei- tere Behandlung mit Alkohol muss sehr allmählich geschehen, ebenso das Ueberführen in Chloroform behufs Paraftineinbettung. Nach Xylol- Paraffineinbettung konnte Verf. keine brauchbaren Schnittserien her- stellen. Für Schnittfärbung eignete sich am besten Hämatoxylin. Totalpräparate wurden hergestellt, indem in obiger Weise iixirte Thiere 12 Stunden in Boraxcarmin gefärbt, 5 Minuten in salzsaurem Alkohol ditferenzirt und nach dem Auswaschen in Wasser in Glycerin eingeschlossen wurden. E. Schoebel (Neapel). Hof mann, H., Beiträge zur Kenntuiss der Entwicklung von Distomum leptostomum Olsson (Zool. Jahrb. Abth. f. Syst. Bd. XII, 1899, p. 174—202 m. 2 Tfln.). Um die Cercarien längere Zeit lebend zu erhalten, werden sie nach vorherigem Abspülen mit Kochsalzlösung in eine Eiweisslösung, bestehend aus 90 Th. physiologischer Kochsalzlösung, 10 Th. Hühner- eiweiss mit etwas Campferzusatz, gebracht. Die Thiere halten sich darin 6 bis 7 Tage lebend, ohne Schaden an ihrer histologischen Structur zu nehmen. Die lebenden Thiere wurden unter Deckgläschen mit Wachsfüsschen in Eiweisslösung untersucht (Methode von Looss). Das Object hellt sich allmählich auf und giebt dann für eine kurze Zeit recht klare und scharfe Bilder. Leider währt der Zustand der grössten Deutlichkeit nur sehr kurze Zeit. Conservirt wurden die XVI, 1. Referate. 71 Würmer mit Öprocentiger Sublimatlösung. Um das lästige Krümmen zu vermeiden , wurden sie zwischen zwei Deckgläschen fixirt. Zur Färbung wurden angewandt: Eosin-Hämatoxylin , Orange G-Hämat- oxylin und schliesslich eine modificirte van GiESOx'sche Methode. Vorfärbeu mit Tetrabromtluorescein , Abspülen mit Wasser , Nach- behandeln mit einer Lösung von triphenylrosanilintrisulfosaurem Kalk in concentrirter wässeriger Pikrinsäurelösung 10 bis 15 Minuten, Abspülen mit Wasser, Alkohol, Terpentin, Balsam. Die besten Fär- bungen für Totalpräparate gab Alauncarmin. E. Schoebel (Neapel). Gardiuer , E. G. , Early developmeut of Polychoerus caudatus, Mark (Journ. of Morphol. vol. XI, 1895, p. 155 — 176 w. 2 pltes.). Die frühen Stadien der Segmentation untersucht man am besten frisch. Alle gewöhnlich angewandten Fixirungsflüssigkeiten sind voll- ständig unbrauchbar. Ein zum wenigsten eiuigermaassen brauchbares Gemisch besteht in gleichen Theilen von absolutem Alkohol und Eisessig. E. Schoebel (Neapel). Karawaiew , W. , Ueber Anatomie und Metamorphose des Darmkanals der Larve von Anobiura pani- ceum (Biol. Centralbl. Bd. XIX, 1899, p. 122—130 m. 19 Figg.). Verf. bediente sich zur Fixirung des Materials folgender Methode. Die Larve wird zur Abtödtung für einige Secunden in erwärmtes Wasser von 80^ C. getaucht. Hierauf lässt man sie unter Anwen- dung eines Aetherzerstäubers gefrieren, imd zwar so, dass sie den Bauch nach oben kehrt. Man entfernt dann mit einem scharfen Messer an der Seite der Larve einen dünneu Streifen. Hierauf lässt man die Larve aufthauen und bringt sie in eine der gewöhnlichen Fixirungsflüssigkeiten (hauptsächlich KLEiNENBERo'sche Flüssigkeit während 24 Stunden). Auf diese Weise vermeidet man Dislocationen und Formveränderung. Gefärbt wurde in toto mit alkoholischem Boraxcarmin und Alauncarmin. E. Schoebel (Neapel). Kel)el, H., Zur Kenntniss der Eepir ationsorgane wasserbewohnender Lepidopteren-Larven (Zool. Jahrb. Abth. f. Syst. Bd. XE, 1898, p. 1—26 m. 1 Tfl.). Das Alkoholmaterial musste behufs Paraftiueiubettung ganz all- 72 Referate. XVI, 1. mählich (innerhalb 8 Tagen) in Chloroform übergeführt werden , um Schrumpfungen zu vermeiden. Färbung in toto musste wegen Gefahr der Schrumpfung unterbleiben. „Ein Theil des Materials wurde nach Ueberfiihrung in Chloroform ganz oder in Handschnitten in Glycerin gebettet, wobei bei einzelnen Präparaten eine vorausgegangene Auf- hellung durch Nelkenöl sich als vortheilhaft erwies." [Unsinn! seit wann mischt sich Chloroform oder Nelkenöl mit Glycerin? Ref.] E. Schoebel (Neapel). Friedlliann , F., Ueber die Pigmentbildung in den Schmetterlingsflügeln (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LIV, 1899, p. 88—95 m. 1 Tfl.). Von den beiden versuchten Fixirungsmitteln, Sublimat und Her- MANN'sche Flüssigkeit, erwies sich nur letztere brauchbar, weil nur durch sie die Vorstufen des Pigmentes zur Darstellung kamen. Verf. liess das Fixativ 48 Stunden einwirken. E. Schoebel (Neapel). Hunter, Gr. W., Notes on the finer structure of the ner- vo us System of Cynthia partita (Verrill) (Zool. Bull. vol. II, 1898, p. 99—115, w. 6 figg.). Als Fixation gaben die Flüssigkeiten von Flemsiing, Heioiann und VOM Rath, ferner wässerige und alkoholische Sublimatlösung gleichmässig günstige Resultate. In den ersteren beiden Gemischen blieben die Objecte eine bis 2 Stunden ; in Sublimatlösung von andert- halb bis 6 Stunden je nach Grösse. Kürzere Einwirkungsdauer gab günstigere Resultate. Die vom pAXH'sche Fixation wurde etwas modifieirt. In dem Pikrin-Essigsäure-Platin-Osmium-Gemisch blieben die Stücke eine bis 4 Stunden, wurden dann 6 Stunden in Alkohol ausgewaschen, 24 Stunden mit Holzessig behandelt und vor dem definitiven Aufheben in 95procentigem Alkohol, mehrere Tage in schwachen Alkohol gebracht. So behandeltes Material wurde nach Vorbehandlung mit Xylol oder Bergamottöl in Paraffin eingebettet, dann in 2 bis 3 // dicke Schnitte zerlegt und mit Heidenhain's Eisenhämatoxylin gefärbt. Von anderen Fixirungsflüssigkeiten gab das Gemisch von Lang, Gilson und Perenyi ebenfalls brauchbare Resultate. Chromsäure-, Chromsäure-Essigsäure-, Chromsäure-Salpeter- säure - und Sublimat - Essigsäuregemische erzeugen Schrumpfungen, Vocuolisirung und fibrilläre Structur. Formalin (ausgenommen in sehr schwachen Lösungen), Pikrinsäure-Formalin, und andere Pikrin- säuregemische geben noch schlechtere Resultate. Für die Färbung XVI, 1. Referate. 73 diente im allgenieineu Heidenhain's Eisenliäniatoxyliu mit Safraniu und Ehrlich - BiONDi'schem Dreifarbengemische zur Controlle. Zur Demonstration der cliromophilen Substanz wurde das McCLURE'sche Metliylenblau-Eosin-Gemiscli benutzt ; während zur Darstellung der Struetur der Zellfortsätze starkes Ueberfärben (3 Tage) mit Eisen- liämatoxylin und nur theilweises Ausziehen sehr instructive Bilder lieferte. E. Schoebel {Neapel). JB, WirheltJiieve. Peal)Ody, J. E., The ampullae of Lorenz iui of the S da- ch ii (Zoöl. Bull. vol. I, 1897, p. 163—178 w. 9 figg.). Um den Verlauf der Seitenkanäle zu verfolgen, wurden dieselben zuerst mit Aether ausgespritzt, und dann mit einer mit Preussisch- blau gefärbten dicken Celloidinlösung inficirt. Hierauf kamen die Objecte für einen bis 3 Tage in 20procentige Salpetersäure, bis Haut und umliegendes Gewebe bequem abpräparirt werden konnte. Auch die Nerven lassen sicli gut in so macerirtem Material ver- folgen. Die Präparate wurden in 2procentiger Formalinlösung auf- gehoben. Für histologische Untersuchungen erwiesen sich Hermann- sche Flüssigkeit und Sublimat als die besten Fixirungsreagentieu und Eiseuhämatoxylin mit Orange G als sehr werthvoUes Färbemittel. Ausserdem kam die vitale Methylenblaufärbung zur Anwendung. Nach zahlreichen Versuchen fand Verf. die folgende Operationsweise als die beste. Mittels Subcutanspritze wird bei einen eben abgetrennten, also noch lebeusfrischen Kopf eine 0'05- bis l'öprocentige Lösung von Methylenblau in das gelatinöse Gewebe , welches die Ampullen umgiebt, injicirt. O'l Procent dürfte die günstigste Concentration sein. Nach ungefähr anderthalb Stunde bringt man einzelne Am- pullen unter das Mikroskop. Luftzutritt ist unbedingt nöthig. Fixirt wird am besten nach der etwas modificirten BEXHE'schen Methode, bei der als Fixationsgemisch dient : Ammoniummolybdat lg Wasser, destiUirt 10 cc Wasserstotfsuperoxyd 1 „ Osraiumsäure, einprocentig 1 Tropfen. Abkühlung mit Eis erwies sich als überdüssig. Nach einer Ein- 74 Referate. XVI, 1. Wirkung des Fixatives während einer bis 2 Stunden wäscht man die Objeete 10 Minuten in Wasser, behandelt mit Alkohol steigender Concentration , dann mit Xylol und bettet in Paraffin ein. Nach- trägliche Färbung mit Alauncarmin beeinträchtigt die Methylenblau- tinction in keiner Weise. Auch frisch gefärbtes , nach Gefrieren freihändig geschnittenes Material zeigt verschiedene Verhältnisse in vorzüglicher Weise. Solche Schnittprä parate in verdünntem Glycerin mit Ammoniumprikrat eingeschlossen und eingelackt halten sich mehrere Wochen. E. Schoebel (Neapel). Hopkins , G. S. , On the enteron of american Ganoids (Jouru. of Morph, vol. XI, 189.5, p. 411 — 440 w. 2 pltes.). Das Material wurde in Pikrinsäure -Alkohol (1 Th. Pikrinsäure in 500 Th. eines Gemisches aus gleichen Th. Wasser und 95pro- centigem Alkohol) während einem bis 2 Tagen fixirt, dann für einen Tag in 67procentigen Alkohol gebracht uud in 82proceutigem Alkohol aufbewahrt. Zum Gebrauch wurden kleine Stücke aus verschiedenen Theilen des Darmes ausgeschnitten mit 9 öprocentigem Alkohol 24 Stun- den weiter entwässert, 12 bis 24 Stunden mit Chloroform behandelt und dann in gewöhnlicher Weise in Paraffin eingeschmolzen. Sublimat- fixation gab ebenfalls gute Resultate. Von den verschiedenen brauch- baren Farben gab Hämatoxylin combinirt mit Eosin die besten Resul- tate. Für die Isolirung der einzelnen Muskelsehichteu wurde das Material in 20procentiger Salpetersäure macerirt. Um den Macera- tionsprocess aufzuhalteu, kommen die Stücke nach genügender Locke- rung der Gewebe in eine gesättigte wässerige Alaunlösung mit 2 Procent Chloralhydrat - Zusatz , in welchen sie beliebige Zeit ver- bleiben können. Bei der Isolation der Epithelzellen leistete MüLLLR'sche Flüssigkeit von den versuchten Reagentien die besten Dienste. E. Schoebel (Neapel). Malialanobis, S. C. , Microscopical observations on the muscle fat in the salmon (Government Rep. Fishery Board for Scottland, May 1898. — 6 pp. w. 4 pltes.). Stücke der lateralen Rumpfmusculatur (dorsal und abdominal) von jedem Fische wurden einmal in gesättigter Sublimatlösuug und zweitens in einprocentiger Osmiumlösung 24 Stunden gehärtet, dann gründlich ausgewaschen und in gewöhnlicher Weise in Alkohol ge- härtet. Paraffiueinbettung ; Längs- und Querschnitte von 5 bis 8 jii Dicke. Für die Einbettung wurde Cedernholzöl , Xylol, Nelkenöl, XVI, 1. Referate. 75 Benzol durchprobirt. Xylol erwies sich als das .ij'iinsti^''ste zur Con- servirun^ des Fettes. Aufkleben der Schnitte auf mit Eiweiss be- handelten Objectträgern. Eine Behandlung der Gewebe mit anderen Fixirungsmitteln und spätere Färbung mit Osmiumsäure ergab Un- genügendes. Die in Sublimat fixirten Präparate wurden mit irgend einer passenden Doppelfärbung, wie Hämatoxylin und Eosin oder ^lethylenblau und Eosin behandelt. Das Fett war an diesen Schnitten fast ganz ausgewaschen. Sie dienten zum Vergleich mit den Osmium- präparaten und dazu, die allgemeinen Veränderungen in den Muskeln zu studireu. Die Osmiumreduction in den Schnitten nach Osmium- fixirung Hess die Fettkügelchen in sehr vollkommener Weise hervor- treten, und war nur noch irgend eine einfache Färbung, z. B. Eosin nöthig, um auch andere Details erkennen zu können. Gewebe, welche in Osmiumsäure fixirt sind, sind schwer zu färben. Eosin schien aber zu genügen. Schieferdecker (Bonn). Sewertzoff, A. N., Studien zur Entwicklungsgeschichte des Wirbelt hierkop f es. I. Die Metamerie des Kopfes des elektrischen Kochens (Bull, de la Soc. Imp. des Natural, de Moscou Annee 1898 , p. 197 — 263 m. 4 Figg. u. 4 Tfln.). Die Embryonen wurden in Sublimateisessig (4proceutig) und in Sublimat nach der Methode von Apathy fixirt. Für das jüngere Material diente zur Färbung Boraxcarmin , Alauncochenille (Csokor) und Hämatoxylin nach Kleinenberg; für die späteren Stadien Häma- calcium nach P. Mayer und Alauncochenille. E. Schoehel [Neapel). Adloff, P., Zur Entwicklungsgeschichte des Nagethier- g e b i s s e s (Jenaische Zeitschr. f. Naturwiss. Bd. XXXIII, 1898, p. 347—410 m. 4 Figg. u. 5 Tfln.). Die Behandlung der Objecte war folgende: Entkalkung der Köpfe in 8- bis lOprocentiger Salpetersäure, Doppelfärbung mit Bleu de Lyon und Boraxcarmin und Anfertigung von Froutalschnittserien mittels des Mikrotoms. E. Schoehel {Neapel). Henry, A., Phenomenes de bourgeonnemeut nucleaire degeneratif dans l'osteosarcome (Bibliogr. Anat. t. VI, 1898, fasc. 2, p. 85—91 av. 3 figg.). Kleine Stückchen des Osteosarkoms wurden in FLEiiMiNG'scher 76 Referate. XVI, 1. Fliisöigkeit oder in Sublimat -Kochsalz fixirt. Die Sclmitte wurden gefärbt naeli der Dreifachfärbung- nach FLEMMiNd (Safranin- Gentiana- violett-Orange), mit Safranin-Lichtgrün, Triacidfärbung nach PjHrlich oder der BiONDi-HBiDENHAiN'schen Flüssigkeit, Die Dreifachfärbuug nach Flemming gab die besten Resultate. Schiefferdecker {Bonn). Milialkowics , Y. V., Nasenhöhle und Jakobson' sches Or- gan. Eine m o r p h o 1 o g i s c h e S t u tl i e (Auat. Hefte , H. 34, 35, 1898, p. 1—107 m. 11 Ttln.). Verf. hebt hervor, dass frontale Serienschnitte für die Unter- suchung am günstigsten sind. Als Fixirungsmittel wurde ausser der FiiEMMiNG'schen und HERMANN'schen Flüssigkeit hauptsächlich die ZENKEu'sche verwendet. An erwachsenen Objecten ist das nach- herige Entkalken mit schwacher Salpetersäure (3*5 bis 5 Procent) nothwendig, doch an reiferen Embryonen wegen der nachfolgenden geringeren Tinctiousfähigkeit zu vermeiden. An solchen Embryonen, wo schon Knocheubildung auftritt, hat Verf. es praktisch gefunden, nach der ZENKER'schen Flüssigkeit noch in MüLLER'sche Flüssigkeit einige Zeit einzulegen, da die ZENKER'sche Flüssigkeit so extrahirt wird , und eine Nachbehandlung mit Jodalkohol überflüssig ist. Längere Aufbewahrung in Jodalkohol ist für die Deutlichkeit uud Färbbarkeit uachtheilig. Für Uebersichtspräparate schadet sie nichts. Schiefferdecker {Bonn). Felizet, G., et Branca, A. , Histologie du testicule ecto- pique (Journ. de l'Anat. et de la Physiol. t. XXXIV, 1898, no. 5, p. 589—641 av. 1 piche.). Die Hoden wurden meist in Sublimat und osraiumhaltigen Flüssig- keiten gehärtet. Nach Sublimat und ZEXKER'scher Flüssigkeit Aus- waschen in Wasser und Jodalkohol. Färbung der Schnitte mit Hämatein (Mayer) , dann Eosin uud Orange , oder nach Heidenhain mit Eisenalauu und Hämatoxylin oder in Carbolsäurethionin oder Anilinthionin. Die so gefärbten Schnitte sind oft sehr lehrreich; sie haben den Nachtheil , sich in einigen Wochen zu entfärben , auch wenn sie im Dunkeln aufbewahrt werden. Praktisch ist es, die Schnitte in Balsam ohne Deckglas aufzubewahren, wie bei der Golgi- schen Methode. Solche Schnitte haben die Farbe seit 3 Jahren be- halten. Nachhärtung in FLEMMiNo'scher oder HERMANN'scher Lösung, Paraffineinschluss uud Färbung mit: 1) Kernschwarz und Safrauin (Safranin in gesättigter Lösung in absohitem Alkohol und Safrauin XVT, 1. Referate. 77 in gesättigter Lösung- in Anilinwasser zu gleichen Tlieilen); 2) in Anilinsafranin ; 3) in Gentianaviolett (Bizzozero) ; 4) nach Landel^: Eine sehr bequeme Methode, die darin besteht, den Schnitt in der Wärme bis zum Auftreten von Dämpfen in einer gesättigten, wässe- rigen Lösimg von Säurefuchsin (Kubin S) in Anilinwasser zu be- handeln, in Wasser abzuwaschen, einige Augenblicke in Pikrinsäure- lösung zu tauchen (Pikrinsäure in wässeriger, gesättigter Lösung und Pikrinsäure in gesättigter, alkoholischer Lösung zu gleichen Theilenj, dann Entfärbung (langsam während 24 Stunden) in absolutem Alkohol ; Aufheben in Pialsam. Schiefferdeclxer {Bonn). Ral)l , H. , Beitrag zur Histologie des Eierstocks des Menschen und der Säugethiere nebst Bemer- kungen über die Bildung von Hyalin und Pig- ment (Anat. Hefte, H. 34, 35, 1898, p. 109—220 m. 7 Ttln.). Untersucht wurden die Eierstöcke von Mäusen, Ratten, Meer- schweinchen, Kaninchen, Katzen und Mensch. Die thierischen Eier- stöcke wurden theils in Sublimat, Eisessigsublimat und Pikrinsäure- sublimat, theils in FLEMiMixG'scher oder HsRMANN'scher Lösung üxirt. Die menschlichen Ovarien waren meistens in Alkohol gehärtet, nur einige durch Operation gewonnene in Sublimat, ZEXKER'scher oder FLEMMixG'scher Flüssigkeit. Die thierischen Ovarien wurden , ohne vorher in kleine Stücke zertheilt zu werden, in Serienschnitte zer- legt. Aus den menschlichen wurden nur einzelne Stücke heraus- geschnitten. Da sich Verf. hauptsächlich mit der Bildung des gelben Körpers beschäftigte, so wurden dementsprechende Ovarien verwandt. Schnitte von Alkoholpräparaten und solchen aus den verschiedenen Sublimatgemischen wurden mit Hämatoxylin oder Hämalaun und Eosin gefärbt. Regelmässig wurde ferner das Pikrinsäure - Säurefuchsin von VAN GiESOx angewendet. Die in FLEMMixo'scher und Hermanx- scher Flüssigkeit fixirten Präparate färbte er theils mit Safranin, theils mit Eisenhämatoxylin (hiermit auch einige von den in Sublimat gehärteten Eierstöcken) in der Weise , die Verf. früher schon be- schrieben hat. Auch Zerzupfung von frischen Ovarien in physio- logischer Kochsalzlösung wurde ausgeführt. Behandlung der in den Corpora lutea vorkommenden Pigmentzellen auch mit Ferro- cvankalium und Salzsäure , dabei nachträüliche Kernfärbuug mit ^) Landel, These de Paris 1897. 78 Referate. XVI, 1. Mayer's Carmalaun. Das Pigment wird dann intensiv blau gefärbt, die Pigmentirung- wird also durch einen eisenhaltigen Farbstotf be- wirkt. Scliiefferdecker {Bonn). Unger, E., Beiträge zur Anatomie und Physiologie der Milchdrüse (Anat. Hefte, H. 32, 1898, p. 151—225 m. 2 Tfln.). Verf. untersuchte die Milchdrüse während der Lactatiou bei Meerschweinchen, Katzen, Hündinnen, Kaninchen, denen etwa 1 cm grosse Drüsenstücke durch aseptische Operation entnommen wurden. Ausserdem wurde möglichst frisches Material vom Menschen unter- sucht. Was die Fixation anlangt, so hat Verf. anfangs jedes Prä- parat, um Quetschungen zu vermeiden, mit scharfen Instrumenten in kleinere Stücke zerlegt, und diese in Alkohol, Sublimat, 0"5- bis ein- proceutiger Chromsäure, FLEMMiMG'scher Lösung, lOprocentiger Sal- petersäure mit Nachbehandlung mit Kaliumbichromat fixirt. Ausgiebiger Gebrauch wurde anfangs auch von Formol gemacht, und zwar in der Weise, dass Stücke von 1 cm in eine ein- bis 5procentige Lö- sung einen oder mehrere Tage gelegt wurden, dann in 1 mm dicke flache Scheiben zertheilt und auf 1 bis 2 Tage in Osmiumsäure übertragen wurden. Diese Concentration scheint aber einen Nach- theil für die Osmiumsäurebehandlung zu haben: Die kleinen Fett- tröptchen sind nachher nicht mehr deutlich erkennbar , die grossen etwas gequollen , ihre Conturen nicht scharf. Bei lOprocentiger Lösung wurden die Bilder viel deutlicher, noch bessere Resultate wurden mit lOprocentiger Salpetersäure (2 Stunden), und nachfolgen- der 5procentiger Kaliumbichromatlösung oder Osmiumsäure (0*5- bis einprocentig) erhalten. FLEMMiNo'sche Mischung gab nicht immer gute Präparate , besonders weil sie häufig nur am Rande eindringt. Von der von Fol angegebenen und von Schmidt (1896) empfohlenen Osmiumsäurelösung (einprocentige Osmiumsäure 10 Th. , 2procentige Essigsäure 50 Th. , Wasser , destillirt , 40 Th.) sah Verf. keinen Vortheil. Mitunter wurden die frischen Stücke in kochendem Wasser oder Alkohol eine halbe bis eine Minute belassen , was manchmal recht gute Präparate ergab. Holzessig dagegen wirkte stark schrum- pfend. Am besten gelangen in Bezug auf Osmiumwirkung die nach Marchi fixirten Stücke : Stückchen von etwa Bohnengrösse wurden 2 bis 5 Tage in MtJLLER'scher Flüssigkeit belassen, vor Erschütte- rungen möglichst geschützt , kamen dann auf 3 bis 5 Tage in ein Gemisch von 2 Th. MtJLLER'scher Flüssigkeit und 1 Th. Osmium- XVI, 1. Referate. 79 säure, das täglich erueuert wurde, dann Abspülen in Wasser (einige Minuten) , Härtung in absulutem Alkohol (3 Tage) , Einbettung in Celloidin ; das Ganze im Dunkeln. Eingebettet wurde theils in Cel- loidin, theils in Paraffin. Der absolute Alkohol, der nach der Ent- wässerung angewandt wird, schadet, wenn er nicht im Uebermaass gebraucht wird , den Osmiumpräparaten durchaus nicht. Verf. hat Osmiumschnitte Wochen lang zur Prüfung in absolutem Alkoliol liegen lassen, ohne dass eine wesentliche Veränderung eintrat. Auch Bergamottöl, Xylol, Toluol sind gefahrlos (entgegen Schmidtj. Um etwaige durch die Einbettung hervorgerufene Veränderungen der Gewebe feststellen zu können, hat Verf. anfangs den fixirten Stücken kleine Scheiben entnommen und nach einstündiger Behandlung mit lOproceutigem Formol auf dem Gefriermikrotom geschnitten und nach den so gewonnenen Präparaten die eingebetteten coutroUirt. Das Osmium der Schnitte lässt sich durch Reductionsflüssigkeiten noch stärker von dem übrigen Gewebe differenziren. Brauchbar sind hierfür alle die Flüssigkeiten , die in der Photographie Anwendung finden. Sehr schöne Resultate hat Verf. mit etwa 20procentiger Ameisensäure erzielt, in der die Schnitte Tage lang blieben, worauf dann immer noch eine Nachfärbung mit Safranin gelang. — C o n - s e r V i r u n g. Osmiumpräparate pflegen sich in dem gebräuchlichen Xylol-Canadabalsam nicht gut zu conserviren, da das Osmium schnell ausgezogen wird. Glyceriupräparate haben immer einige Unannehm- lichkeiten. Bewährt hat sich das Colophonium; benutzt mau es in Stücken, die auf dem Objectträger flüssig gemacht werden, so ist die Handhabung nicht leicht. Vorzuziehen ist das NissEN'sche Ver- fahren.^ Osmiumpräparate , die 6 Monate in solchem Colophonium- benzin aufbewahrt worden waren, hatten nichts von ihrer ursprüng- lichen Schärfe verloren. Schiefferdecker {Bomi). Hippel, E. V., Ueber das normale Auge des Neugebore- nen (Arch. f. Ophthalm. Bd. XLV, Abth. 2, 1898, p. 286 —321 m. 5 Tfln. u. 1 Fig.). Das einzige sichere Zeichen, dass cadaveröse Veränderungen vollkommen auszuschliessen sind, ist am gehärteten Bulbus eine tadellose Form der Fovea centralis. Die einzelneu Fixirungsflüssig- keiten wirken auf die verschiedenen Theile des Auges verschieden ein. Für die Augen von Neugeborenen hat Verf. Formol und *) Vgl. diese Zeitschr. Bd. UI, 1886, p. 95. 80 Referate. XVI, 1. MüLLER'sche Flüssigkeit verwendet, bei möglichst frischen und gleich- grossen Schweinsaugen ausserdem noch Sublimat , Salpetersäure, FLEMMiNG'scbe Lüsuug. Die bei diesen Flüssigkeiten gefundenen Maasswerthe wurden mit solchen des frischen Auges verglichen, um die Einwirkung der Fixirungsflüssigkeit festzustellen. Die MtJLLER'sche Flüssigkeit lässt sowohl die Hornhaut wie die Linse erheblich auf- quellen, so dass die gefundenen Dickenmaasse viel zu gross werden, während Formol (4 Procent Formaldehyd) die Hornhaut massig, die Linse sehr erheblich schrumpfen lässt , unter starker Faltung ihrer Kapsel, so dass man hier viel zu kleine Maasse bekommt. Für die L^utersuchung der Linse ist Formol ganz unbrauchbar. Diese An- gaben beziehen sich auf das Auge des Neugeborenen und des Schweines , wie weit sie für den erwachsenen Menschen zutreffen, ist vorläufig noch nicht untersucht worden. Für die Netzhaut ist Formol ein vorzügliches Conservirungsmittel, während die MüLLER'sche Flüssigkeit, wenn man auf die Erhaltung der natürlichen Lage Werth legt, unbrauchbar ist. Bei ganz frisch, d. h. unmittelbar nach dem Tode eingelegten Augen bildet sich keine Spur einer Netzhautfalte, die Fovea behält ihre natürliche Form, und es fehlt auch jene von Lange zuerst geschilderte Falte der Netzhaut an der Ora serrata, während diese , sowie eine Plica centralis bei Augen , die noch so frisch in MüLLER'sche Flüssigkeit kommen , immer oder wenigstens überwiegend häufig sich bilden. Schiefferdecker [Bonn). Stutzer , lieber elastisches Gewebe im menschlichen Auge (Arch. f. Ophthalm. Bd. XLV , Abth. 2, 1898, p. 322—335 m. 2 Tfln.). Verf. hat die verschiedenen Augenhäute auf elastische Fasern untersucht. Fixirt wurde in Formol, in Sublimatlösung und in abso- lutem Alkohol. Zwei Bulbi, welche in MüLLER'scher Flüssigkeit auf- bewahrt worden waren, waren für die Orceinfärbung durchaus un- geeignet. Für diese erschien die Formol- und Alkoholfixirung als die beste. Eingebettet wurden grössere Stücke in Celloidin, kleinere in Paraffin. In letzterem Falle gab Verf. dem Cedernöl vor dem Xylol, dem Chloroformparaffin vor dem Xylolparaffin den Vorzug. Zur Färbung wurde folgende Mischung benutzt: Orcei'nlösung, alkoholisch, einprocentig . 100 cc Wasser, destillirt 50 „ Salzsäure 50 Tropfen. Verf. hat öfters die Erfahrung gemacht, dass die Empfänglichkeit XVI, 1. Referate. gl für die Orceiiifärbiing eine scli-wankencle ist. Bei Loiclieiiangen, die nicht mehr recht frisch zur PMxiriing kamen , ist die DifTerenziriing des ehistischen Gewebes gegen die übrigen Gewebsbestandtheile mit- unter ganz ungenügend, indem letztere leicht einen dunkeln Farbenton annehmen und beim Abspülen kaum wieder verlieren. Bei Stücken, welche dem lebenden Körper entnommen und gleich fixirt wurden, wurde dies seltener beobachtet. Der Gehalt der einzelnen Augen an elastischen Fasern ist sehr verschieden. Bestimmte Regeln über die Dauer des Aufenthaltes der Schnitte in der Farblösung und nach- her in dem Alkohol lassen sich nicht aufstellen. Im allgemeinen giebt Verf. an, dass für die Färbung von Celloi'dinschnitten eine halbe Stunde, für die Färbung feinerer Paraffinschnitte 5 bis 10 Mi- nuten hinreichend sind, während für die Entfärbung ersterer etwa 15 Minuten, letzterer 2 bis 3 Minuten in reichlichem Alkohol von 80 Procent genügen. Da die Orceinlösung sehr dunkel ist, so dass man die Schnitte beim Herausnehmen schlecht sieht und mitunter verletzt, so ist es sehr bequem, auch die Celloidinschnitte wie die Paraftinschnitte aufzukleben, wozu die Methode von Weigert^ em- pfohlen wird. Zur Untersuchung des Uvealtractus , besonders der Iris ist es nöthig, das Pigment zu entfernen. Verf. hat dasselbe bei der Iris abgepinselt, im übrigen sich hauptsächlich der Griffith- schen- und der von Treacher Collins''^ angegebeneu Methode be- dient. Mit der ersteren hat Verf. gute Resultate erhalten, bessere mit der zweiten. Jedoch litten die Organtheile sehr unter dem zer- störenden Einfluss des Chlorgases. Schiefferdecker (Bon?i). Weigert , C. , U e b e r eine Methode zur Färbung elasti- scher Fasern (Centralbl. f. allgem. Pathol. und pathol. Anat. Bd. IX, 1898, No. 8, 9, p. 289—292). Die Methode, welche Verf. hier mittheilt, ist insofern eigentlich keine neue, wie er hervorhebt, als seine ersten diesbezüglichen Ver- suche schon im Jahre 1884 stattgefunden haben; die definitive Ver- öffentlichung derselben ist indessen erst die jetzige. Die Färbung gelingt nach den meisten der gebräuchlichen Härtungen, ganz be- sonders gilt dies aber für Alkohol- und Formolhärtung, aber auch ') Diese Zeitschr. Bd. E, 1885, p. 490. -) Griffith, A contribution to the anatomy and physiology of the Iris (Transact. VIII. Internat, ophthalm. Congress. Edinburgh 1867). ''^") Treacher Collins', Lectures on the anatomy and pathology of the eye (Lancet 1894). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVI, 1. 6 82 Referate. XVI, 1. für die iu MüLLER'scher Flüssigkeit, in FLEMMiNG'scher Lösung, in Sublimat etc. Es ist auch gleichgültig , ob man mit Celloulin oder mit Paraffin arbeitet; das Celloidin braucht nicht entfernt zu werden. Die Farblösung wird in folgender Weise hergestellt: Man löst ein Procent Fuchsin (Rubin, Mageutaroth, Anilinroth und wie die Synonyme alle lauten mögen, nicht Rubin S., gleich S.Fuchsin, welches nicht verwendbar ist) und 2 Procent Resorcin in Wasser. Statt Resorcin kann man auch Carbolsäure verwenden, doch lässt sich der schlam- mige nach Resorcin entstehende Niederschlag besser verarbeiten, als der nach Carbolsäure entstehende harzige. Von dieser Resorcin- Fuchsinmischung bringt man 200 cc in einer Porzellausehale zum Kochen; ist richtiges Kochen eingetreten, so setzt mau 25 cc Eiseu- chloridlösung (Liquor ferri sesquichlorati des Deutschen Arzenei- buches) hinzu und lässt unter Umrühren noch weitere 2 bis 5 Mi- nuten kochen. Dabei bildet sich der eben erwähnte Niederschlag. Man lässt die so erhaltene Masse abkühlen (sie braucht nicht ganz zu erkalten) und filtrirt. Was durch das Filter hindurchläuft, giesst man fort. Den Niederschlag lässt man auf dem Filter bis alles Wasser abgetropft ist. Ganz trocken braucht das Filter nicht zu werden , es schadet aber auch nichts , wenn es geschieht. Dann nimmt man das Filter vorsichtig vom Trichter ab und thut es mit dem darauf haftenden Niederschlag in dieselbe inzwischen getrocknete Schale, iu der man das Resorcin-Fuchsingemisch mit Eisenchlorid gekocht hatte. Man benutzt diese Schale deshalb , weil sich in ihr immer noch ein Theil von dem Niederschlag befindet, den man mit verwenden will. Man kocht den Niederschlag jetzt in der Schale unter stetem Umrühren und unter allmählichem Herausfischen des vom Niederschlag befreiten Filtrirpapiers mit 200 cc Alkohol von 94 Procent; dann lässt man erkalten, filtrirt und füllt das Filtrat mit Alkohol wieder auf 200 cc. Nach Zusatz von 4 cc Salzsäure ist die Farblösung fertig. Die Schnitte verweilen in derselben etwa 20 Minuten bis eine Stunde , sie brauchen dann nur iu Alkohol abgewaschen und mit Xylol (nicht mit Nelkenöl etc.) aufgehellt zu werden. [Ein gutes Oel ist nach meiner Erfahrung sehr wohl verwendbar , so z. B. Ol. Liualoes , und dann natürlich besser als Xylol. Ref.] Man kann aber die Schnitte auch länger in der Farbe lassen, sogar einige Stunden ; sollte dann der Untergrund nicht hell genug sein, so kann man jetzt eine DiÖerenzirung in Alkohol-Salzsäure vornehmen, doch ist das meist nicht nöthig. Gar zu lange lasse man die Schnitte nicht in der Lösung, nach 24stündigem Verweilen XVI, 1. Referate. 83 tritt oft eine so climkele Färbung des Untergrundes ein, dass man sie auch durcli Säuren etc. nicht mehr Avegschaifen kann. Man kann die Lösung aucli verdünnen, dann muss man länger färben, bekommt aber den Untergrund hell. Die Lösung hält sich Monate lang. Kann man die Schnitte nicht gleich untersuchen, so wasche mau mit Alkohol ab und lege sie bis zur Verwendung in Wasser. Für die Aufhellung in Xylol ist, wie Verf. ausdrücklich hervorhebt, die Anwendung des absoluten Alkohols nicht nöthig. [Ref. kann dieses durchaus bestätigen, da er stets mit Alkohol von 9G Procent aus- gekommen ist.] Man kann die Schnitte sehr gut aus 94procentigem Alkohol mit Xylol aufhellen , wenn man sich der bekannten von W, Welch im Jahre 1876 erfundenen Abtupfungsmethode mit Filtrir- ])apierbäuschchen bedient. Wenn man die Procedur des Abtupfeus und des Abspülens mit Xylol ein- bis dreimal vornimmt, wird jedes Präparat durchsichtig, man bedarf daher überhaupt gar keiner äthe- rischen Oele , und Verf. benutzt solche längst nicht mehr. Carbol- Xylol und Anilinöl- Xylol können bei der Färbung der elastischen Fasern nach der obigen Methode nicht verwandt werden. — Nach der Färbung sind die elastischen Fasern dunkelblau . fast schwarz auf hellem Grunde. Die Kerne sind im Gegensatz zur Orceinfärbung bei kurzer Färbung nicht mit tingirt; man kann sie aber durch irgend ein gutes Carmin nach oder vor der Färbung der elastischen Fasern sehr deutlich sichtbar machen. Auswaschen in Salzsäure- alkohol schadet nichts. Bei der angegebenen Behandlung des Fuchsins entsteht aus diesem ein ganz neuer Farbstoff, der nicht mehr Fuchsin ist (der Farbstoff ist auch nicht etwa Phenoleisen oder Resorcin- eisen). Er ist in Wasser ziemlich unlöslich , und man benutzt die alkoholische Lösung des Niederschlages zur Färbung. Dieser neue Farbstoff ist den technischen Chemikern bisher durchaus unbekannt gewesen. Verf. hebt hervor, dass bei dieser Färbung der Unter- schied zwischen Rosanilin und Pararosanilin, auf den Uxxa bei seiner ersten Methode (Dahlia) so grosses Gewicht gelegt hat, nicht besteht. Man kann vielmehr statt des gewöhnlichen Fuchsins, das wesentlich ein Auilinsalz ist, mit ganz gleichem Erfolge auch das Pararosanilin- salz verwenden, das sogenannte Parafuchsin. Auch das Neufuchsin liefert ein gutes Product. Dr. Leopold Spiegel in Berlin hat den Verf. darauf aufmerksam gemacht, dass der neue Farbstoff vielleicht in die Gruppe der Nigrosine oder Induline gehören könnte. Die darauf hin von dem Verf. augestellten Versuche zeigten eine gewisse Verwandtschaft des Farbstoffes zum Elastin, gaben aber im Gegen- 6* 34 Referate. XVI, 1. satz zu der oben beschriebeneu Färbuug so weuig elective Bilder, dass sie praktisfb uubrauclibar wareu. Doch hält Verf. es für mög- lich, dass uuter deu violeu Indnliu- und Nigrosiumarken des Haudels uoch ciue brauchbare Sorte aufzufinden wäre. Schiefferdecker (Bonn). Jores , L. , lieber die Neubildung elastischer Fasern in der Intima bei Endarteriitis (Beitr. z. pathol. Anat. u. z. allg-em. Pathol. Bd. XXIV, 1898, p. 458—474 m. 2 Tfln.). Verf. hat sowohl die WEiGEUT'sche Methode der Färbung der elastischen Fasern wie auch die Orceinmethode angewandt. Die erstere liefert nicht nur gefälligere Bilder, sondern auch klarere da- durch, dass sie das collagene Bindegewebe gar nicht oder nur ganz blassbläulich färbt, während das elastische Gewebe in dunkelblauem Ton hervortritt. Ferner gelingt es leicht, die Kerne mittels Carmins in rother Contrastfärbung deutlich zu macheu. Der Hauptvortheil liegt aber darin, dass nach der WEiGERx'schen Methode auch die allerjüngsten Fasern und Körnchen sehr intensiv tingirt werden. Jene feinen und jungen Fäserchen , die sich mit Orcein wenig different vom coUageneu Bindegewebe färben, und die vielfach gar niclit hervortreten , sind nach der WEiGEUT'schen Methode sehr klar und deutlich erkennbar. So kommt es, dass mehr elastisches Gewebe mit jener Methode zum Vorschein kommt, als mit dem früheren Verfahren zu sehen war. Schiefferdecker (Bonn). Minervini , R. , Particola rita di struttura delle ceUule muscolari del cuore [Structureigenthümlich- keit der Herzmuskelzellen] (Anat. Anz. Bd. XV, 1898, No. 1, p. 7—1.5). Verf. hat die Herzmusculatur von allen Wirbelthierklassen unter- sucht. Zur Fixirung verwandte er hauptsächlich FLEMMiNo'sche Lösung, absoluten Alkohol, Sublimat (letzteres gab weniger gute Resultate als die anderen) und Kaliumbichromat in ziemlich hohen Concentrationen. Zur Färbung wurde verwandt Carmin und Hämat- oxylin , Safranin , Gentianaviolett , Thionin , Scharlach. Die besten Färbungen ergab Boraxcarmin nach der Formel der Zoologischen Station Neapel. Schiefferdecker (Bonn). XVI, 1. Referate. 85 Glaser , F. , Hüben die M u s k e 1 p r i m i t i \' b ii ii d e 1 des 11 e r - zens eine Hülle? (Vikchow's Arch. Bd. CLIV, 1898, II. 2, p. 291—300 m. 1 Fig.). Verf. hat versucht, die früher von Obstreich an fragmentirten Herzen beobachtete Substanz genauer darzustellen und zu untersuchen. Untersuchung frischer Präparate ergab kein brauchbares Resultat, da es nicht möglich war, die gesuchte Substanz zu isoliren und differential-diagnostisch abzugrenzen. Auch Härtung kleiner Stückchen aus dem Papillarmuskel des linken Ventrikels in Alkohol bei Hämat- oxylin-Eosinfärbung erlaubte nicht, eine Hülle der fragmentirten Pri- mitivbündel darzustellen; wohl waren die Präparate aber brauchbar in Bezug auf die Differentialdiagnose, besonders zur Unterscheidung der gesuchten Substanz von Capillaren. Weitere Härtungsmethoden wie MtJLLER'sche Flüssigkeit, Sublimat, Formol, Pikrinsäure ergaben mit derselben Färbung nichts Besseres. Da das Sarkolemm, wenig- stens der Scelettmusculatur, als eine Art elastischer Haut aufgefasst werden kann, so versuchte Verf. Färbungen, die für elastische Fasern empfohlen waren : die Vesuvin-F'uchsinfärbimg nach Unna, die Orcein- färbung (Unna - Tänzer) , die Wasserblau- Safraninmethode (Unna), welche indessen ebenfalls keine positiven Resultate ergaben , aber lehrten , dass es auf eine Methode ankam , welche gleichzeitig die Muskelsubstanz möglichst intensiv färbt und den Bindesubstanzeu einen anderen Farbenton verleiht. Hierzu eignete sich Pikrocarmin. Die günstigste Methode ist die folgende : 1) Härtung in Sublimat (etwa 2 Stunden) und Alkohol (30-, 60procentig, absolut) und Ein- bettung in Paraffin. 2) Die Päraffiuschnitte werden in warmem Wasser von 30^ ausgebreitet, aus dem Wasser auf einen mit Glycerin-Eiweiss bestrichenen und nachher erwärmten Objectträger gebracht; das Wasser wird abgesaugt, die Schnitte werden getrocknet. 3) 24stün- dige Färbung mit einer einprocentigen Lösung von Pikrocarmin (Be- reitung nach Ranvier). Am besten färbt man das Präparat in einer feuchten Kammer und bringt zu dem Zwecke einige Tropfen (filtrirt) auf den Objectträger. 4) Die Tropfen werden mit Fliesspapier ab- gesaugt, reines Glycerin wird auf das Präparat gebracht, dann Deck- glas, Kittrahmen. Die Präparate verlieren nach etwa 8 bis 10 Tagen ihre charakteristische Farbe, und zwar erblasst gerade die hier in Frage kommende Substanz so stark, dass eine spätere Demonstration unmöglich wird. Versuche, diesen Fehler zu verbessern, misslangen. Gelingt die Färbung, so sind die Muskeln rothgelb, das Bindegewebe rosa, die Kerne intensiv roth, Blutkörperchen in den Capillaren leicht 86 Referate. XVI, 1. gelb, die liier in Frage kommende Substanz gelb, gelbroth oder rosa. Dabei färbte sich in vielen Präparaten die Substanz nicht. War das der Fall, so galt es für sänimtliche Arten der Härtung. Wahrschein- lich wird also die Färbungsfähigkeit von der Art der Fragmentation und der Consistenz des Herzens abhängen. Am besten scheinen sich diejenigen Herzen für den vorliegenden Zweck zu eignen , die gleichmässig fragmentirt werden, und deren Fragmentstücke nicht allzuweit von einander entfernt sind. Schieferdecker (Bonn). Determann , Klinische Untersuchungen über Blutplätt- chen (Deutsches Arch. f. klin. Med. Bd. LXI , H. 3, 4, 1898, p. 365—411 m. 2 Tliu.). Um die einzelnen Plättchen als solche zu erkennen und zu unterscheiden, sowie um exacte Zählungen auf Grund einer gleich- massigen Vertheilung der Bluttplättchen vornehmen zu können, gilt es , den beiden Eigenschaften der Klebrigkeit und damit der Con- glutinationsbildung , sowie des leichten Zerfalls entgegen zu treten. Besonders für Vornahme von Zählungen genügt nicht einfacher Zu- satz einer der zahlreichen Conservirungsflüssigkeiten ; denn , wenn man auch sehr eilig vorgeht, so sind doch die Plättchen schon immer conglutinirt und in ihrer Form verändert. So misslingt die Mischung mit dem Mischer des TnoMA-ZEiss'schen Zählapparates auch bei grösster Eile. Der gewünschte Erfolg wurde erzielt, wenn Verf. zuerst in den Finger einstach, dann einen Tropfen des Zusatzes auf den Finger brachte imd das erste austretende Blut mittels des Deck- glases schnell , vorsichtig und gleichmässig mit der Flüssigkeit ver- mischte. Die weitere Verdünnung wurde , wenn der Blutzusatz zu gross war, auf dem Deckglase gemacht. So kann man in der Zähl- kammer das Verhältniss von Plättchen zu rothen Blutkörperchen gut bestimmen und durch nachherige Zählung der rothen Blutkörperchen auch die absolute Anzahl der Plättchen im Cubikcentimeter fest- stellen. Bei der Zählung muss man nicht versäumen, mittels der Mikrometerschraube alle Schichten des Präparates zu durchsuchen, da die Dicke eines Plättcheus bedeutend geringer ist als die eines rothen Blutkörperchens und manche Plättchen in den oberen Schichten des Raumes zwischen Deckglas und Objectträger schweben. Als Conservirungs- und Verdünnungsflüssigkeit verwandte Verf. meist eine 0'9procentige Kochsalzlösung, der auf je 10 cc ein Tropfen con- centrirter, wässeriger, gut filtrirter Methylviolettlösung (Bizzozero) zugesetzt wurde. Auch eine Mischung von einprocentiger Chlor- XVI, 1. Referate. 87 uatriumlüsimg mit 5procentigei' doppeltchromsaurer Kalilösung ^ er- schien sehr geeignet. Ausserdem wurden versuclit die HAYEM'sche, PACiNi'sche, MtJLLER'sche Flüssigkeit, 25procentige schwefelsaure Bitter- erde, schwefelsaures Natron (gesättigte Lösung), Kochsalzlösungen verschiedener Concentration, einprocentige Osmiumsäure, sodann auch : Osmiumsäure, einprocentig .... 2 — 3 Tropfen, Doppeltcliromsaures Kalium, öprocentig . 4 „ Kochsalzlösung, 0-8procentig ....4g (nach Wlassow); ferner : Sublimatlösung, concentrirt 2 Tropfen, Kochsalzlösung, Sprocentig 4 g Doppeltchromsaures Kalium, öprocentig 1 Tropfen (nach Wlassow); endlich : Wasser, destillirt 160-0 Glycerin 300 Chlornatrium l'O Natriumsulfat 8*0 Methylviolett 0-025 (nach ]\Iabchner) 2. Von allen diesen Flüssigkeiten bevorzugte Verf. die Methylviolett- Kochsalzlösung, besonders da sich die Plättchen wie die Leukocyten schwach mit ihr färbten. Man sieht die schwach blau gefärbten Plättchen als zarte, planparallele, ganz regelmässig vertheilte Scheib- chen, die rundlich, oval, als Striche oder sehr schmale Gebilde er- scheinen, je nachdem sie mehr von der Fläche oder der Kante ge- sehen werden. Nach einiger-Zeit geht in der Conserviruugsflüssigkeit die Form verloren, die Plättchen quellen und vergehen schliesslich. — Färbungen an Trockenpräparateu, die in der verschie- densten Weise vorgenommen wurden , gaben keine weiteren Auf- schlüsse. Am besten färbte eine concentrirte , wässerige Methyl- violettlösung. Brauchbar waren auch Methylenblau , Fuchsin und einige andere Farbstotfe. Eine elective Färbung auf Blutplättchen hat Rabl^) angegeben. Triacidlösung leistete keine besonderen Dienste , auch nicht Nigrosin-Aurantia-Eosinlösung. — Chemische Agent ieu. Wasserzusatz hat fast mit derselben Schnelligkeit Ein- fluss auf die Plättchen, wie er den rothen Blutkörperchen das Hämo- ^) Wlassow, Beitr. z. pathol. Anat. Bd. XV, p. 543. 2j Marchner, Prager med. Wochenschr. 1895, No. 34. 3) Rabl, Wiener klin. Wochenschr. 1896, No. 46. 88 Referate. XVI, 1. globin entzieht ; während die weissen Blutkörperchen noch lange ZeU morphologisch intact bleiben, quellen die Plättchen, werden kugelig, erreichen das 2- bis 3fache Volumen und vergehen nach 5 bis 10 Minuten, ^/jq- Normalnatronlauge wirkte einfach auflösend, und zwar schneller als auf die rothen Blutkörperchen. Verdünnt man die genannte Natronlauge mit Wasser, so treten allmählich die Ver- änderungen des Wassers (Quellung) in den Vordergrund. Verdünnte Essigsäure lässt die Blutplättchen längere Zeit bestehen, jedenfalls so lange als die rothen Blutkörperchen. Die weissen Blutkörperchen dagegen bleiben noch länger gut erhalten. Es zeigen sich in der Eesistenz gegen chemische Ageutien grosse individuelle Eigenthüm- lichkeiten. — Um das Verhalten der Blutplättchen näher zu studiren, versuchte Verf. ein sehr plättcheureiches Blut ausserhalb des Körpers möglichst vor Schädigungen bewahrt und unter möglichst vitalen Be- dingungen zu halten. Dazu genügte die von Arnold angegebene Hollundermarkplättchenmethode nicht; Verf. füllte daher das unter aseptischen Cautelen gewonnene Blut in kleine , ausgeglühte Glas- röhrchen , deren beide Enden lang ausgezogen und zugeschmolzen waren. Wenn Verf. das eine Ende des Röhrchens in die austretende Blutmenge hielt und mit einer kleinen Scheere abbrach , so drang das Blut in einen fast luftleeren Raum. Gleich darauf wurde das Ende wieder augeschmolzen; das andere Ende wurde dann zur Ent- nahme benutzt. Dem Einwände, dass das Zuschmelzen und die dabei erzeugte Hitze das Blut auch bis in das andere Ende hin, von dem das Blut wieder entnommen wurde, so schwer veränderte, dass die Versuche dadurch belanglos seien, suchte Verf. dadurch zu begegnen, dass er das abgebrochene Ende nur mit Siegellack zumachte. Das so untersuchte Blut verhielt sich genau wie das erstere. Von solchen mit Blut gefüllten Röhrchen wurden 4 bis 5 im Wärmeschrank bei 37^ C aufbewahrt. So konnte nach verschiedenen Zeiten untersucht werden. Das Blut aus den Glasröhrchen (nach 24 StundenJ war kaum geronnen, dünn wie vorher, hellroth. Wegen des Näheren muss auf das Original verwiesen werden. Schieff'erdeclier {Bonn). Ellgel , C. S. , Ueber embryonale und pathologische rot he BlutköriDcrchen mit Demonstration mi- kroskopischer Präparate (Fortschr. d. Med. Bd. XVI, 1898, No. 23, p. 883). Verf. hebt hervor, dass bei in früheren Jahren ausgeführten Untersuchungen betreffs der Entstehung der rothen Blutkörperchen XVI, 1. Referate. 89 zu einer Zeit, wo weder ein Kerufarbstoff noch eine Protoplasma- farbe bekannt waren, nur solche Zellen als rothe Blutkörperchen im frischen Präparate erkannt werden konnten, welche deutlich ein gelbes Protoplasma zeigten. Insbesondere konnten solche rothe kernhaltige Blutkörperchen, die entweder ein verändertes, degenerirtes oder ein noch nicht fertiges Hämoglobin besitzen (polychroniatische nach Ehrlich) ohne exacte Methoden nicht als rothe Blutkörperchen erkannt Averden. An einem ähnlichen Uebel leiden alle diejenigen späteren Untersuchungen, die sich zur Fixirung der Blutkörperchen tlüssiger Fixiruugsmittel bedienen , da selbst die jetzt als die besten Bluttixirungsmittel anerkannten Flüssigkeiten im Augenblicke des Eindringens in die frischen Gewebe eine Verdünnung erleiden, die der Conservirung des Hämoglobins, namentlich des veränderten, ge- fährlich ist. Für Blutstudien bleibt die von Ehrlich in die Ba- cteriologie und Bluthistologie eingeführte Antrocknung der Flüssigkeit die allein sichere Methode. In welcher Weise man dann das an das Deckglas angetrocknete Blut fixirt, ist gleichgültiger. Am besten tliut man , wenn man , um sich selbst zu controlliren , gleichartiges Blut verschieden fixirt und färbt, also etwa in der Weise, dass man einige Präparate in absolutem Alkohol fixirt und mit Eosin-Methylen- blau färbt und andere derselben Art durch Erhitzen auf der Ehr- Licn'schen Kupferplatte für wässerige Farbmischuugen unlöslich macht und mit Ehrlich's Triacid färbt. Die Erhitzung auf der Kupferplatte ist, da man die Fixirung durch Veränderung der Tem- peratur reguliren kann, das beste Blutfixirungsmittel. Ehrlich er- wärmt die Präparate etwa 2 Stunden lang bei einer Temperatur von 110^ C. Färbt man dann die Präparate mit Triacid, so nehmen die rothen Blutkörperchen eine Mischfarbe von Orange und Fuchsin an. Durch eine kleine Abweichung von der EHRLicn'schen Vorschrift erlangt man einen schärferen Einblick in die Bluthistologie. Erhitzt man die Präparate stärker, auf 130 bis 135*^ C. (indem man sie dicht hinter diejenige Hitzzone bringt, wo ein aufgeträufelter Tropfen Xylol siedet, 139*' C.) , so nehmen nach der Färbung mit Triacid unsere gewöhnlichen kernlosen rothen Blutkörperchen einen reinen Oraugefarbenton an. Vergleicht man ein so gefärbtes Präparat mit einem desselben Blutes , das man in Alkohol nach dem Antrocknen fixirt und in Eosin-Hämatoxyliu oder Eosin-Methylenblau gefärbt hat, dann stimmen die orangenen Zellen, die oraugeophilen, mit denjenigen überein, welche sich mit Eosin rein roth gefärbt haben. Wir nennen deshalb unsere rothen Blutkörperchen nach ihrem Verhalten zu dem QQ Referate. XVI, 1. ang-egebenen Farbengemisch orthochromatisch. Die als polychroma- tisch bekannten kernhaltigen und kernlosen rothen Blutkörperchen, die sich bekanntlich mit Eosin und einem bläulichen Kernfarbstoff violett färben , nehmen nach der eben angegebenen Modilication der EHRLiCH'schen Methode das Fuchsin an, sie sind also fuehsinophil. Die Polychromasie ist im embryonalen Blute , in den Blutbildungs- organen und im pathologischen Blut sehr verbreitet und für das Studium der Blutentwicklung von grosser Bedeutung.^ Schiefferdecker (Bonn). 'ö Müller, Fr., Die morphologischen Veränderungen der Blutkörperchen und des Fibrins bei der vi- talen extravasculären Gerinnung (Beitr. z. pathol. Anat. u. z. allgem. Pathol. Bd. XXIII, H. 3, 1898, p. 498 —528 m. 1 TU.). Zum Studium der Veränderungen der Blutkörperchen bei der im lebenden Organismus vor sich gehenden, d. h. vitalen Gerinnung bediente sich Verf. eines Extravasats in der vorderen Augenkammer des Kaninchens. Das Nähere der Operation im Original. Durch Einstich in die Cornea mit einer trockenen , sterilen und stumpf- winkelig zugeschärften Kanüle einer Pravazspritze wurde das zu untersuchende Extravasat entnommen. Bei schnellem Operiren und Entnahme von nur geringen Inhaltsmengen kann ein Ablaufen des Kammerwassers vermieden und eine wiederholte Punction desselben Auges ermöglicht werden. Die in der Kanüle enthaltene Flüssigkeit wurde sofort auf ein steriles Holhmdermarkplättchen gebracht und bei 800- bis lOOOfacher Vergrösserung unter Vaselinabschluss auf hohl- geschlitfenem Objectträger der Beobachtung unterworfen. Bei den Versuchen, das Extravasat zu fixiren, erzielte Verf. mit der Deckglas- trockenmethode weder bei folgender Erhitzung auf einer Kupferplatte nach Ehrlich, noch durch Behandlung des lufttrockenen Blutes mit lOprocentigem Formalinalkohol (1 Th. 40procentiger Formaldehyd- lösung -j- 9 Th. absoluten Alkohols) befriedigende Resultate. Die Bilder wurden etwas besser bei Fixation in concentrirter Sublimat- lösung und folgender Färbung mit Eisenhämatoxylin nach der Vor- schrift von H. Rabl."^ Ungleich bessere Bilder erhielt Verf. durch 1) Vgl. auch diese Zeitsclir. Bd. XV, 1898, p. 483. •-) Rabl, H., Centralbl. f. Physiol. 1897, p. 799 ; Wiener klin. Wochen- schr. 1896, No. 46. XVI, 1. Referate. 91 Fixirung des auf ein Ilolhiiulerniarkplättcheii gebrachten Tropfens mit 4procentiger Foruiollösung und darauffolgender Behandlung mit Al- kohol von steigender Concentration. Die Flüssigkeiten dürfen dabei zuerst immer nur tropfenweise auf das Pliittchen fliessen , und bei dem späteren Uebertragen muss jede etwas heftigere Strömung ver- mieden werden , da sonst die ganze Menge des Extravasats weg- geschwemmt wird. Färbung nacli van Gieson mit der Modification, dass nach halbstündigem Verweilen in Delafield's Hämatoxylin- lösung gleich lange in Fuchsinpikriusäure difterenzirt wurde ; ferner in Eisenhämatoxylin nach Heideniiain und folgender Eosinfärbung ; seltener mit Eosin-Methylenblau und Triacid. Leukocyten. In frischen Präparaten konnte Verf. weder ohne nocli nach Zusatz von Neutralroth V^eränderungen der Leuko- cyten während der Gerinnung beobachten. Sie befanden sich in lebhafter Bewegung, sandten dickere oder dünnere, auch faden- füi'mige Fortsätze aus , an denen bisweilen glänzende , resp. rötldich gefärbte Körnchen bemerkt wurden. Es wurde weiter ohne Hollunder- markplättchen nach Fixirung in 4procentiger Formollösung oder ein- procentiger Osmiumsäure, nach Färbung mit Hämatoxylin (Heidenhain oder VAN Gieson) , Methylenblau oder Oxouin untersucht. Den letz- teren Farbstoff verdankt Verf. Ehrlich, von dem in kurzem eine eingehende Beschreibung der höchst eigenartigen färberischen Eigen- schaften dieses Stoffes erscheinen wird. Das Gerinnungspro du ct. Wie bei der ausserhalb des lebenden Organismus vor sich gehenden Gerinnung, so erschien auch hier das nach der Zerstörung der zelligen Elemente des Blutes ent- stehende Gerinnungsproduct als eine homogene Membran. Die von den rothen oder weissen Blutkörperchen ausgesandten Fäden hatten nur kurze Zeit bestanden und waren bald wieder dem Blick ent- schwunden , so dass am unbehandelten Extravasat von Fasernetz- bilduug nichts mehr zu sehen war. Nach Zusatz von Neutralroth konnte kurz nach der Entnahme aus dem Auge in der Nähe der Farbstofftheilchen die Bildung eines röthlich gefärbten Fasernetzes verfolgt werden, an dem die verschiedenen Arten von Blutplättchen, Schatten uud Leukocyten anhafteten. An dem fixirten Präparate traten die Faserstoff bildungen wohl in Folge der hinzutretenden coagulirendeu Wirkung des Fixirungsmittels noch deutlicher hervor. Die Fäden färbten sich mit Hämatoxylin (van Gieson) , Eosin , aber nicht nach Weigert's Methode. Gleichgültig ob mit 4procentigem Formol, reinem Alkohol, einprocentiger Osmiumsäure oder Sublimat 92 Referate. XVI, 1. fixirt worden war, gaben sie in der Anilin-Xylolmisclmng meist die Farbe wieder vollkommen ab, nur ausnahmsweise blieb eine scliwacli- violette Färbung zurück. Es scheinen besonders die breiten, welligen homogenen Bänder zu sein , die nach Fixiruug durch Erhitzen auf dem Deckglase bei nicht vollständiger Differenzirung schwach ge- färbt bleiben. Die vergleichsweise benutzte Fibrinfärbemethode nach Beneke-ünna mit Gentianaviolett ohne Vorbehandlung mit Jod-.Tod- kaliumlösung, auch mit Weglassen des Anilins, ergab durchweg nega- tive Resultate. Gute Bilder von dem Faserstoffnetz erhielt Verf., wenn er 3 bis 4 Tage in Oxonin färbte und dann schnell aus abso- lutem Alkohol in Xylol übertrug : Fäden und Körnchen braun bis graubraun. Auf dem Deckglase ausgebreitete röthliche Gerinnsel, die dem in der Kanüle der Spritze geronnenen Extravasat ent- stammten und nach Trocknen an der Luft in Alkohol, Formolalkohol oder Sublimat fixirt waren , färbten sich nach Weigert's Vorschrift ebensowenig. Aehnliche Resultate erhielt Verf. , wenn er in dem Unterhautzellgewebe auf dem Rücken eines Meerschweinchens eine massige Blutung erregte, 6 bis 8 auf einander geschichtete HoUunder- markplättchen in die Wunde legte und die Haut darüber zunähte. Die nach 3 Stunden herausgenommenen Plättchen waren durch Geriinisel- massen fest mit einander verklebt. Diese Präparate in 4procentigem Formol imd in Müller- Subliraatmischung fixirt, ergaben dieselben Fasernetze und Reactionen. Hieraus folgt? dass ein grosser, vielleicht der grösste Theil des bei der vitalen Gerinnung entstehenden Faser- stofles die „WsiGERT^sche Reaction" nicht giebt, dass diese also als typische „Fibrinreaction" auch nicht bezeichnet werden darf. Schiefferdecker {Bonn). Bettmann, S. , Ueber den Einfluss des Arseniks auf das Blut und Knochenmark des Kaninchens (Beitr. z. pathol. Anat. und zur allgem. Pathol. Bd. XXHI, H. 3, 1898, p. 377—497 m. 2 Tfln.). Die Blutentnahme geschah regelmässig durch Einstich in eine Ohrvene. Die Zählung wurde mit dem TnoMA-ZEiss'schen Apparat ausgeführt. Als Verdünnungsmittel diente theils physiologische Koch- salzlösung, theils eine Jod-Jodkaliumlösung. Der Ausfall der Zählungen ist abhängig von einer ganzen Reihe von Umständen, bei denen auch anscheinend nebensächliche und uncontrollirbare Momente eine Rolle spielen. Als selbstverständlich müssen Geübtheit des Untersuchers und die Auszählung einer grösseren Menge von Quadraten (100) XVI, 1. Referate. 93 vorausgesetzt werden. Was bei der Blutentnahme besonders ver- mieden werden muss, sind unbeabsiclitig-te Beeinflussungen des Gefäss- tonus. Das Rasiren und Säubern des Kaninchenolires darf niemals dem Einstich unmittelbar vorhergehen. Stärkeres Drücken und Zerren ist vollständig zu vermeiden, da solche mechanische Eingrifte häufig zu einer plötzlichen starken Schwellung der Ohrvene füliren. Wird zur Reinigung Aether verwendet, so kommt ausserdem noch der Kältereiz in Frage. Gerade durch Untersuchungen am Kaninchen konnte aber E. Grawitz feststellen, dass Einwirkung von Kälte auf die Körperoberfläche Contractionen der Blutgefässe , Steigerung des Blutdruckes und damit eine stärkere Concentration des Blutes hervor- ruft. Ganz unbrauchbar werden die Zählresultate durch Unruhe und Erregtheit des Thieres. Die von Lloyd- Jones erwähnte Beeinflussung des specifischen Gewichtes des Blutes durch psychische Erregung hat Grawitz durch schmerzhafte Eingrifte , wie Kneifen des Ohres, speciell am Kaninchen bestätigen können. Einzelne Thiere verhalten sich nun so ungebärdig, dass sie sich für die Zählung nicht eignen. Die meisten aber können für die Untersuchung „trainirt" werden. Es hat sich als praktisch erwiesen , das Kaninchen schon längere Zeit vor der Blutentnahme in ein massig hohes Holzkästchen zu bringen , in dem es bequem sitzen konnte , ohne dass ihm grössere Bewegungen möglich waren. Weitaus die meisten Versuchsthiere blieben dann bei dem Einstich ins Ohr vollkommen ruhig. — Die Hämoglobinbestimmung wurde mit dem Hämatometer von v. Fleischl ausgeführt, die Leukocytenzählung mit dem TnoiiA-ZEiss'schen Appa- rate. Verdünnung 1 : 10 mit drittelprocentiger Essigsäure. Aus- zählung aller 400 Quadrate. Es erschien wichtig, neben der abso- luten Leukocytenmenge auch das relative Verhältniss der einzelnen Formen der weissen Blutkörperchen zu einander zu betrachten. Es wurden Deckglaspräparate benutzt, die nach dem EHRLicn'schen Verfahren hergestellt und auf der Kupferplatte flxirt waren. Die Färbung geschah zweizeitig mit Eosin-Glycerin (12 bis 24 Stunden) und Methylenblau (2 Minutenj. Für die Auszählung wurde weder der bewegliche Objecttisch noch ein Ocularnetz verwandt, vielmehr trug Verf. auf dem Deckglaspräparate selbst mit einer feinen Nadel massig dicht stehende , sich kreuzende Striche auf, durch die somit annähernd quadratförmige Räume abgegrenzt wurden. Wenn der Methode der Nachtheil anhaftet, dass bei ihr die Schönheit der Präparate leidet, so schliesst sie doch mindestens ebenso sicher wie die Zählvorrichtuugen thun , die mehrfache Verwerthung bereits ge- 94 Referate. XVI, 1. zählter Zellen aus iiiul hat dazu den Vorzug, dass sie jeden weilleren Apparat erspart. Verf. giebt ohne weiteres zu , dass Auszählungen mit Verwendung von Deckglaspräparaten niemals vollkommen zuver- lässige Werthe liefern , aber die Feststellung gröberer Veränderungen der Verhältnisszahlen hat bei einiger üebung keine Schwierigkeit. Er geht dann auf die Frage ein , ob die hochgradigen Veränderungen einzelner Leukocyten der Trockendeckglaspräparate ohne w^eiteres als die Abbilder einer im circulirenden Blute verlaufenden Degenera- tion zu betrachten seien. Eine ControUuntersuchung des Blutes mit einer einwandsfreien Methode gab hierin Sicherheit. Es wurden nach der von Arnold angegebenen Blättchenmethode Blutproben in Hol- lundermark aufgefangen, in Formol oder besser in MtJLLER-Sublimat feucht conservirt, mit Alkohol nachbehandelt und mit Methylenblau gefärbt. Aus diesen Controllpräparaten ging hervor, dass jene ver- änderten Zellen der Deckglaspräparate in der That Kunstproducte waren, für deren Entstehen bei der Deckglasmethode voraussichtlich die Quetschung und Rollung bei Herstellung der Präparate verant- wortlich zu machen war. Weiter bespricht Verf. eingehend die Einwirkung der verscbieden starken Salzlösungen und verschieden zusammengesetzten Jod-Jodkaliumlösungen, weswegen auf das Original verwiesen werden muss. Schiefferdecker {Bonn). Saintou, P., u. Kattwiukel, Ueberdie Conservirung des Ceutraluerven Systems durch Formol in situ (Deutsches Arch. f. klin. Med. Bd. LX, H. 4, 5, 1898, p. 548—553 m. 1 Fig.). Die Vertf. theileu die Art und Weise der von ihnen angewandten Operation mit, um das Ceutralnervensystem in situ durch Formol zu conserviren. Es muss dieserhalb auf das Original verwiesen werden. Schiefferdecker (Bonn.) Berkeley , H. J. , P r e p a r i n g central u e r v o u s s y s t e m (Johns Hopkins Hosp. Pvcports vol. VI, 1897, p. 1 — 108 w. 15 pltes. ; vgl, Journ. R. Microsc. Soc. 1898, pt. 2, p. 242). Das Gehirn wird in MüLLER'scher Flüssigkeit gehärtet bis man leicht dünne Schnitte anfertigen kann (etwa 2 Wochen bei Zimmer- temperatur). Dann werden Stücke, welche nicht dicker als 3 mm sind, in eine Mischung von : X\'l, 1. Referate. 95 Kaliumbichromat, oprocentige Lösung . 100 Th. Osiuiumsäure, einprocentige Lösung . . 30 „ tiir 2 bis 3 Tage gebracht. Die Stücke werden aus der Flüssigkeit herausgenommen, auf Fliesspapier abgetrocknet, einige Augenblicke in schwacher Lösung von Silbernitrat abgewaschen, dann kommen sie in die folgende Mischung: Phosphormolybdänsäure, lOprocentige Lösung . 2 Tropfen, Silbernitrat, einprocentige Lösung 60 cc. Diese Mischung muss kurz vor dem Gebrauch zubereitet werden ; das Präparat bleibt darin 2 bis 3 Tage. Will mau es länger darin lassen, so muss man einige Tropfen der Silbernitratlösung zusetzen, um einen Niederschlag zu verhüten. Das Licht hat keine schädliche Eimvirkung, doch ist es besser, das Gefäss ins Dunkle zu stellen. Im Winter sollte die Lösung gleichmässig auf einer Temperatur von etwa 25 ^^ C. erhalten werden. Die einzelnen Theile der Neurone treten bei dieser Methode besser hervor als sonst. Auch die Seiten- dornen an den Protoplasmafortsätzen treten gleichmässig nnd voll- ständig hervor. Schiefferdecker (Bonn), E willg , J. , S t u d i e s f g a n g 1 i n c e 1 1 s. A p r e 1 i m i n a r y communication (New York Med. Record, vol. LIII, 1898, pt. 15, p. 513; vgl. Centralbl. f. Nervenheilk. u. Psychiatr. Bd. XXI, 1898, No. 107, p. 754—756). Von den bisher vorgeschlagenen Modificationen der NissL'schen Färbemethode ist nach Verf. folgende die beste : Färben des Schnittes 1 bis 2 Minuten lang in ein- bis 2procentiger, wässeriger, leicht er- hitzter Lösung von Methylenblau. Waschen in Wasser, Entfärbung in absolutem Alkohol, Aufhellen in Cajeputöl, Aufbewahren in Canada- balsam. Von den zur Erhaltung der chromatischen Structur der Nervenzelle vorgeschlagenen Fixirimgsmitteln liefern der 95- bis 100- procentige Alkohol imd die van GEHUCHXEx'sche Flüssigkeit die gleichmässigsten und sichersten Resultate. Schiefferdeckei' {Bonn). Sargeiit, E. P. , The giant ganglion cells in the spinal cord of Ctenolabrus coeruleus [Preliminary paper] (Anat. Anz. Bd. XV, H. 11, 12, 1898, p. 212 —225 m. 10 Figg.). Gehirn und Rückenmark wurden vorsichtig herausgenommen und sofort in einer der folgenden Flüssigkeiten fixirt: Formol lOprocen- 96 Referate. XVI, 1. tige Lösung-, gesättigte wässerige Subliniatlösnng, starke FLEMMiNo'sche Cbromosraiiimessigsäiire , Kaliumbicliroinat allmählich verstärkt von 2- bis öprocentiger Lösung. So manche Färbungen lassen die Riesen- zellen und ihre Neuriten nicht vortreten, obwohl sie andere Theile des Nervensystems gut färben. Dies gilt besonders von den Carmin- färbungen. Die GoLGi'sche Methode und Methylenblau zeigten sich wirkungslos. Am besten waren die folgenden P^ärbungsmethoden und zwar in der Reihenfolge, wie sie angeführt sind: 1) Kenyon's Kupfer- sulfat-Phosphormolybdänsäure-Hämatoxylin nach Härtung in Formol f-"^ 2) Heidenhain's Eisenhämatoxylin nach Härtung in Formol oder Subli- mat; 3) Sahli's Methylenblau - Säurefuchsin -Achsencylinderfärbung nach Bichromathärtung ; 4) Doppelfärbung mit Ehrlich's saurem HämatoxyUn und Congoroth oder Säurefuchsin. Die erste Methode war die beste , und da sie zum ersten Male hier an Organen von Wirbelthieren angewandt wurde, so wird sie etwas näher besprochen. Das in lOprocentiger Formollösung abgetödtete und in öprocentiger Formollösung aufgehobene Nervensystem wurde in Wasser aus- gewaschen und für 24 Stunden in öprocentige Lösung von Kupfer- sulfat gelegt (es hat dann einen grünen Farbenton angenommen). Nach Schneiden in Paraffin und Aufkleben in der gewöhnlichen Weise wurden die Schnitte auf dem Objectträger 15 bis 30 Minuten in der folgenden Mischung gefärbt : Phosphoriuolybdänsäure, lOprocentige Lösung . 1 cc Hämatoxylin, krystallisirt lg Chloralhydrat 10 » Wasser .' . 400 cc Abspülen in Wasser, Entwässern, Aufhellen, Einschliessen in der gewöhnlichen Weise. Es ist dies eine ausgezeichnete Färbung, um Nervenfasern , Neuroglia und Dendriten der Ganglienzellen in ver- schiedener Weise hervortreten zu lassen. ScMcfferdecker {Bonn). Stefanowska, 31., Evolution des cellules nerve uses cor- t i c a 1 e s c h e z 1 a s o u r i s apres 1 a n a i s s a n c e (In- stitut Solvay, Trav. de Labor, t. II, fasc. 2, 1898. — 44 pp. m. 2 Tfln.). Hauptsächlich wurde die Silbermethode von Golgi angewendet. Sie allein ist im Stande, die feinsten Verästelungen der Protoplasma- fortsätze sowie die feinsten Details wiederzugeben. Es wurde die 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 221. XVI, 1. Referate. 97 sogenannte schnelle Methode benutzt , doch musste dieselbe doppelt und dreifach angewendet werden. In den ersten Tagen nach der Geburt ist die Imprägnirung der ßindenzellen bei der Maus sehr schwierig , und es bedarf vieler Versuche , um gute Präparate zu erhalten. Verf. konnte feststellen , dass unter sonst gleichen Be- dingungen die Imprägnirung des Gehirns bei sehr jungen Mäusen weit langsamer vor sich geht als beim erwachsenen Thier. Lässt man die Hirnrinde einer erwachsenen Maus 3 oder 4 Tage in der Osmiumbichromatmischung und 2 oder 3 Tage im Silbernitrat, so erhält man ausgezeichnete Präparate , die vollständig durchsichtig sind und keine oberflächlichen Niederschläge zeigen. Bei der jungen Maus brauchte man dagegen oft die dreifache Zeit. Ist der Aufent- halt in den Reagentien nicht lange genug gewesen, so zeigen sich nur einzelne Zellen imprägnirt; diese treten deutlich hervor, sind aber äusserst selten. Eine weitere Schwierigkeit entsteht durch die Ablagerung von unregelmässigen und undurchsichtigen Niederschlägen von Metallsalzen von dem Beginn der Imprägnation an, wodurch die Verästelungen der jungen Zellen verdeckt werden. Diese Nieder- schläge sind viel ausgedehnter und häufiger bei Gehirnen, welche sich noch entwickeln, als bei erwachsenen. Um diesen Uebelstand einigermaassen wenigstens zu vermeiden, hat Verf. ihre Präparate nach dem Vorschlage von Sehrwald ^ in Gelatine eingeschlossen, ohne indessen seineu weiteren Rathschlägen zu folgen und die Gelatine- haut durch heisses Wasser wieder zu lösen. Sie fürchtete, dass die Temperatur und die Berührung- mit dem heissen Wasser das Prä- parat veränderte und hat einfach bei Herausnahme des Stückes aus dem Silberbade die Gelatinehaut mit dem Rücken eines Scalpells abgehoben. Haftete die Haut an einigen Stellen fester, so wurde sie darauf gelassen, und es wurden die Schnitte so angefertigt. Die Methode von Ramon y Cajal (die Objecte mit frischem Blut zu be- decken , bevor man sie iu die Osmiumbichromatmischung thut), hat Verf. ohne Erfolg versucht. Der Niederschlag schien dadurch nicht verhindert zu werden. Besser war es , den noch nicht ossiticirten Schädel der jungen Maus einige Tage darüber zu lassen. Trotz alledem bilden sich an manchen Stellen Niederschläge im Inneren sowohl wie auf der Oberfläche des Gehirns. Verf. konnte trotz viel- facher Versuche keine Regeln finden, um immer gleich gute Präparate 1) Sehrwald, E., Diese Zeitschr. Bd. VI, 1889, p. 440 u. Neurol. Centralbl. 1890, H. 9. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVI, 1. 7 98 Referate. XVI, 1. zu erhalten; unter denselben Umständen waren die Präparate bald gut bald schlecht. Es bleibt daher nur übrig, möglichst viele Präparate anzufertigen. Die hervorgehobenen Schwierigkeiten ver- mindern sich allmählich mit der fortschreitenden Entwicklung des Gehirns, die Imprägnation geht schneller vor sich, die Zahl der im- präguirten Zellen vermehrt sich. Vom 8. Tage nach der Geburt an kann man auf ungefähr constante Resultate rechnen. Die Miss- erfolge bei jüngeren Entwicklungsstufen des Gehirns möchte Verf. nach ihren Erfahrungen nicht in der mangelnden Uebung des Forschers, sondern in dem physikalisch - chemischen Zustande der Nervenzellen suchen. Auch die Niederschläge werden immer geringer mit fort- schreitender Entwicklung. Während bei der neugeborenen Maus der Zellkörper und die Protoplasmafortsätze häufig von Niederschlägen bedeckt erscheinen, erscheinen die Achsencylinder und gewöhnlich auch die Faserzüge, welche die weisse Substanz bilden, absolut klar. Ebenso imprägniren sich die Ependymzelleu in dieser Zeit durchaus constant, manchmal sogar mit Ausschluss eines jeden nervösen Ele- mentes. Diese Thatsachen bestätigen . die Annahme, dass jene Miss- erfolge auf dem physikalisch- chemischen Zustande der Zellkörper beruhen. Die oberflächlichen Niederschläge erschweren bei der neu- geborenen Maus besonders das Studium der Molecularzone. Verf. hat für diese gute Resultate mit der Methode von Cox erhalten: Man vermeidet hierbei die Niederschläge, die Neuronen erhalten eine dunkelgraue Farbe , wodurch sie sich von dem strohgelben Unter- grunde scharf abheben. Ein Nachtheil ist aber , dass man 3 bis 4 Monate warten muss. — Die benutzten Thiere wurden sämmtlich mit Hülfe einer Scheere decapitirt. Es kommt darauf an, den Tod möglichst schnell herbeizuführen, da sonst die vorangehende Aufregung, Schmerz etc. die Zellen verändert. Nach der Decapitation wird die zu untersuchende Parthie möglichst vorsichtig herausgeschnitten und in die Osmiumbichromatmischung gebracht. Handelt es sich um eine neugeborene Maus, so muss man in Anbetracht der geringen Consistenz des Gehirns doppelt vorsichtig sein ; die Gehirnzellen sind eben ausser- ordentlich leicht veränderlich. ScMefferdecker {Bon?i). Graupiier , R. , Beiträge zur normalen und pathologi- schen Anatomie des sympathischen Nerven- systems (Beitr. z. pathol. Anat. u, z, allgem. Pathol. Bd. XXIV, H, 2, 1898, p, 255—303). Nach Verf. eignen sich zur Untersuchung der sympathischen XVI, 1. Referate. 09 Nerven besonders die folgenden einfachen Metboden: 1) Uutersucbung des frischen INIaterials in Zupfpräparaten. 2) Fixinuig in einprocen- tiger Osmiumsäurelösung: und spätere Zerzupfiing oder Celloidin- einbettung. 3) Härtung der auf einem Brett aufgespannten Nerven in MtJLLEu'scher Flüssigkeit. Nachdem dieselben einen Tag in dieser Flüssigkeit verweilt haben, kann man einzelne Stücke in 2procentige Osmiumsäure übertragen: Gute Markscheidenfärbuug und Vermeidung der bei directer Einwirkung der Osmiumsäure zuweilen vorkommen- den Ueberfärbuug. Andere Stückchen werden nach Stägigem Aufent- halt in MtJLLER'scher Flüssigkeit zwecks Weiterbehandlung nach Makchi herausgeschnitten. Der Picst bleibt entweder bis zur voll- endeten Härtung in MtJLLER'scher Flüssigkeit oder kommt auch in ERLiTZKv'sche Flüssigkeit. Dieselbe härtet schneller und färbt die Markscheiden noch intensiver gelb als MtJLLER'sche Flüssigkeit , so dass schon ohne Amvendung besonderer Markscheidenfärbuugen ein intensiver Contrast zwischen markhaltigen und marklosen Fasern ent- steht. Nach vollendeter Härtung WEiGERT'sche Markscheidenfärbung (wobei es sich empfiehlt, die Differeuzirung unter dem Mikroskop zu controlliren) oder Achseucyliuderfärbung. Unter den hierfür bekannten Metlioden leistet die besten Dienste die Färbung mit Boraxcarmin (nach C4rexacher). Nach 24stündiger Färbung wird mit Salzsäure- alkohol ditt'erenzirt. Die Färbung gelingt auch an Paraffinschnitten. Für solche Schnitte eignet sich ferner folgendes Verfahren: Eine concentrirte Lösung von Methylviolett (1 B) in öOprocentigem Alkohol wird zum Gebrauch mit der 3- bis 4fachen Menge von öOprocen- tigem Alkohol verdünnt. In dieser Lösung bleiben die Schnitte 24 Stunden, werden dann mit SOprocentigem und absolutem Alkohol ausgewaschen, und der Rest des überschüssigen Farbstoffes wird mit Anilinöl ausgezogen, bis die Markscheiden rein gelb erscheinen. Die Achsencylinder und Kerne sind dann dunkelblau, das Zwischengewebe ist blassblau gefärbt. Die Präparate werden darauf nochmals mit Alkohol ausgewaschen und mit Xylol aufgehellt. Für die Beurtheilung der Veränderungen an den Ganglienzellen, am Bindegewebe und den Gefässen giebt die Färbung mit Hämatoxylin und Eosin die besten Resultate. Schiefferdecker {Bonn). Tiiiiofeew, D., Beobachtungen über den Bau der Ner- venzellen der Spinalgauglien und des Sym- jjathicus beim Vogel (Internat. Monatsschr. f. Anat. u. PhysioL, Bd. XV, 1898, p. 259—280 m. 1 Tfl.). 100 Referate. XVI, 1. Verf. liat an Tauben und Hülinern untersucht. Zur Fixiruug wurde benutzt: Sublimat in gesättigter Lösung nach Heidenhain, öprocentige FormoUösuug, concentrirte Sublimatlösung und concentrirte L(»sung von Pikrinsäure zu gleichen Theilen (Rabl-Schaffer), con- centrirte Sublimatlösung und 5procentige Formollösung zu gleichen' Theilen, ZENKER'sche Flüssigkeit und CARNOY'sche Flüssigkeit, Her- MANN'sche Lösung. Weitaus die besten Ergebnisse wurden bei An- wendung der Lösungen von Zenker und Carnoy^ erhalten. Es tritt dabei an dem Protoplasma der Nervenzelle Schrumpfung nur in sehr geringem Maasse ein. Die so empiindliche helle Randzone bleibt an den meisten Zellen völlig unbeschädigt. Die ZENKER'sche Lösung fixirt den Zellkörper, sowohl was Form wie auch innere Beschaffen- heit anlangt, besser wie die von Carnoy. Die letztere fixirt den Kern besser ; sie hat ausserdem den besonderen Vortheil, dass das Tigroi'd dabei eine ausserordentlich scharfe Färbbarkeit aufweist. Bekanntlich erhält mau bei der reinen Alkoholfixirung die schärfste Tigroidfärbung , doch ist diese Fixiruug unvortheilhaft wegen der damit verbundenen Schrumpfung des Zellplasmas. In dem Carnoy'- schen Gemisch wird diese, wie es scheint, durch Chloroform ver- hindert, während durch den Essigsäurezusatz das deutliche Hervor- treten der Zellstructur und der Kernstructur bewirkt wird. Noch bessere Resultate geben die eben genannten Gemische bei der Fixiruug des Nervensystems von Vogelembryonen. Auch die Her- MANN'sche Lösung fixirt die Nervenzellen befriedigend, doch gelingt die Färbung nicht so gut wie nach anderen Fixirungen; Formol ist nicht zu empfehlen. Die Ganglien bleiben in der ÜARNOY'schen Flüssigkeit 5 bis 18 Stunden, kommen direct für 2 Tage in ab- soluten Alkohol, dann Paraffineinschluss. In der ZEXKER'schen Lösung bleiben die Objecte 24 Stunden, dann 24stündiges Ent- wässern in fliessendem Leitungswasser, Härtung in steigendem Al- kohol von 50 Procent ab, Einbettung in Paraffin (54^) nach Chloroform oder besser nach Bergamottöl. Schnittdicke 3 bis 8 /.«. Aufkleben der Schnitte mit Eiweissglj^cerin und destillirtem Wasser auf dem Objectträger. Das Tigroid färbte sich gut nach Doppelfärbung mit Toluidinblau-Erythrosin (nach Lenhossek) : Die auf dem Objectträger befestigten Schnitte bleiben 6 bis 18 Stunden in einer gesättigten, wässerigen Lösung von Toluidinblau, werden dann nach oberflächlicher Abspülung in Wasser über dem Bassin der Wasserleitung neben dem >) Vgl. diese Zeitschr. Bd. V, 1888, p. 370. XVI, 1. Referate. 101 g-eöftneteu Wasserhahn mit eni Paar Tropfen einer gesättigten, wässerigen Lösung von Erythrosin bedeckt, fast in derselben Secunde aber schon mit fiiessendem Leitungswasser abgewasclien. Diese rasche Art der Erythrosinfärbuug erfordert grosse Vorsicht, damit keine Ueberfärbung eintritt, doch ist sie das beste Verfahren, um zu ver- hindern , dass das Toluidinbhiu bei der Nachfärbung durch den sauern Farbstoff verdrängt wird. Nach der Färbung rasches Ent- Avässern in absolutem Alkohol, Xylol, Canadabalsam. Viel schwieriger ist eine gute Färbung der Gruudsubstanz. Die besten beiden Me- thoden waren nach vielen Versuchen die folgenden : Die Eisen- hämatoxyliufärbuug von M. Heidenhain mit einer Nachfärbung in Erythrosin und die Doppelfärbung in Bleu de Lyon und Safranin nach G. Mann. Zur Untersuchung der Kernstructur und des Ver- haltens der Nucleolen erwiesen sich die EuRLicH-BiONDi'sche Färbung und die Methode von Oppel (Methylgrün-Eosin-Säurefuchsin) als voll- kommen ausreichend. Schieferdecker (Botin). Cox, W. H., Die Selbständigkeit der Fibrillen im Neuron. Eine Studie über das Granula netz und die Fibrillen der Spinalganglienzellen (Internat. Monatsschr. f. Auat. u. Physiol. Bd. XV, 1898, H. 8, 9 pp. m. 1 Tfl.). Das Granulanetz zeigt sich am deutlichsten nach Fixiruug der Zelle in dem bekannten FLEMMiNo'schen Gemiscli; aber auch in Formol-, Sublimat-, Essigsäurepräparaten ist es sehr gut sichtbar. Verf. schneidet immer nacli Paraffineinbettuug , vorgenommen unter den üblichen, von Heidenhain angegebenen Cauteleu. Gefärbt wur- den die Präparate nach beiden Härtimgsmethoden in Carbolmethylen- blau. Zum Entfärben hat Verf die folgenden Mischungen hergestellt : Alkoholmischung I: Alkohol 30, Xylol 120 cc II: „ 60, „ 90 „ Anilinmischung I: Anilin 10, Alkohol 10, Xylol 30 cc 11: „ 25, „ 10, „ 15 „ ni: „ 20, „ 20, „ 10 „ Erst kommen die Präparate , nachdem sie abgespült und mit Fliess- papier getrocknet sind , in die Alkoholmischung I ; sind sie dünn und wenig gefärbt, so kann man nach tüchtigem Auswaschen in reinem Xylol bisweilen sehr gute Präparate haben ; sind die Schnitte dick, und haben sie länger, vielleicht zwei Tage, in der Farbstoff- lösimg verweilt , dann schreitet man zur Alkoholmischung II und 102 Eeferate. XVI, 1. betrachtet danacli die Schnitte unter dem Mikroskop. Ist die Fär- bung noch nicht genüg-end, so kommen die Anilinmischnngen, die in der genannten Reihenfolge stets stärkere Entfärbungsmittel sind, zur Anwendung. Mit einiger Vorsicht trifft man sehr bald das Richtige. Zum Studium der Fibrillen gebraucht Verf. jetzt zur Fixirung immer seine Osmium - Essigsäure - Sublimat - Mischung. Die Schnitte werden gebeizt mit Tannin-Eisenammoniurasulfat und gefärbt in Alaun-Baum- wollblau. ^ Ehe Verf. die aufgeklebten Schnitte in die Farbstoff- lösung legte, hatten sie erst eine Stunde in einer Schale mit Wasser, welches 1 cc Wasserstoffsuperoxyd enthielt, verweilt. Hierin ver- lieren die Schnitte viel von ihrer Osmiumfärbung, was der späteren Durchsichtigkeit der Zellen sehr zu gute kommt. Die Entfärbung gestaltet sich wie bei den Methylenblaupräparaten , nur muss man mit den Anilinmischungen sehr vorsichtig arbeiten , da sonst die Fibrillen entfärbt werden. Schiefferdecker {Bonn). Goldscheider , A., u. Flatau, E., Normale und patholo- gische Anatomie der Nervenzellen auf Grund der neueren Forschungen (Berlin [Kornfeld] 1898; 140 pp. m. 8 Figg. u. 7 Tfln.). Die Verff. geben eine Uebersicht über die für die Untersuchung des Nervensystems anzuwendenden Methoden. Sie heben hervor, dass die NissL'sche Methode einer gewissen technischen Uebung be- darf und fügen aus ihren Erfahrungen das Folgende an: 1) Nach- dem das Rückenmark aus dem Wirbelkanal herausgenommen ist, legt man entweder das ganze Organ oder etwa 2 cm lange Stücke aus dem Hals-, dem Dorsal-, dem Lumbal- und dem Sacralmark in eine Schale 96procentigen Alkohols, auf deren Boden man Watte oder Fliesspapier gelegt hat. 2) Nach Ablauf von .5 bis 10 Minuten zerlegt man die Stücke in 2 bis 3 mm dicke Scheiben. Um zu wissen, welches die proximale und welches die distale Fläche ist, wird die proximale Fläche der aus dem Alkohol herausgenommenen und mit Fliesspapier abgetrockneten Scheiben mittels einer Stahl- feder mit einem oder mehreren Tinteupuukten betupft. Dann kommen die Scheiben in 96procentigen Alkohol zurück und verbleiben darin 24 Stunden. (Es genügen auch schon 15 bis 20 Stunden zur Fixi- rung der dünnen Rückenmarksscheiben.) 3) An den Scheiben wird mit einer feinen Pincette die Pia mater abgezogen , am besten vom ') Cox, W. H., Anat. Hefte, H. 31, p. 99. XVr, 1. Referate. 103 Siilcus longitiidinalis aus beginnend , wo man die Pia zerreisst und sie dann nach der Seite liiii mit Leichtigkeit abschält. Dann kommen die Scheiben kurze Zeit zur Abtrocknung- auf Fliesspapier und werden auf einen Kork, der mit einer ganz dünnen Schicht von Fischleim bedeckt ist, übertragen. Die Scheibe kann dabei mit dem Finger leicht gegen den Kork angedrückt werden , damit sie besser und gleichmässiger haftet, gleichzeitig betupft man den Kork mit 96pro- centigem Alkohol. (Zuviel Fischleim oder Gummi stört beim Schneiden.) 4) Die Korke mit den aufgeklebten Stücken kommen in 96procen- tigen Alkohol ; schon nach einer halben Stunde können sie geschnitten werden. 5) Die Schnitte (10 bis 20 fx) werden in mit Methylen- blaulösung (Methylenblau B .'V75 ; venetianische Seife 1*75; Wasser 1000) gefüllte Uhrschälchen übertragen. Es ist nicht nöthig, die Flüssigkeit bis zum „Bläschenplatzen" zu erhitzen. Eine leichte Er- wärmung, etwa bis sich Dampf zeigt, genügt : Die Schnitte verbleiben in der erwärmten Farbflüssigkeit, in der sie auf der Oberfläche schwimmen und werden dann in die Schale mit Anilinöl-Alkohol (1 Th. Aniliuöl in 9 Th. 96procentigen Alkohols) übertragen. Hier verbleiben sie anderthalb bis eine Minute , werden zum zweiten Mal in die leicht erwärmte Farbflüssigkeit auf kurze Zeit übertragen, um dann wiederum in Anilinöl-Alkohol zu kommen. Die NissL'schen Zellkörperchen erscheinen dabei gut tingirt. Sieht man schon bei den ersten Schnitten, dass die weisse Substanz mitgefärbt ist, so lasse man die schon tingirten (eventuell auch die übrigen noch nicht gefärbten) Schnitte mehrere Stunden in 96procentigem Alkohol und färbe dann zum zweiten Mal (beziehungsweise zum ersten Mal). 6) Die Schnitte kommen in mehrere Schalen mit Anilinöl-Alkohol, bis sie keine Farbwolken mehr abgeben. Dann Uebertragen auf den Objectträger und Abtrocknen mit Fliesspapier. Eine starke Ab- trocknung mit feinem (nicht grobkörnigem) Fliess- papier ist eine unentbehrliche Vorbedingung für die Haltbarkeit der Präparate. Man trocknet die Schnitte mit dem feinen Fliesspapier in der Weise ab, dass man mit dem Daumen fest und ziemlich lange das Papier gegen den Objectträger drückt. Die Schnitte erhalten bei diesem Abtrocknen ein weissliches Aussehen (wie etwa hartes Paraffin). 7) Die so abgetrockneten Schnitte wer- den kurz mit Cajeputöl Übergossen, rasch abgetrocknet, mit Benzin begossen, über die Flamme gehalten, bis das Benzin verdimstet ist, und in Benzincolophonium eingebettet. Wenn nach Verlauf von einiger Zeit sich Krystalle im Präparat bilden, so schaft't man die- 104 Referate. XVI, 1. selben durch ein vorsichtiges Erwärmen über der Flamme fort. Die Stücke kann man auch zuerst iu starker FormoUösuug (10 bis 20 Procent des käuflichen Formols) einen bis 2 Tage halten und dann in 96procentigem Alkohol nachhärten lassen. Statt iu Methylenblau- lösung kann man die Schnitte auch mit Thionin (concentrirte, wässe- rige Lösung) färben. Diese Färbung kann , besonders für die in Celloidin eingebetteten Stücke , grosse Dienste leisten. Die Schnitte verbleiben in der Lösung etwa 5 Minuten, ohne dass dieselbe er- wärmt zu werden braucht. Ferner kann man die NissL'schen Körper- chen durch Färbung mit Eisenhämatoxylin nach M. Heidexhaix, auch mit Fuchsin, Safranin u. a. zur Ansicht bringen. Die Verff. besprechen dann weiter die von Lenhossek empfohlene Toluidinblau- färbung, ferner die für die Darstellung der Grundsubstauz und der Fibrillen angegebenen Methoden. Zur Darstellung der Kerne werden Rubin S, Eosin, EnRLicH-BiONDi'sches Gemisch und Hämatoxyliu an- gewendet. Von dem Kerngerüst erhielt von Lenhossek klarere Bilder bei Anwendung des Eisenhämatoxylins. Für die Färbung des Kernes des Zellkörperchens kann man ferner die oben angegebenen Doppel- färbungen mit Toluidinblau-Eosin (von Lexhossek) oder Erythrosin- Methylenblau (Held) empfehlen. Levi wendet zu diesem Zwecke Fixirung mit HERMAXN'scher Flüssigkeit an und färbt die Schnitte theils mit BiONDi'schem Gemisch, theils mit der Dreifachfärbung Safranin-Fuchsin-Methylgriin. In Bezug auf die NissL'sche Methode heben die Verff. hervor, dass man mit derselben zweifellos eine An- zahl von feineren histologischen Veränderungen der Nervenzellen zu beobachten im Stande ist, welche vor der Einführung dieser Methode unbekannt waren. Eine so empfindliche Methode kann uns zuweilen auch morphologische Abweichungen der Structur zu erkennen geben, von denen es nicht sicher ist, dass sie pathologischer Natur sind, welche vielmehr noch in der Breite der iu der Norm vorkommenden Schwankungen liegen oder Einflüssen der Präparation entstammen. Es ist daher sowohl in der Herstellung der Präparate wie in der Deutung derselben grosse Vorsicht nöthig, und nur der auf diesem Gebiete erfahrene Forscher wird ein unbedingtes Vertrauen bean- spruchen dürfen. Nicht zu verkennen ist es auch, dass diese Methode ims über die Veränderungen der wesentlichen Bestand theile der Nervenzellen nur ungenügend aufklärt ; daher auch wahrschein- lich die Incongruenz der bei der NissL'schen Methode dargestellten Veränderungen mit den Störungen der Functionen, mit den Sym- ptomen. Sckiefferdecker {Bonn). XVI, 1. Referate. 105 Brasch, F., Ueber deuEinfluss der Wasserentziehung auf die Nervenzellen (Fortsclir. d. Med. IJd. XVI, 1898, No. 21, p. 803—817). Es wurden zur Wassereutzieliung möglichst stark wasserent- ziehende Stofte verwandt. In erster Linie Glycerin , dann eine con- centrirte Kochsalzlösung (26'5procentig) , ferner eine öOprocentige Glaubersalzlösung. Bei der intravenösen lujectiou verursachte die coucentrirte Salzlösung schnelle Trombosirung der Venen und Hess sich daher nur in geringen Mengen injiciren. Sehr vortheilhaft er- wies sich die intraperitoneale Injection : Bei tödtlichen Dosen liess der Grad des sich bildenden Ascites einen Schluss auf die Menge des dem Organismus entzogenen Wassers zu , anderseits war das Verschwinden desselben bei Einverleibung geringerer Mengen, welche das Leben des Thieres nicht zerstörten, die unerlässliche Voraus- setzung dafür , gewisse Veränderungen an den Ganglienzellen als Rückbildungsvorgänge auffassen zu dürfen. Eine dritte Versuchs- reihe verfolgte die Veränderungen an den Ganglienzellen, welche sich nach directer Einführung der Salzlösung mittels Schlundsonde in den Magen feststellen Hessen. Untersucht wurden Rückenmark und Spinalganglien nach der üblichen NissL'schen Methode auf Schnitten von 10 bis 15 /t Dicke. Ausserdem wurden, da sich die Nothweudigkeit herausstellte, noch dünnere Schnitte herzustellen, da- neben noch von Stückchen, die in Sublimat gehärtet und in Paraffin eingebettet waren , von demselben Thier Präparate von 5 /.i Dicke augefertigt, die ebenfalls nach Nissl gefärbt wurden. Neben dieser Färbung wurde auch das Triacid nach Ehrlich und das verdünnte Triacid nach Rosin, sowie die vax GiESON'sche Färbung angewendet. Nach den beiden ersten Verfahren färbt sich die retrahirte Kern- substanz selbst bei Veränderungen mittlerer Intensität so tief duukel- rothbräun, dass das schwach braunroth gefärbte Kernkörperchen kaum hervorschimmert oder ganz unsichtbar bleibt. Auch nach der VAX GiEsox'schen Methode und mit einfachen DELAFiELo'schen Hämat- oxylin in dünner Lösimg gelingt ihre Darstellung. Die retrahirte Masse zeigt sich dunkelblauschwarz. Gut sichtbar sind Abstufungen in der Färbungsintensität (Aufhellung der Randzone). Die NissL'sche Methode giebt die klarsten Bilder. — Was die wasserentziehenden Stoffe anlangt, so zeigten sich nach kleineren Mengen (etwa 10 bis 12 cc pro kg Körpergewicht) erheblichere Veränderungen nur am Kern ; die NissL'schen Körperchen leiden erst bei grösseren Mengen. Eine über mehrere Tage sich erstreckende Einführung von Glycerin lOG Referate. XVI, 1. in kleineren Menj^en, deren Gesammtquantum jedoch fast doppelt so gross war als die grösste auf einmal injicirte Menge, war nur im Stande geringfügige Veränderungen hervorzurufen. Was die con- centrirte Koclisalzlösung anlangt, so tödteten 18 bis 20 cc concen- trirter körperwarmer Kochsalzlösung pro Kilogramm Körpergewicht das Thier in etwa 2 Stunden; bereits 20 Minuten nach der Injection waren bestimmte Veränderungen zu constatiren. Die Maximalmenge, welche das Thier vertragen kann, wurde auf etwa 10 cc concen- trirter Lösung pro Kilogramm Körpergewicht bestimmt bei intra- peritonealer Injection. Untersucht wurde an Kaninchen. Schiefferdecker (Bonn). C. Hikroorganisiuen. Korn, 0., Eine einfache Vorrichtung zum Erhitzen der Färb Stoff lösung bei der Tuberk elbacillen- fcärbung (Ceutralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXV, 1899, No. 12, p. 422). Korn empfiehlt eine kleine Vorrichtung, um Farbstoff lösungen in Uhrgläsern (Tuberkelbacillen- und Sporenfärbung) zu erhitzen, da sonst Uhrgläser dabei leicht springen. „Mittels eines starken Drahtes, der an dem einen Ende zu einem kleinen Handgritf gebogen ist, wird ein 5 bis 7 cm grosser Kreis hergestellt ; über denselben wird ein schwach concav gebogenes Drahtnetz gelegt und an dem Drahte durch Umbiegen befestigt." Zu beziehen von F. Hellige u. Co., Freiburg i. B. zu 50 Pf. [Diese Fabrik liefert auch auffallend billige Deckgläschen und Objectträger und sei darum Interessenten bestens empfohlen. Ref.] Cxaplewsld {Köln). Yokote, T., Ueber die Darstellung von Nähragar (Cen- tralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXV, 1899, No. 11, p. 379). Yokote stellt Agar auf folgende Weise her: 500 g fett- und sehuenfreies gekochtes oder geschabtes Rindfleisch werden mit 1 Liter reinem Wasser im Kolben gut durchgeschüttelt und auf dem Sand- bade erst schwach, dann stark erhitzt und nach anderthalb Stunden durch Filtrirpapier filtrirt. In 1 Liter Filtrat wurden 15 g zer- kleinertes Agar im Kolben wieder auf dem Sandbade durch etwa XVI, 1. Referate. 107 eine Stunde langes Kochen aufiieliist , darauf erst 10 g- Pepton und 5 g Kochsalz. Es folgt Neutralisireu mit concentrirter Sodalitsung oder Xatronhiuge, bis Lakmuspapier schwach aber deutlich alkalisch reagirt. Nach Abkühlung bis auf etwa 50^ (bis man die Hand bequem auf das Ghis legen kann) Zusatz von 2 Hühnereiweissen und nach gründlichem Umschütteln starke Erhitzung, wobei das Sand- bad in der Kähe des Kolbens 110^ C. zeigen muss, während l^a bis 2 Stunden unter Ersatz des verdunstenden Wassers, Filtration durch feuchte Faltenfilter in Glastrichter, wobei die ganze Lösung wie Bouillon in nur 5 Minuten ohne Verlust filtriren kann. Die Methode liefert in höchstens 6 Stunden vorzüglichen Nähragar, ist auch von Ungeübten leicht ausführbar. Cxaplewski {Köln). Laboscliiii , J., Studien über die Verwendbarkeit eines neuen Eiweisskörpers für bacteriologische Culturzwecke. Inaug.-Diss. Freiburg (Schweiz). — Berlin 1898. 34 pp. 8*^. (Vgl. Centralbl. f. Bacteriol. 1. Abth., Bd. XXV, 1899, No. 11, p. 391.) Laboschin versuchte das Protogen zu Nährböden zu verwerthen. Das Protogen stellte er sich zuerst aus Hühnereiweiss durch Formalin- zusatz selbst her ; später benutzte er das käufliche Höchster Präparat. Die aus letzterem hergestellten Nährböden waren mehr gelblich, sonst ohne wesentliche Unterschiede. Auf 1000 cc Fleischwasser wurden 10 g Protogen und 3 g Kochsalz genommen. Auf solchen Nährböden sollen die meisten Bacterien besser gedeihen; wenn man sich das Protogen aus Eiweiss selbst herstellt, sollen die Nährböden billiger sein als Peptonnährböden. Cxaplewski {Köln). Golowkoflf', A. J., Ueber Nährböden für die bacterio- logische Diphtherie diagnose (Inaug.-Diss. St. Peters- burg 1898; nach Ref. Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXV, 1899, No. 11, p. 392—393). GoLOWKOFF bereitet nach Art der IvRAL'schen Nährböden einen besonderen Nährboden für die Diphtheriediagnose auf folgende Weise: 2 Procent mit Wasser behandeltes Agar wird mit 1 Procent Pepton, 1*5 Procent Chloruatrium mit gleichen Theilen [hier fehlt wohl im Re- ferat: Fleischwasser] und ohne Cautelen aufgefangenen und bis 80 '^ C. [? Ref.] erwärmten Blute versetzt, nach 15 bis 20 Minuten Kochen heiss durch Marly von den Gerinnseln abgepresst, filtrirt und mit 0-5 Procent Zucker versetzt. Auf diesem durchsichtigen, leicht 108 Referate. XVI, 1. bräunliclien, zu verflüssigenden Nährboden soll der Diphtheriebacillus besonders gut wachsen , üppiger als der Pseudodiphtheriebacillus. Bei vergleichenden Untersuchungen ergab die besten Resultate für die Diphtheriediagnose das LoFFLEß'sche Blutserum, dann der Nähr- boden des Verf.'s, das TocHTERMANN'sche und das Joos'sche Agar. Glycerinagar sei vollkommen ungenügend ; das Deycke und Nasthu- Kow'sche Agar befriedigten auch wenig. Geronnenes Eiereiweiss sei wegen seiner leichten Beschaifung in der Noth zu gebrauchen. Be- züglich der Differentialdiagnose misst Verf. der NEissEn'schen Färbung fast den gleichen Werth bei wie dem Thierversuch. Cxaplewsld {Köln). Money, Ch., Methode zur Färbung der B a c t e r i e n in den Geweben (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXV, 1899, No. 12, p. 424). MoNEY benutzt zur Schnittfärbung nach Vorfärbung mit Pikro- oder Borax- oder Alauncarmin eine Gentianaviolettlösung , welcher 2 bis 3 Tröpfchen Formalin auf jedes Uhrglas zugesetzt sind. Er- hitzung bis zur beginnenden Verdampfung [stärkere Erhitzung ist jedenfalls wegen Gefahr störender Schrumpfung zu vermeiden. Ref.]. Abspülen mit Wasser, Differenziren in 90proceutigem Alkohol. Bei zu langer Färbung in Gentianaviolett wird die Entfärbung schwierig und dauert länger. Cxapleiüskl {Köln). Klein, A. , Eine einfache Methode zur Sporenfärbung (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXV, 1899, No. 11, p. 376). Klein hat, von der Vorstellung ausgehend, „dass das Eindringen eines Desinfectiousmittels viel leichter geschieht , wenn der Organis- mus einen gewissen Grad von Feuchtigkeit besitzt", durch Ueber- tragung auf die Färbetechnik eine neue Sporenfärbimgsmethode aus- gearbeitet. Dieselbe gestaltet sich wie folgt: 1) Darstellung einer Emulsion des sporenhaltigen Materials in physiologischer Salzlösung und Zusetzuug eines gleichen Quantums filtrirter Carbolfuchsinlösung (Ziehl-Neelsen). 2) Schwache Erwärmung (bis Dampfaufsteigung von der Oberfläche) während 6 Minuten. 3) Man streicht die Prä- parate aus, lässt sie lufttrocken werden, und führt sie zur Fixation zweimal durch die Flamme. 4) Entfärbung in einprocentiger Schwefel- säure während 1 bis 2 Secunden. 5) Abspülen in Wasser. 6) Nach- färbung mit verdünnter wässerig - alkoholischer Methylenblaulösung XVI, 1. Referate. . 109 (ohne zu erwärmen) wälirend 3 bis 4 Minuten, Abspüluny- in Wasser, Trocknung und Eiuschliessung in Xylol-Canadabalsam. Das Verfahren ist einfach und liefert selbst Anfängern gleich gute Präparate. Da- bei sollen die Bacterienkörper weniger leiden als bei den Macerations- methoden. Auch in älteren Milzbrand cultiiren Hessen sich die Sporen auf diese "Weise gut färben, ebenso Sporen von Bacillus subtilis. Auch gewöhnliche Bacterienfärbung kann nach gleichem Princip der Färbung vor dem Trocknen und Fixiren geschehen. Durch 1 bis 2 Secunden lauge Ditferenzirung in verdünnter Essigsäure (1 Pro- mille) und Abspülen mit Wasser werden die Präparate besonders chöu. In EiiRLiCH'schen Anilinfarblösungeu werden nach dieser Me- s »^ thode gewölmliche Bacterien schon innerhalb 2 Minuten sehr intensiv gefärbt, Tuberkelbacillen in Carljolfuchsin schon nach 2 Minuten. Hierüber, sowie über eine darauf basirte mikroskopische Zählmethode stellt Verf. weitere Mittheilungen in Aussicht. Cxapleiüski (Köln). Kaufmauii , K. , Eine neue Methode zur Färbung von Bacterienkapseln (Hygien. Rundsch. Bd. VIII, 1898, No. 18, p. 873). Kaufmann fand zufällig, dass nach der KNAACK'schen Methode^ Milzbraudbacillen blauschwarz mit rother Kapsel gefärbt wurden. Versuche, Kapseln bei Kapselbacterien in gleicher Weise zu färben, misslangen. Erst nach vielen vergeblichem Herumprobiren kam er zu folgender Methode: „1) Vorfärben mit LöFFLER'schem Methylen- blau mehrere Stunden unter öfterem massigem Erhitzen oder etwa 2 Stunden im Brutschrank bei etwa 35^. 2) Abspülen mit Wasser, welches durch Zusatz von einigen Tropfen concentrirter Kali- oder Natronlauge alkalisch gemacht ist (auf ein grösseres Uhrschälchen voll Wasser kommen 1 bis 2 Tropfen 33procentiger Lauge). 3) Etwa 2 Minuten lange Einwirkung auf das vorher sorgfältig getrocknete Präparat von halbprocentiger Silbernitratlösung. 4) Abspülen mit alkalisirtem (KOH oder Na OH) Wasser (wie bei 2 hergestellt). 5) Nachfärben 30 Secunden lang mit Fuchsinlösung (1 Vol. gesättigte alkoholische Fuchsinlösung und 20 Voll, destillirtes Wasser). 6) Ganz kurzes , nur Secunden währendes Abspülen mit alkalisirtem (KOH oder Na OH) Wasser, wie bei 2 hergestellt. 7) Trocknen und Ein- schliessen in Canadabalsam." Gelegentlich gelinge die Doppelfärbung (Bacterienkern blau, Kapsel roth) , auch wenn das Silbernitrat fort- 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIV, 1897, p. 247. 110 Referate. XVI, 1. gelassen wird. Wichtig ist aber , dass mit Kali- oder Natroulauge alkalisirtes Wasser genommen wird (Ammoniak oder Soda geben keine guten Resultate). Die Methode bewälirte sich an Ausstricli- präparaten von Organen und Sputum zur Kapselfärbung, nicht aber für Alkoholschnitte und Culturen. Bei Präparaten von Peritoneal- exsudat war es mitunter nöthig, über dem Ausstrich erst noch eine dünne Schicht von Hühnereiweiss oder Blutserum anzubringen. Gefärbt wurden mit dieser Methode die Kapseln bei Micrococcus tetragenus , Pneumococcus lanceolatus, Bacillus pneumoniae, B. cap- sulatus und B. Anthracis. Als Vorzug hebt Verf. die scharfe Con- trastfärbung (blau : roth) und die Haltbarkeit der Präparate in Balsam hervor. Cxaplewsld {Köln). Stephens, J. W., Van Ermenghem's method of staining flagella (Lancet 1898 vol. II no. 14 p. 874; nach Ref. Cen- tralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXV, 1899, No. 11, p. 392). Stephens will bei der van EnMENGHEM'schen Geisseifärbung reinere und deutlichere Geissein erhalten haben, wenn er statt 0*2- procentigem Silbernitrat eine 2procentige Larginlösung anwandte. Es wäre zu untersuchen, ob auch Protargol und ähnliche Silberpräparate oder Silbernitrat in ammoniakalischer Lösung gleich gute Resultate ergeben. Cxaplewski {Köln). Catteriua, G., R i c e r c h e s u U ' i n t i m a s t r u 1 1 u r a d e 1 1 e s p o r e dei batteri [Untersuchungen über die feinere Structur der Bacteriensporeu] (Atti Soc. Veneto- Trent. di Sc. Nat. Seria 2, vol. III, 1898, p. 429—437). In einer früheren Abhandlung^ hat Verf. bereits Methoden zum Nachweis des Bacterienzellkernes verötfentlicht. Die vorliegende Mit- theilung macht mit einer Methode bekannt, die auch in den Sporen der Bacterien den Zellkern sichtbar zu machen gestattet. Durch das vom Verf. erprobte Verfahren lässt sicli im Innern der Bacterien- sporeu ein „Centralkörper" tinctionell ditFerenziren, der nach Ansicht des Autors nicht anders denn als Zellkern gedeutet werden darf. Als Untersuchungsmaterial diente vornehmlich der Carbunkelbacillus, ferner Bacillus subtilis , Bacterium Megatherium u. A. Bei allen untersuchten Mikroorganismen kam Verf. zu den gleichen Resultaten. ^) Catterina, G., Contributo allo studio della struttura dei batteri (Atti Soc. Veneto-Trent. di Sc. Nat. Seria 2, vol. II, 1895). XM, 1. Referate. 111 Die Bacterieu werden zunäclist über der Gasflamme fixirt und als- tlann 15 bis 25 Älinuteu in 25procentige Salpetersäure gebraclit, ausgewaschen und auf 10 Minuten in „Lösung B" nach Roux (1 g ;Methylgrün, 10 cc TOproceutigcr Alkohol, 90 cc destillirtes Wasser) gelegt, die fast bis zum Siedepunkt erwärmt sein muss. Die Prä- parate werden dann von neuem gewaschen, mit kalter ZiEHL'scher Lösung behandelt, werden hierauf mit Wasser, Alkohol und abermals mit Wasser gewaschen, und sind dann zur Beobachtung fertig. Eine empfehlenswerthe Modification des Verfahrens besteht darin, die Sporen nicht über der Flamme, sondern in Salpetersäuredämpfen über dem Flaschenhals zu fixiren. Die Sporen des fertigen Präparates lassen mitten in ihrer röthlich gefärbten Plasmasubstauz einen blau tingirten Körper — nach Verf. den Zellkern — erkennen. Als beweisend dafür, dass das blaugefärbte Gebilde nicht als „Kunstproduct" be- trachtet werden darf, sondern thatsächlich als Zellkern zu deuten ist, wird vom Verf. angeführt, dass dieser luhaltskörper stets an derselben Stelle innerhalb der Sporenzelle zu finden ist, und dass ferner bei Aussaat und Keimung der Sporen er au Grösse zunimmt und sich tlieilt. Küster {München). Piorkowski, Ein einfaches Verfahren zur Sicherstellung der T y p h u s d i a g n s e (Berliner Klin. Wochenschr., 1899, No. 7, p. 145; Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXV, 1899, Xo. 8,9, p. 319). PiORKOwsKi hat von frühern Versuchen, auf Harunährsubstrateu Bacterium coli und Typhusbacillen zu ditferenziren, eine neue Methode zur Isolirung der Typhusbacillen ausgearbeitet. Er fand, dass bei seinen Versuchen eine alkalische Reactiou für die Typhusbacillen vortheilhaft war. Die endgültige Methode gestaltet sich wie folgt: „Etwa 2 Tage lang gesammelter normaler Harn (spec. Gew. l*020j, der inzwischen die alkalische Reaction angenommen hat, wird mit 0'5 Procent Pepton und 3*3 Procent Gelatine versetzt, eine Stunde im Wasserbade gekocht und sofort ohne Anwendung von Wärme filtrirt, w^ns sich bequem und leicht bewerkstelligen lässt." Abfüllen in Reagirgläser , Sterilisation im Dampf 15 Minuten, am folgenden Tag noch 10 Minuten. Bei 22^ zeigen sich nach 20 Stunden bei schwacher N'ergrösserung Coli - Colonien , rund , gelblich , feinkörnig und scharfrandig ; die Colonien des Bacterium Typhi abdominalis als Faserformen in eigenartiger, von einer Centrale ausgehender An- ordnung. Man unterscheidet kürzere oder längere, farblose Rauken, 112 Referate. XVI, 1. häufig iu Spirocliaete- artiger Form, gänzlicli differenzirt von den runden gelben Colon-Colouion." Aufbewahrung bei 22 '^ C. ist zur Entwicldung dieser typischen Colonien nothwendig. Verschiedene Coli- und Typhusstämme zeigten stets das geschilderte Verhalten. Dann wurde mit Erfolg versucht, die Typhusbacillen im Gemisch mit Coli zu isoliren, was unschwer gelang, auf gewöhnlicher Gelatine aber nicht möglich war. Ebenso charakteristisch waren gefärbte Klatschpräparate. Bei Rückübertragung auf gewöhnliche Nährböden trat das für diese übliche Wachstlium auf. Stichculturen in der obigen Harugelatine „Hessen B. coli in festem, grauweisslichem Stich mit weissem Oberflächenwachstlmm erscheinen; B. Typhi blieb heller, durchscheinender, vielfach gekörnt und zeigte kein Oberflächenwachs- thum." Verf. vermochte dann mit diesem Nährboden auch Typhus- bacillen aus damit inficirtem Wasser und Stuhlproben und endlich auch aus Typhusfällen (4 Fälle) zu isoliren (2 Oesen Excremente in Röhrchen I, davon 4 Oesen in das nächste und 6 bis 8 Oesen hiervon in das nächste Röhrchen). In Platte I war schon nach 20 Stunden Nachweis möglich, nach 36 Stunden aber auf II. und III. Platte isolirte Colonien. [Es fehlt leider die sehr wichtige Untersuchung, wie sich typlmsähuliche Bacillen auf dem neuen Nähr- boden verhalten. Ref.] Cxaplewski {Köln). JOOS, A., Ein neues und verbessertes Culturverfahren für den Nachweis von Diphtheriebacillen im Exsudate und Erlangung vonReinculturen (Cen- tralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXV, 1899, No. 8, 9, p. 296, No. 10, p. 351). Joos empfiehlt zur Diphtheriediagnose Serumalkalialbuminatagar. 300 cc gewöhnliches , nicht steril aufgefangenes Blutserum werden mit 50 cc Normalnatronlösung und 150 cc destillirtem Wasser in einem Kolben mit flachem Boden 2 bis 3 Stunden bei 60 bis 70*^ (im Wasserbade oder eine Nacht im Brütschrank) gehalten , damit sich Alkalialbuminat bildet. Dann wird auf 100^ erhitzt, oder man stellt den Kolben auf eine halbe bis dreiviertel Stunde in den Dampf- topf. Dazu kommen 500 cc Peptonbouillon und 20 g Agar, welches so schnell wie möglich aufgelöst wird. (Zur Bereitung der Bouillon werden 500 g von einige Tage altem Rindfleisch mit 1000 cc Wasser abgekocht, nach Filtration 20 g Pepton und 5 g Kochsalz und Normal- uatronlösung bis zur deutlich alkalischen Reaction d. h. etwa 7 bis 8 cc pro Liter zugegeben.) Nach vollständiger Lösung wird heiss XVI, 1. Referate. 113 filtrirt und eine Viertelstuiule bei 100 bis llo*^' im Autoklaven steri- lisirt. Ausgiessen in Petrisclialen. Der erhaltene Nährboden ist von der Cousistenz des gewöhnlichen Nähragar, doch etwas dunkler, aber gut durchsichtig, weshalb oberHächliche Colonien leicht mit schwacher Vergrösserung betrachtet werden können. Um gute Durchsichtigkeit und geringe Färbung des Nährbodens zu erhalten, erliitze man weder l.nige noch zu hoch. Reste bewahre man in kleinen Kolben. Durch öfteres Erhitzen Avird der Nährboden dunkler und leidet bezüglich der Consistenz. Diphtheriebacillen entwickeln sich auf dem neuen Nährboden schnell üppig, als kleine Colonien mitunter schon nach 4 bis 5 Stun- den , Streptokokken dagegen sind in der Entwicklung selbst nach 24 Stunden ganz behindert, auch Staphylokokken bleiben im Wachs- thuni zurück. Verf. behauptet: Die Methode der Cultur auf [dem beschriebenen Ref.] Serum-Agar gestattet eine ebenso sichere Diagnose wie die Cultur auf LöFFLER'schem Blutserum, welche bisher als die exacteste angesehen wurde, und sie gestattet sehr häufig eine schnellere Diagnose [letzteres dürfte nicht richtig sein, da auch auf Serumplatten nach C. Fraenkel mittels Klatschpräparaten die Diagnose in 4 bis 5 Stunden nicht selten gestellt werden kann]. Verf. versuchte nun das Blutserum verschiedener Thierarteu (Pferd, Rind, Schwein, Hammel) in der Erwartung, dass sich Unter- schiede bei Benutzung ergeben würden. Auf allen hiermit bereiteten Serumalkalialbuminatagarsorten wuchsen Streptokokken gar nicht, Staphylokokken gehemmt. Für den Diphtheriebacillus erwies sich aber das Schweineserum am besten, Pferdeserum giebt jedoch gleich- falls sehr gute Resultate und genügt vollkommen zur Diagnose. Verf. hat dann verschiedene Nährböden anderer Autoreu mit einander verglichen. Das DEYCKE'sche Alkali -Albuminatagar gab 22 Procent Fehldiagnosen. Der TocHTERjiANN'sche Nährboden biete keine grossen Vortheile gegenüber gewöhnlichem Agar, wenn auch die Diphtheriebacillen darauf etwas rascher wüchsen. Auch mit dem von Kanthack und Stephens angegebenen Nährboden seien die Resultate ähnlich schlecht und unsicher wie mit dem DEYCKE'schen Nährboden. Dieser Nährboden müsse aber naturgemäss sehr unregelmässige Resultate ergeben , da die zur Herstellung vorgeschriebene Ascites- tiüssigkeit in ihrem Gehalt an Eiweiss sehr variirt. — Die Vortheile seines eigenen Nährbodens schildert Verf. in folgenden Sätzen: 1) Die Bereitung des Serum-Agars ist einfach, leicht und schnell. 2) Das Serum-Agar stellt eine sehr bestimmte, genau bekannte Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVI, 1. 8 114 Referate. XVI, 1. Verbindung dar, welche man stets mit j^rösster Leichtigkeit erhalten kann. Man kann demnach die in den verschiedenen Laboratorien erhaltenen Resultate unter einander in Vergleichung ziehen. 3) Die Cultur kann in PETRi-Schalen geschehen. Man kann daher leicht die zur Impfung gelangende Substanz derart theilen, dass man räumlich getrennte Colonien erhält. Da der Nährboden gut durchscheinend und wenig gefärbt ist, so kann die Cultur mikroskopisch bei 50- bis 60facher Vergrösserung untersucht werden. 4) Die Diphtheriebacillen entwickeln sich immer auf Serum-Agar. Wir haben mehrere hundert Diagnosen gleichzeitig mit Culturen auf LöFFLER'schem Blutserum und mit Serum-Agar vorgenommen , und der letztere hat niemals versagt. Die von uns empfohlene Methode gestattet demnach eiue absolut sichere Diagnose, b) Die Diagnose kann häufig nach 5 bis 6 Stunden, jedenfalls aber nach 12 bis 15 Stunden Aufenthaltes im Brütschrank gestellt werden. 6) Die Untersuchung der Culturen ist weniger umständlich als bei irgend einem anderen Verfahren, da eine Verwechslung unter den verschiedenen zur Entwicklung ge- langten Colonien nicht mehr möglich ist. Die Diphtheriecolonien lassen sich, selbst wenn ihrer nur sehr wenige sind, leicht erkennen. Ihr Aussehen ist immer typisch. Die Streptokokken ent- wickeln sich auf diesem Nährboden gar nicht, und das Wachsthum der Staphylokokken ist in sehr bemerkenswerther Weise eingedämmt. Cxaplewski (Köln). D, Botanisches. Wager , H. , The nucleus ofthe yeast- plant (Ann. of Bot. vol. XII, 1898, p. 499—54.3 w. 2 pltes.). Von den verschiedenen Fixirungsflüssigkeiten gaben die besten Resultate concentrirte Sublimatlösung und die GRAM'sche Jodjodkalium- lösung. Die frischen Hefezellen blieben in diesen etwa 24 Stunden und wurden successive in Wasser, 30-, TOprocentigem Alkohol und schliesslich in methylirtem Alkohol ausgewaschen , bis das Jod voll- kommen entfernt ist. Dann werden von denselben Deckglaspräparate hergestellt und zwar in der Weise, dass zunächst eine kleine Menge von dem die Hefezellen enthaltenden Alkohol auf ein Deckglas ge- bracht wird. Ist der Alkohol verdunstet, und sind die Hefezellen XVI, 1. Referate. 115 beinahe trocken , so wird ein Tropfen Wasser zugesetzt , alsdann werden die llefezellen in diesem sorgfältig gemischt und in dünner Schicht ausgebreitet. Wenn sie zu Boden gesunken, lässt man das Wasser verdunsten und die Hefezellen vollständig austrocknen. Nach vorherigem kurzen Aufenthalt in Wasser können die Zellen gefärbt werden. — • Zur Färbung benutzt Verf. zunächst ein Gemisch von wässerigen Lösungen von Fuchsin und Methylgrün. Nach einer Fär- bung von 2 Minuten werden die Präparate etwa 10 Secunden in Wasser ausgewaschen und in verdünntem Glycerin untersucht, oder das Präparat wird 2 Stunden lang in dem Farbstoffgemisch belassen und so lange abwechselnd in Wasser und TOproceutigem Alkohol ausgewaschen, bis das Protoplasma vollständig farblos geworden ist 5 dann wird das Präparat in der gewöhnlichen Weise in Canadabalsam übertragen. Ferner benutzte Verf. ein Gemisch von Methylgrün und Eosin , das er 30 Secunden bis 2 Minuten einwirken Hess , darauf wurde mit Wasser ausgewaschen und entweder in verdünntem Glycerin untersucht oder das Präparat vollkommen ausgetrocknet und nach vorherigem Aufhellen durch Xylol in Canadabalsam übertragen. Ausserdem erhielt Verf. auch gute Bilder mit Delafield's Hämat- oxylin, das er mehrere Stunden einwirken lässt und hierauf mit 2procentiger Alauulösung auswäscht. Die HEiDENHAiN'sche Methode führt er in der Weise aus , dass er die Deckglaspräparate zuerst für ungefähr 3 Stunden in 2*5procentige Lösung von Eisenalauu bringt. Nach dem Auswaschen in Wasser werden sie 6 bis 12 Stun- den in einer O'öprocentigen Lösimg von Hämatoxylin in destillirtem Wasser geftirbt und wieder in die Eisenalaunlösung zurückgebracht. In dieser ist oft erst nach 1 bis 2 Tagen die gewünschte Farben- differenzirung erreicht. Die benutzte Safraninlösung wird in der gewöhnlichen Weise mit Aniliuwasser versetzt. Gentianaviolett wurde auch in Anilinwasser gelöst und gab beim Auswaschen mit Wasser und Alkohol sehr gute Färbungen. Mit Carbolfuchsin erhielt Verf. wenig gute Kernfärbungen, wohl aber eine intensive Sporenfärbung, wenu das Präparat wie ein Bacterienpräparat behandelt wurde. Regina- Violett benutzte Verf. in wässeriger Lösung, die er etwa 2 Minuten auf die Hefezellen einwirken liess ; dann wurde in Wasser und öOproceutigem Alkohol ausgewaschen und in verdünntem Glycerin untersucht. Die für das Schneiden mit dem Mikrotom bestimmten Hefezellen werden zunächst nach der HARTOGSchen Methode gefärbt : Nach dem Fixiren und Härten kommen sie zunächst in eine sehr 8* HC, Referate. XVI, 1. verdünnte Lösung von Essigsänre-Nigrosin in öOprocentigen Alkohol, nach kurzer Zeit wird diese Flüssigkeit abgegossen und durch Mayer's Carmin ersetzt und gut geschüttelt. Nach einigen Stunden wird die Carminlösung abgegossen 5 die Hefezellen werden mehrere Male in SOprocentigen Alkohol ausgewaschen und darauf in eine sehr ver- dünnte essigsaure Lösung von Nigrosin übertragen. . Sind sie hierin hinreichend differenzirt , was durch mikroskopische ControUe fest- gestellt werden muss, so werden sie successive in 30-, öOproceutigen und absoluten Alkohol übertragen, in dem sie etwa eine Stunde ver- bleiben. Der Alkohol wird durch Carbolxylol ersetzt, das die ge- färbten Zellen enthaltende Gefäss auf ein Wasserbad gebracht und Stücke von festem Paraffin zugesetzt. Nach dem Verdunsten des Paraffins werden sie gut geschüttelt , um eine vollständige Durch- tränkung zu erhalten. Hierauf lässt man die Hefezellen zu Hoden sinken und taucht das Gefäss in kaltes Wasser. Nach dem Erstarren des Paraffins wird der zu schneidende Block durch Zertrümmern des betreftenden Gefässes frei gelegt. Au Stelle von Carmin-Nigrosin wurde auch Hämatoxylin nach der HEiDENHAiN'schen Methode an- gewandt. Für Demonstrationszwecke fand es Verf. zweckmässig, die ge- färbten und in Xylol übertragenen Hefezellen durch Verdunsten des Xylols vollständig eintrocknen zu lassen. Das so erhaltene Material kann an die Studenten vertheilt oder auch mit der Post versandt werden , ohne dass es geschädigt würde. Zur Untersuchung wird ein geringes Quantum davon in Wasser vertheilt und direct in diesem untersucht oder zuvor verdünntes Glycerin zugesetzt. Will man Dauerpräpurate davon anfertigen , so lässt man die Hefezellen auf dem Objectträger vollständig eintrocknen, setzt Xylol zu und schliesst in Canadabalsam ein. Für die Untersuchung der feinsten Structur der Hefezellen ist diese Methode aber weniger anzuempfehlen. Ä. Zimmermann {Buitenxorg). Jahn, E., Zur Kenntniss des S chleimpilzes Comatricha obtusata Preuss. (Festschrift für Schwendener , Berlin 1899, p. 288—300). Zur Fixirung der Sporangien kam Sublimat zur Anwendung und zwar in concentrirter alkoholisch -wässeriger Lösung, die etwa 30 Procent Alkohol enthält. „Man löst am besten das Stück des Holzes, auf dem gerade ein Exemplar herauskommt, mit einem scharfen Messer ab und bringt dies mit dem Schleimpilz vorsichtig XVI, 1. Referate. 117 in die Fixirungsflüsöigkeit. Bei dem grossen Saftgehalt und der Zartheit des Phismas sind sonst Deformationen unvermeidlicli .... Das lldlz läsöt sich später unter dem Präparirmikroskop, wenn das Phisnia in absolutem Alkohol geliärtet ist, durch ein feines Messer mit Leichtigkeit entfernen." — „Sehr kleine Sporangien , die beim Durchgang durch die vielen Flüssigkeiten leicht verloren gehen, werden zweckmässig mit etwas Eosin vorgefärbt.'' Als Kernfärbe- mittel that Hämatoxylin (nach Ehrlich) gute Dienste. Die jungen Capillitiumfasern geben, wie für Stemonitis bereits von DE Bary augegeben wird, mit .Tod und Schwefelsäure Cellulose- reactiou. Ebenso verhalten sich , wie Verf. coustatirte , alle farblos bleibenden Membrantheile , so z. B. die farblose Haut des Ilypo- thallus von Stemonitis. In der Nähe des Stielansatzes bleibt da- gegen die charakteristische Blaufärbung entweder gänzlich aus oder es kommt ein grünlich getöntes Blau zu Stande. — Wenn die Fasern des Capillitiums braun geworden sind , vollzieht sich in ihnen eine noch nicht genügend aufgeklärte Veränderung in der chemischen Beschaffenheit der Membransubstanz. Auch dann , wenn man die dunkele Farbe durch Kochen in verdünnter Chromsäure beseitigt hat, lassen sich mit Jod -Schwefelsäure oder mit Chlorzinkjod keine Cellulosereactionen mehr erzielen ; die Fasern färben sich gelb. Ver- holzung oder Chitinabscheidung Hess sich nicht nachweisen. — Im Anschluss an v. Wisselingh's Mittheilungen über die Verbreitung des Chitins bei den Pflanzen^ theilt Verf. mit, dass er bei Coma- triclia und Stemonitis keine Chitin-, beziehungsweise Mykosinreac- tionen erhalten konnte. Küster {München). Popta , €. M. L. , Beitrag zur K e n n t n i s s der H e m i a s c i (Flora Bd. LXXXVI, 1899, p. 1—46). Die genannte Arbeit enthält eingehende Mittheilungen über die Sporenbildung bei den Hemiasci, durch welche die Mitwirkung der Kerne bei diesem Vorgang, von neuem erwiesen wird. Verf. tritt hierin den Behauptungen Holtermann's ^ gegenüber. Verf. fixirte 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 2G7. -) Holtermann, C, Mykologische Untersuchungen aus den Tropen. Berlin 1899. — Auffällig ist, dass es Holtermaxn nicht gelungen ist, die Kerne der Pilzzellen zu finden, auftaliig seine Folgerung, dass die von früheren Autoren als Kerne beschriebenen Gebilde „theils Vacuolen, theils Protoplasmaansammlungen, theils auch Protoplasmakörnchen sind" (p. 17). Ueber die von ihm angewandten Methoden lesen wir p. 18: „Viele Reagen- 118 Referate. XVI, 1. das Untersuclniiigsmaterial mit dem FLEMMiNG'sclien Gemiscli und färbte die Sclmitte mit Geutianaviolett. Küster {München). Grütz, G., Ueber die Entwicklung der Eiknospe bei den Charaeeen (Botan. Zeitg. Bd. LVII, 1899, p. 1 — 13). Als geeignete Fixirungsgemische nennt Verf. Osmium -Pikrin- Essigsäure - Platinchlorid (nach vom Rath) und Kaliumbichromat- sublimatessigsäure (nach Zenker). Bei Anwendung des vom RATH'schen Gemisches in zehnfacher Verdünnung genügt eine Fixirungsdauer von 10 Minuten. Die andere Flüssigkeit muss 20 bis 24 Stunden auf die Objecte einwirken. Zur Entkalkuug bringt man die nach VOM Rath fixirten Objecte noch 12 Stunden in einprocentige Essig- säure. — Die Schwierigkeiten, welche die Anfertigung der Mikrotom- schnitte bot, Hessen sich durch längere Einwirkung des Paraffins auf die Eiknospeu (3 Tage Xylol-Paraffin, 8 bis 14 Tage reines Paraffin) meist umgehen. — Von den verschiedenen Färbungsmethoden be- währte sich am meisten die Anwendung von Hämalaun (nach P. Mayer). Küster {München). Belajeif, Wl., Ueber die männlichen Prothallien der Wasserfarne [Hydropterides] (Botan. Zeitg. Bd. LVI, 1898, p. 141 — 194). Zum Studium der Zellenanordnung im Prothallium von Salvinia ist frisches Material, wie es die Natur liefert, kaum zu gebrauchen. Die Zellwände heben sich nicht deutlich genug vom Zellinhalt ab, die Zellgrenzen sind daher oft schwer erkennbar. Das beste Hülfs- mittel ist Plasmolj^se mit lOprocentiger Salpeterlösung. Auch An- wendung von einprocentiger Essigsäure und nachfolgende Färbung mit Jodgrün führte zu guten Resultaten. Bei anderen Wasser- farnen , z. B. bei Marsilia , ist die Methode der Plasmolyse nicht anwendbar. Die Prothallien von A z o 1 1 a müssen vor der Untersuchung erst tien wurden angewandt, ich bin aber zuletzt bei Fuchsin-Methylgrün nach GuiGNARD stehen geblieben. Auch das von Harper benutzte Safranin- Gentianaviolett- Orange nach Flemming kam zur Verwendung Es kommen allerlei Farbennüancen zu Stande. Durch Methylgrün -Fuchsin werden die gröberen Parthien der Protoplasmaansammlungen dunkel grün- lich (angebhche Kernkörperchen!), während die dünnen Parthien rosa er- scheinen." — Einen Beweis für seine Behauptungen bleibt Verf. den Lesern seiner „mykologischen Untersuchungen" schuldig. XVI, 1. Referate. 119 von den „Massulae" möglichst hofreit werden. „Gewölmlicli sind die aus den IMassuhae hervortretenden Prothallien in sehr geringer Anzahl vorhanden und meist erst nach längerem Suchen zu finden. Durch diesen Umstand aufmerksam gemacht, untersuchte ich das Innere der Massulae bei sehr starker Vergrösserung und bemerkte nun, dass die meisten Prothallien darin verbleiben, also nicht aus- treten.'' Um sie trotzdem der Untersuchung zugänglich zu machen, emptiehlt sich die Anwendung von Chromsäure, deren Einwirkung man die Massulae 24 Stunden aussetzt. Das Gewebe der Massulae zerbröckelt alsdann bei leichtem Druck, und Prothallien in den ver- schiedensten Entwicklungsstadien lassen sich isoliren. Die Untersuchung der Prothallien von Marsilia wird durch ihr undurchsichtiges Epispor sehr erschwert. Anwendung von Kali- lauge, Sodalösung, Essigsäure u. a. (Haxstein, Cajipbell, Sadebeck) führt zu wenig befriedigenden Resultaten. Man thut besser, die Los- lösung der Prothallien von den hinderlichen Hüllen durch Cultur bei hoher Temperatur herbeizuführen, beziehungsweise zu beschleunigen. An den männlichen Prothallien von Marsilia elata erfolgt diese Los- trennung besonders gut bei 28^ im Thermostaten. Durch hohe Temperaturen wird auch bei M. aegyptiaca und M. salvatrix dasselbe Ziel erreicht. Bei M. quadrifolia schlägt diese Methode jedoch nicht an. Verf. empfiehlt für diese Art Aufhellung mit Chloralhydrat. — Sollen Dauerpräparate von Prothallien hergestellt werden, so müssen diese 12 Stunden im Flemming' sehen Gemisch gehärtet werden. — Besonders schwer ist wegen der undurchsichtigen Sporenhüllen der Entwicklungsgang der Prothallien von Marsilia zu verfolgen. Am besten hilft man sich dadurch, dass man durch Hin- und Herschieben des Deckglases die Gasmassen entfernt, welche die Sporenhüllen undurchsichtig machen. Um das Sporeninnere vor Verletzung zu schützen , brachte Verf. zugleich mit den Sporen von Marsilia elata noch einige Mikrosporangien von Salvinia unter das Deckglas. Noch schwieriger gestalten sich die Untersuchungen der Pro- thallien von Pilularia. Eine völlig befriedigende Methode kann Verf. nicht angeben. Die besten Resultate lieferte noch die An- wendung von Chloralhydrat. Küster {München). Czapek, F., Ueber die sogenannten Ligninreactionen des Holzes (Zeitschr. f. physiol. Chem. Bd. XXVH, 1899, p. 141—166). An „Holzstotfreagentien" ist kein Mangel. Eine Reihe von 120 Referate. XVI, 1. Phenolen, die in wässerigen oder ulkoliolisclien Lösungen bei Gegen- wart von Salzsäure die Holzsubstanz roth , violett , blau , grün oder gelb färben, sowie verschiedene aromatische Amine, die in neutraler oder angesäuerter Lösung Glelbfärbung verholzter Membranen hervor- rufen , werden schon längst in der botanischen Mikrotechnik ver- werthet. Den Erfolgen, mit welchen die Botaniker nach neuen Reagentien dieser Art gesucht haben , entspricht leider nicht die Sicherheit, mit der die Deutung der Reactionen gelungen ist. Tie- MANN und Haarmann ^ führten diese auf Coniferin zurück , Singer - fand neben der Gegenwart von Coniferin die Ursache der Holzstoff- reaction im Vanillingehalte der betreffenden Membranen. Dass er es freilich nicht bereits mit Zersetzungsproducten zu thun hatte , er- scheint bei seiner Methode nicht ausgeschlossen. Nickel ^ und Seliwanow* lehnten Singer's Erklärungsversuch ab und nahmen aldehydartige Stofie als charakteristischen Bestandtheil der verholzten Membranen an. Hinsichtlich der Phloroglucin- Salzsäureprobe erscheint erwiesen, dass man aus dem positiven Ausfall dieser Reaction allein noch nicht auf „Verholzung", auf einen Aldehyd, überhaupt nicht auf das Vorhandensein einer bestimmten Atomgruppe schliessen darf^. Ver- schiedene Phenole (Eugenol , Safrol , Anethol) , Alkohole (Styron, Coniferylalkohol, Syringenin), Aldehydoalkohole, Aldehyde und Säuren (Kaflfeesäure , Ferulasäure ^) führen gleichermaassen zu einem posi- tiven Ausfall der Phloroglucinprobe. Dass dieser überhaupt nicht von einer bestimmten Atomgruppe abhängig ist, veranschaulicht Verf. durch eine lehrreiche Tabelle , die über das Eintreten , beziehungs- weise Ausbleiben der Rothfärbung verschiedener chemischer Körper Aufschluss giebt. — Die Wirkung der anderen Reagentien gestattet ebenso wenig Rückschlüsse. Da sich die Angaben Nickel's und ^) TiEMANN u. Haarmann, Ueber das Coniferin (Ber. Deutsche Cham. Gesellsch. Bd. VH, 1874, p. (308). -) Singer, Beiträge zur näheren Kenntniss der Holzsubstanz und der verbolzten Gewebe (Sitzber. d. k. k. Acad. d. Wiss. Wien Bd. LXXXV, 1. Abth., 1882, p. 346). 3) Vgl. diese Zeitschr. Bd. IV, 1887, p. 237 und Bd. VI, 1889, p. 241. *) Vgl. Referat im Botan. Centralbl. Bd XLV, 1891, p. 279. ^) Vgl. auch Schellenberg's Beobachtungen an Harzen etc. (Diese Zeitschr. Bd. XIII, 1896, p. 261). **) Wie Verf. constatlrte, giebt ein alkoholisches Extract von Asa foetida mit Phloroglucin und Salzsäure eine rotliviolette Reaction. XVI, 1. Referate. 121 Seliwanow's auf die Rothrärbung der Aldehyde durch Phloroglucin phis Salzsäure stützen, werden wir hiernach ihre Beweisführung- nicht mehr als zwingend anerkennen dürfen. Die Frage nach der Natur des charakteristischen Bestandtheils im Holze ist nach wie vor als oft'en zu betrachten. Auch die bisherigen Versuche , den Träger der Ligninreaction aus dem Holz zu isoliren , sind gescheitert. Singer war der Erste, der sich um die Isolirung des fraglichen Stoffes bemühte. Hoff- meister, Seliwanow , Nickel, Allen, Tollens, Ihl ^ und Lindsey, die nach ihm dasselbe Problem beschäftigte, gelangten ebenso wenig wie er zu befriedigenden Resultaten. Dem Verf. ist es erst ge- lungen, diese Aufgabe zu lösen. „Kocht man Holzfeilspähne einige Minuten mit starker Zinn- chlorürlösuug und versucht nach Erkalten der Probe die Phloro- glucinreaction, so ist zu beobachten, dass nicht allein das Holz sich roth färbt, sondern auch die darüber stehende Flüssigkeit roth wird. Schüttelt mau die mit Zinnchlorür behandelte Probe erst mit Aether oder Benzol aus und untersucht dann das Extractionsmittel , so ist an der intensiven Phloroglucinreaction zu erkennen, dass die chromo- gene Substanz durch Zinnchlorür abgespalten wurde und sich nun mit Benzol, Aether und anderen Mitteln extrahireu lässt." — Aebn- lich wie Zinnchlorürlösung wirkt kalte gesättigte Natriumbisulfitlösung. Ferner konnte Verf. coustatireu, dass auch ohne vorherige Ab- spaltung sich mit kochendem Alkohol, Benzol oder Aether ein Ex- tract gewinnen lässt, das die Ligninreaction giebt. Zur Reindarstellung des gesuchten Körpers erwies sich aber nur die Zinnchlorürlösung geeignet. Auf die Einzelheiten der vom Verf. gefundenen Methode einzugehen , ist hier nicht der Ort. Die eingehende Schilderung seines Verfahrens möge in der Original- abbandlung (p. 156 — 159) nachgelesen werden. Man erhält bei sorg- fältigem Arbeiten aus einem Kilogramm Holz minimale Mengen eines hellgelblich oder braunen, krystallinischen Pulvers , welches äusserst intensiv dieselben Reactionen giebt wie verholzte Membranen , und zwar mit denselben Nuancen wie die letzteren. Am intensivsten ist die kirsclirothe Reaction mit Phloroglucin. „Die kleinsten Spuren dieses Körpers sind mittels dieser Reaction nachzuweisen. Ein ein- getrocknetes Gemisch einer alkoholischen Lösung der Substanz und einer alkoholischen Phloroglucinlösung ist ein äusserst empfindliches 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. II, 1885, p. 259. 122 Referate. XVI, 1. Reagenz auf Salzsäuredämpfe und könnte vielleicht zu analytischen Zwecken brauchbar sein, ebenso ist eine salzsäurehaltige Lösung der Substanz ein höchst empfindliches Reagenz auf Phlorogluciu , bedeu- tend empfindlicher als die von Lindt^ empfohlene Vanillinsalzsäure." Die neu gefundene Substanz nennt Verf. H a d r o m a 1 (nach dem von Haberlandt eingeführten Terminus „Hadrom"). Das Hadro- mal dürfte als 1-, 3-, 4-Substitutionsproduct des Benzols anzusehen sein. Es folgt eine Aufzählung physikalischer und chemischer Eigen- schaften des Hadromals. — Die Entdeckung des Hadromals bringt Aufsehluss für mancherlei botanische und mikrotechnische Fragen. Zunächst erscheint ausser Zweifel , dass der Gehalt an Hadromal 1 bis 2 Procent der Trockensubstanz des Holzes nicht übersteigt. Die mit Zinnchlorür entholzten Gewebe färben sich violett mit Chlor- zinkjod und geben lösliche Substanzen an Kupferoxydammoniak ab. „Dies lässt vermuthen , dass der Paarung des Hadromals Cellulose ist, und wir dürfen mit einiger Wahrscheinlichkeit annehmen, dass derjenige Bestandtheil der verholzten Membranen, welcher die Ligninreactionen verursacht, neben einer sehr geringen Menge freien Hadromals ein Hadrom al- Celluloseäther ist." Zum Schluss der Abhandlung kommt Verf. noch einmal auf die von TiEMANN und Haarmann aufgeworfene Frage nach dem Coniferin- gehalt des Holzes zurück. — Das von Molisch empfohlene Coni- ferinreagenz (Thymolsalzsäurekaliumchloral- Gemisch) färbt Holz leb- haft grasgrün. Reines Coniferin (Merck) dagegen nimmt nach Verf. bei Behandlung mit dem genannten Gemisch blau violette Farbe an, die schnell nach Roth und Rothorange umschlägt. Hadro- mal färbt sieh rothbraun , dann dottergelb , extrahirtes Holz braun- gelb. Ob verholzte Membranen wirklich Coniferin enthalten , muss hiernach fraglich scheinen. Küster [Münclien). Wieler , A. , Die Function der P n e u m a t h o d e n und des Aerenchyms (Pringsheim's Jahrb. f. wiss. Bot. Bd. XXXH, 1898, p. 503—524). Die Abhandlung bringt neben anderem eine Reihe neuer Details über die Anatomie und das mikrochemische Verhalten des Pneuma- thodengewebes. — Im Gewebe der von Jost^ beschriebenen Luft- 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. H, 1885, p. 495. ") JosT, Ein Beitrag zur Kenntniss der Atmungsorgane der Pflanzen (Botan. Zeitg. 1887, p. 601). XVI, 1. Referate. 123 l)neumatliodeii sind nach Auffassung- dieses Autors die Intercellularen von vornherein verstopft. „Er fasst die Verstopfungen als zu der ^littclhimelle gehörige Zwickel auf." Nach Wieler sind die ver- meintlichen Zwickel als nachträgliche Ausfüllungen der Intercellular- räume zu betrachten. Ueber die ehemische Natur dieser Füllmasse und der Membranen des Pneumathodengewebes geben einige mikro- chemische Reactionen Aufschluss. In concentrirter Schwefelsäure wird von Längsschnittpräparaten einer Pneumathode alles bis auf das Pneumathodengewebe zerstört. Die Ausfüllungen der Intercellularräume färben sich in ihr meist gräulichbraun, in kochender Kalilauge meist intensiv gelb. Membranen wie Verstopfungen des Pneumathodengewebes geben mit schwefel- saurem Anilin sowie mit Salzsäure und Phloroglucin die Holzreaction, mit Schwefelsäure, Natronlauge und Osmiumsäure behandelt, ver- halten sie sich wie verkorkte Membranen. Dafür, dass thatsächlich ein Verkorkungsprocess in ihnen sich vollzogen hat, spricht vor allem ihre Widerstandsfähigkeit gegen Schwefelsäure. Ob auch Verholzung stattgefunden hat, kann ohne chemische Analyse nicht entschieden werden. Die Gelb- beziehungsweise Ptothfärbung durch die bekannten Reageutien beweist uns, dass in den Füllmassen der Pneumathoden dieselben Substanzen verkommen, die dem Lignin stets beigemengt sind und den mit diesem imprägnirten Membranen die bekannten Eigenschaften geben. — Ohne ihnen völlig zu gleichen, erinnern die in Rede stehenden Ausfüllungen in ihrem mikrochemischen Verhalten an „die gummösen Verstopfungen des serehkrauken Zuckerrohres", über die Verf. anderweitig eingehende Mittheilungen verötfentlich hat. Küster {München). Ikeuo, S. , Untersuchungen über die Entwicklung der Geschlechtsorgane und den Vorgang der Be- fruchtung bei Cycas revoluta (Prixgsheim's Jahrb. f. wiss. Bot. Bd. XXXII, 1898, p. 557—602). Verf. bediente sich vorzugsweise fixirten Materiales. Von den vier benutzten Fixirungsfiüssigkeiten : Flemming's Chromosmiumessig- säure , Merkel's Platinchloridchromsäure , Keiser's Sublimateisessig und absolutem Alkohol, lieferte das erstgenannte Gemisch die besten Resultate. Die Schwärzung der Präparate durch die in ihm ent- haltene Osmiumsäure wurde durch Behandlung der aufgeklebten ^) Wieler, A., in FtixFsxtJCK's Beitr, z. wiss. Botan. Bd. II, 1897, p. 67. 124 Referate. XVI, 1. Schnitte mit WartserstofFsiipf-roxyd beseitigt. Zur Färbung dienten Säurefuchsia und Methylenblau fnach Rosen) , Hämatoxylin Tnach Delafield, auch mit Nachfärbung durch Biomarckbraun; und Eisen- ammonhämatoxylin fnach Heidekhain). Interessante Vorgänge, auf die wir besonders aufmerksam machen wollen , spielen sich während der zweiten Entwicklungsperiode des Archegoniums ab, die Verf. als „Wachsthumsperiode" bezeichnet und von der Keim- und Reifungsperiode unterscheidet. Während der Wachsthumsperiode verschwindet das feinflidige Gerüst in den Kernen der Wandungszellen, und die Kerne werden zu homogenen, stark färbbaren Körpern, in welchen keine Structur mehr, nur noch der Nucleolus tinctionell sich nachweisen lässt. Bei Behandlung mit Säure- fuchsin und Methylenblau färbt sich der „condensirte" Zellkern roth. der Nucleolus blau. Dieselbe Veränderung der Kerne tritt auch in vielen Endospermzellen ein. — Nach Verf. sind die Zellkerne in diesem Stadium mit einer halbflüssigen Masse erfüllt, die früher oder später durch die feinen Membranporen aus den Wandungszellen in die Centralzelle fliesst und das Material zur allmählichen Erfüllung der letzteren mit Cytoplasma abgiebt. Diese Stoffwanderung lässt sich an geeigneten Schnitten mikrotechnisch nachweisen. Der frag- liche Stoff erscheint an fixirtem Material als Granulationen, die bald ausserhalb des Zellkernes, bald in den Plasmabrücken, bald in der Centralzelle zu finden sind. Die gleiche Condensirung erfolgt während der Wachsthums- periode im Zellkern der Centralzellen. Vor den Kernen kommen unregelmässige Substauzklumpen zur Ablagerung. Reactionen gegen verschiedene Farbstoffe beweisen, dass die letzteren mit dem in den Kernen der Central- und Wandungszellen ausgeschiedenen Stoffe qualitativ identisch sind. — Dafür, dass es sich um einen Protein- stoflf handelt, sprechen seine Coagulirbarkeit durch Osmiumsäure oder Sublimat und seine Erythrophilie , durch die er mit den Protein- krystalloiden übereinstimmt. — Mit dem Nucleolus sind die erwähnten Granulationen etc. substantiell nicht gleichwerthig. „Die beste Unter- scheidungsmethode besteht darin, dass man die aus mit Flemüixg's Lösung fixirten Materialien hergestellten Schnitte mit 0'2procentigem Säurefuchsin färbt (2 Stunden), mit Wasser auswäscht, dann mit 0'2pro- centigem Methylenblau färbt (wenigstens anderthalb Stunden;, mit Alko- hol auswäscht, mit Nelkenöl behandelt (eine Stunde), mit Xylol aufhellt und in Canadabalsam einschliesst, indem dann die Granulationen sich roth und die Nucleolen blau färben." Küster [München). XVI, 1. Referate. 125 JE. Mineral ogisch-Geolofjisches. Referent: Professor Dr. R. Brauns in Giessen. Kmatz-Koschlau, K. y. , u. Wühler, L. , Die natürlichen F ä r b 11 n jr e u der Mineralien (Tschermak's Mineral, u. Petrogr. Mittheil. Bd. XVIII, 1899, p. 304—333). Die Verft'. haben viele gefärbte Mineralien auf ihren Farbstoff hin untersucht und gefunden, dass Flussspath und Apatit, blauer Baryt, Cölestin und Anhydrit, blaues Steinsalz, blauer und violetter Kalkspath, Zirkon, Rauchtopas, Amethyst, grüner Mikroklin, Turmalin (Paibellitj und Topas darch organische Substanz gefärbt sind. Sie stellen sich damit in Gegensatz zu der allerdings sehr wenig be- gründeten Anschauung von E. Weinschenk, dass die Färbung von vielen dieser Mineralien durch anorganische Substanz und zwar durch Verbindungen (Ti2 03, Zr.^O., und analoge) hervorgerufen werde, die sich in der Natur noch nicht gefunden haben und die zum Theil überhaupt noch nicht dargestellt werden konnten.-^ Neben den Mine- ralien , deren dilute Färbung rein organischen Ursprungs ist , giebt es andere, in denen zugleich anorganischer Farbstoff, und wieder andere, in denen nur anorganische Beimengungen die Farbe bedingen (Fiubin, Sapphir, Spinell, Beryll). R. Brauns. Wadsworth, 31. E., Some methods of determining the positive or negative character of mineral plates in converging polarized light with the petrographical microscope (Amer. Geologist, vol. XXI, 1898, p. 170j. Eine Zusammenstellung der bekannten Methoden zur Bestimmung des Charakters der Doppelbrechung von Mineralblättchen im con- vergenten polarisirten Licht. R. Brauns. Klein, C, Optische Studien I (Sitzber. d. K. Preuss. Acad. d. Wiss. Berlin 1899, p. 346—364). 1) Die optischen Constanten des Anorthits vom Vesuv. Der Verf. hat nach der von ihm vervollkommneten Methode 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIII, 1896, p. 540. 126 Referate. XVI, 1. der Totalreflexion gute Krystalle des Anortliits untersucht und als Resultat seiner sorgfältigen Beobachtungen Folgendes erhalten: Die zweite , positive Mittellinie für mittlere Farben steht beim Anorthit normal auf Fläche e = 2 ,P' oc (021). Die Achsenebene neigt um 60^/2" gegß^ ^^^ Projection der ä- Achse auf dieser Fläche. Der wahre Achsenwinkel ist in seinem spitzen Theil = 76*^ 30' für Na -Licht. Um diese erste Mittellinie ist die Doppelbrechung ne- gativ ; es findet statt Q, p. 677; vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 102). c. Beleucbtungsapparat. Keeley, F. J. , Neglected feature in the construetion of achromatic con- densers (Microsc. Bull. 1899, Febr., p. 5). Keeley, F. J., Some simple methods of producing vertical illumination (Microsc. Bull. 1899, Febr., p. 7). d. 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Die Apparate sind bereits seit mehreren Jahren im hiesigen Laboratorium in Function und haben sich zu voller Zufriedenheit bewährt. Um dieselben gewünschten Falles sofort leicht reconstruiren zu können, sind die Maasse in Cubik- centimetern überall angegeben. 1. Bürette mit selbstthätiger Niilleinstellung und Rückfluss des Restes der Titerflüssigkeit in die Standflasche. Den grossen Vortheil dieser Bürette wird namentlich Derjenige vollgültig zu schätzen wissen, der täglich viele gleichartige Titrirungen hinter einander auszuführen hat. Es ist eine gewöhnliche Bürette (Figur 1) von 0"9 cm innerem Durchmesser mit Seitenrohr, das bei a unter einem Winkel von etwa 70° abgeht. Bei c befindet sich der gewöhnliche Glashahn, dessen Zeitscbr. f. wiss. Mikroskopie. XVI, 2. 10 146 Heydenrcicli: Neuerungen in der biicteriolügischen Technik. XVI, 2, ßolirung- jedoch mit dem Seitenrolir dann eommunicirt , wenn seine Handhabe von der Büi'ette abgewendet ist wie in der Figur. Der andere Hahn bei b schliesst die Flüssigkeit in der Bürette über ihm ab , wenn dieselbe hinaufgepresst wurde , während durch das enge Seitenrohr /' d beim Schlüsse dieses Hahnes sowohl Flüssigkeit in die Bürette von unten nach oben hinaufgepresst werden kann , als auch überschüssige Mengen, die über den Anfang des Rohres bei d (dem 0- Punkt) stehen, herabfliessen können. Endlich befindet sich bei e eine Erweiterung, um dem Hinaiisschleudern der Flüssigkeit aus der Röhre zu begegnen, falls ein unerfahre- ner oder unachtsamer Arbeiter den Gummi- ballon der Flasche Figur 2, 8 zu heftig zu- sammendrücken sollte. Sehr erwünscht ist es, dass die Theil- striche der vollen (Jentimeter rund herum um das Rohr gehen, während die Zehntel -Thei- lungen wie gewöhnlich bleiben können. Dieses erleichtert ausserordentlich das horizontale Ablesen und macht alle Schwimmer etc. un- nöthig. Will man nämlich den Flüssigkeits- stand auf einem vollen Centimeter-Theilstrich ablesen, so befindet sich das Auge dann in horizontaler Ebene mit dem letzteren , Avenn er nicht als Oval, sondern als eine gerade Linie erscheint. Steht die Flüssigkeit auf der Hälfte zwischen zwei vollen Centimeterstrichen, also auf 0'5, 1'5 , 2*5, 3"5 etc., so wird sich das Auge in einer Ebene mit ihr befin- den, wenn das Oval des oberen vollen Centi- !• meterstriches ebenso rund erscheint wie des unter ihm stehenden Centimeterstriches. Bei Entfernungen zwischen der Hälfte und einem vollen (Jentimeterstrich muss das Oval von letzterem um so kleiner und enger erscheinen, um je näher der Flüssigkeitsstaud zu ihm heranreicht. Diese Schätzungen geben genügend genaue Resultate, da der Beobachtungsfehler sich um Hundertstel Centimeter dreht. Es ist aber nöthig , dass die kurzen Zehntelstriche nach vorn, dem Beobachter zu, auf die Röhre geritzt seien, und nicht etwa zum Hahn c hin, und dass die Zahlen eben- falls von vorn her gelesen werden können. XV'I, 2. Hoydenreich: Nciierung-en in der bacteriologischen Technik. 147 Die Wirkuni;- niul Handluibnng des Apparates ist am besten ;ins Figur 2 ersiclitlicli. Die IMirette steht in einer WouLFF'sclien VAn- bis Zweiliter-Flasche, hermetisch durch Kautschuk])fr(t]if in einer der Oeti'nungen befestigt. Durch die andere Oetiiuing , gleichfalls iiermetisch durch Gummistopfen geschlossen, geht ein Glasrolir mit einem Wattepfropfen. Ein ebensolcher Wattepfropfen befindet sich bei c in der Bürette oben, und über c hängt eine Glaskappe. Es ist dieses unumgänglich nothweudig , damit aller Staub von der Standtlasche sowohl als auch von der Bürette ab- gehalten werde. Dafür halten sich aber auch h'iclit zersetzbare Titer- tiüssigkeiten , wie z. B. Kaliumhypermanganat-, Silbernitratlösungen etc., ausserordentlich lauge (ge- schwärzte Flaschen, s. un- ten). Bei b ist ein über das Glasrohr vermittels Kaut- schukschlauch gestülpter Kautschukball mit Loch in der Basis sichtbar. Drückt mau nun, mit dem Finger auf dem Loch, den Ballon ein- bis drei- mal hinter einander zu- sammen , so steigt die Flüssigkeit in die Bürette durch den offenen Hahn liei f. Ist sie in der Nähe des 0-Strichs oben angelangt, so schliesst man /"und drückt noch ein wenig, um die Flüssigkeit etwas über zu bringen (vorsichtig wegen Herausschleuderns bei c). Dann entfernt man den Finger von />, worauf die überschüssige Flüssigkeit durch Rohr e herabfliesst, und das Niveau stellt sich automatisch auf ein, Aveil der 0-Strich genau am unteren Rande der Rohröftnung e steht. Es verstellt sich von selbst, dass vorher ein wenig Flüssigkeit durch Hahn d abgelassen werden muss, um alle Luft aus der ganzen Bürette zu entfernen. Darauf bringt man das Niveau wieder auf 0. 10* 148 Heydenreich: Neuerungen in der bacteriologischen Technik. XVI, 2. Die Diirclibobruug im Gummiljall stellt man dadurch her, dass mau ihn mittels dickem glühenden Draht hinten durchsticht und darauf mehrere Male mit Benzin und dann trocken abwischt. Die vordere Verlängerung des Balles (wie sie z. B, zu Ohrenspritzen von etwa 75 cc Inhalt verwendet werden) verbindet man mit einem Glas- rohr, und an dieses setzt man den Verbindungsscblaucb. Da man mit einmaligem Druck auf den Ball die Flüssigkeit nicht bis über den 0-Punkt hinaufbringen kann, so thut man es stossweiee drei-, vier- mal ; zwischen jedem Male kneift man mit der anderen Hand den Gummischlauch fest. Oder man kann auch mit der einen Hand aus- kommen : man nimmt nämlich den das Loch zudrückenden Finger rascb ab, und nach sofortigem Lufteintreten in den Ball setzt man den Finger wieder auf die Oetfnung und drückt aufs Neue. Es geht dieses so schnell vor sich , dass die Luft keine Zeit hat , durch die Watte bei a aus der Bürette hinauszuströmen, und das Niveau der Flüssigkeit in der Bürette bleibt deshalb gewöhnlich auf derselben Stelle ohne zu sinken. Dann ein neuer Ruck , und wieder rasche Abnahme und Aufsetzen des Fingers etc., bis man die Titerflüssigkeit etwas über gebracht hat. Dann lässt man los, der Ueberschuss geht durch e in die Flasche zurück, während der Hahn f den Rest in der Bürette von bis herab aufhält. Bedingung hierbei ist, dass der Wattepfropfen an h ziemlich fest sitzt (nicht zu fest \). — Noch einen praktischen Wink. Es ist bereits in unserem Labo- ratorium wiederholt vorgekommen, dass jüngere Collegen im Beginne ihrer Thätigkeit die Flüssigkeit mit zu grosser Gewalt hinaufjagen, in Folge dessen dieselbe über steigt, rasch die obere Watte bei c erreicht, sogar durch sie hindurchgeht und sich nach aussen über Bürette und Tisch ergiesst. Das ist sehr störend ; auch kann hier- durch die ganze Titerflüssigkeit verdorben werden. Die Flasche lässt sich leicht vor Licht schützen, am besten durch Einstellen in ein oben offenes Pappefutteral , während der obere Theil derselben nebst den Flaschenhälsen dreimal mit dünnem Asphaltanstrich bestrichen worden ist, Mitsammt dem Futterale kommt die Flasche dann auf das Holzbrett eines passenden Stativs (etwa BuNSEx's) in einen Ausschnitt, oder durch vier Nägel ohne Köpfe gehalten, die Bürette aber wird oben durch eine gewöhnliche Stativgabel fest und senkrecht eingeklemmt (Figur 2). Die einzelnen Maasse sind am besten aus der Zeichnung Figur 1 zu ersehen. Die 50 cc - Büretten sind für manche Arbeiten mit starkem Verbrauch sehr bequem, z. B. für ^Vasserhärtebestimmungen XVI, 2. Ileydenreich: Neuerungen in der bacteriologischen Technik. 149 nach Ki.AUK, ilocli , da die Kiustelluny auf so leicht ist und gar keine Aufmerksamkeit bedingt, so ist es meist bequemer, eine Bürette von 25 bis 30 cc anzuwenden. Da es technisch schwer ist, den (I- Punkt genau und richtig am unteren Kande des Abhiufsrolires (Figur 2) anzubringen, so bestimnfe ein jeder den Fehler des ersten cc selbst, und notire ilni mit -|- oder — auf die Bürette oder Eti- quette an der Bürette selbst. Solche Büretten fungiren in unserem Laboratorium bereits über zwei Jahre zu allgemeiner und stetiger Zufriedenheit. Man kann diese Bürette noch vereinfachen, wenn man die Köhre elf (Figur 1) nach innen, in die Bürette verlegt. Dann muss aber der Hahn h doppelte Bohrung haben, imd bei einer Viertel- drehung die Flasche mit dieser Röhre df\ bei einer weiteren Drehung dieselbe mit der Bürette verbinden, behufs Ablassen sowie Anfüllen derselben. Der Vortheil dieser Bürette liegt namentlich in der automatischen 0- Einstellung und in der Möglichkeit, die Restflüssigkeit in die Flasche zurückfliessen zu lassen. Sie erspart dem Arbeiter Zeit, erlaubt ihm, seine Aufmerksamkeit auf Nebendinge zu richten ; eine Verschwendung von Titerflüssigkeit ist ausgeschlossen. Die Füllung der Standflasche geschieht natürlich durch deren zweiten Hals. 2. Kolben zum Aufbewahren von feuchten Nährböden. Jeder praktisch und täglich mit Bacteriologie beschäftigte Unter- sucher wird zugestehen, dass man halbfeste Nährböden in feuchten Räumen in Gefässen mit Wattepfropfen schwerlich auHjcwahren kann. Durch die Watte wachsen Schimmelpilze, die anfangs unten an der Watte hervorkeimen, alsdann aber auch auf der Oberfläche der Nährböden selbst erscheinen. Dieser Umstand hat mich (und einige Andere) bereits seit langer Zeit bewogen, die hygroskopische Watte überhaupt zu meiden und sie durch gewöhnliche fettreiclie zu er- setzen, da erstere aus der Luft Feuchtigkeit anzieht uud leichter ver- und durchschimmelt. Ein anderer Uebelstand der Watte überhaupt liegt in der rascheren Verdunstimg und Eintrocknung der Nährböden unter deren Verschluss. Dann die Calamität mit dem Staub ! Wie oft sind schon werth- volle Culturen verloren gegangen wegen Verstaubung des Watte- 150 Hcydcnreicli : Neuerungen in der bacteriologischen Technik. XVI, 2. pfropt'ens oder des Gefässraudes, aucli uaeh vurlierigem Abbrennen derselben. Hiergegen sind ancli schon melirfacli mehr oder weniger zweckmässige Vorkehrungen getroffen worden (Maassen, Soyka, Forster, Fol), docli sind sie alle etwas complicirt. Auch Imbil)itit)n des Wattepfropfens mit Sublimat und darauf Verschluss mit Gummi- kappe hilft nichts. Ebenso habe ich das Verbinden mit Makintosch. Gnmmipapier etc. aufgegeben. Immer gab die Watte Gelegenheit zu Vernnreinigungen. Ich versuchte, Probirröhrchen mit Nährmedien nnd Watteverschlnss dadurch vor Austrocknung zu schützen, dass ich sie „en masse" zu je 80 bis 100 Stück in einen allseitig ge- schlossenen Zinkcyliuder setzte und auf den Boden etwas Borsäure- lösuug goss. Alle Nährmedien in den Probirröhren verschim- melten, und ich rettete kein emziges. Nicht Weniges wurde schon versucht, um ganz ohne Watte auszukommen. Mau überdeckte die Probirröhreu mit langen Glaskappen oder stülpte etwas weitere Probirröhreu über die- selben. Schon Pasteur wies nach , dass eine 2- bis 3fach gebogene dünne Piöhre das In- nere eines Gefässes vor Verun- reinigung vollkommen schütze. Auf demselben Principe beruht die Anwendung der von mir in die Bacteriologie eingeführten Doppelschalen. ^ Hierher gehört auch der Verschluss vouvanHest,- der in dieser Richtung jedenfalls den ersten Platz einzunehmen bestimmt ist, da er sich als frei von allen oben angeführten Fehlern erwiesen hat. Doch von ihm etwas später, zuerst einige Worte über den Kolben. Der Kolben (Figur 3) ist ein gewöhnlicher dünnwandiger, am besten aus Jenaer Glas, da er bei den unvermeidlichen Temperatur- schwankungen nicht so leicht springt. An der Seite unten, etwa J0,3 sein E;s3cm'i<4:Cm>;< 7cm. »i 3. ^) Heydenreich, L., Methoden der Erfurschung- niederer Organismen, 2. Aufl., 1885, p. 101 u. 216. — Petri beschrieb dieselben zwei Jahre später (Centralbl. f. Bacteriol. Bd. I, 1887, No. 9, p. 279). 2) VAX Hest, Centralbl. f. Bacteriol. Bd. XVI, 1891, p. 435 u. 495. XVI, 2. Hey clenr eich: Neuerungen in der bacteriologischen Technik, i.ji 1 cm von der Basis, ist eine Kölire von 3 bis 4 mm innerer Weite und 3 cm Länge angeblasen, die :un Ende etwas verdickt ist, zum festeren Verschluss der Kautschukröhre c. Letztere, etwa 4 cm lang, wird durcli einen gewöhnlichen MoHu'schen Quetscher verschlossen, und trägt an ilirem Ende eine dünne Glasröhre von 6 bis 7 cm Länge und 3 bis 4 mm innerer Weite, die an ihrem Ende nicht verengt zu sein braucht. Der Hals a ist mit einem Gummipfropfen geschlossen, und durch diesen geht nun der van HESx'sche Verschluss, der niclits anderes als eine IGmal hin- und hergebogene offene Röhre darstellt. Diese Röhre ist in Figur 4 etwas aus einander gezogen dargestellt , in Figur o ist sie zusammengedrückt. Will mau jedoch das Nützliche mit dem schö- nen Aeusseren verbinden, so macht man einen regelmässigen Knäuel aus den 16 Biegungen wie in Figur 6. Die Figur 7 zeigt dann diesen Knäuel von oben gesehen. Die letzte Biegung sieht stets nach unten. AVenn man nun durch eine der- artig gekrümmte Röhre nicht zu schnell Luft durchsaugt (nicht mehr als ein Liter in der Minute), so be- freit sich dieselbe völlig von allen ihr anhaftenden Keimen, also genau so wie beim Durchgang durch Watte, nur mit dem Unterschiede, dass nie- mals Schimmelpilze durchwuchern und keine neuuenswerthe Austrocknung des Mediums stattfindet. Durch Versuche ist festgestellt, dass be- reits die zehnte Biegung keine Bacterien mehr enthält. Dieser Verschluss wird fest in den Gummipfropfen eingelassen und der Pfropfen ebenfalls luftdicht in den Kolbenhals eingepresst. Vorher war in den Kolben das verflüssigte oder flüssige Nährmedium eingeführt, der Quetschhahn bei c, Figur 3 geschlossen. Hierauf wird er in den PAPix'schen Topf eingestellt und bei 110^ C. etwa 10 Minuten laug gelialten, gerechnet vom Augenblicke, wo das Ther- mometer 110^ zeigt. Darauf wird der Kolben aus dem Topf ge- 6. 152 Heydenreich: Neuerungen in der bacteriolosisclien Technik. XVI, 2. nommen und nach einiger Zeit — bei Jenaer Glas wolü sofort (es liält einen plötzlichen Uebergang von 200" auf O" in der Kegel ohne zu springen, aus) — in den von mir angegebenen Erstarrungs- kasten, ^ d. h. in fliessendes kaltes Leitungswasser gestellt, damit die Gelatine, Agar etc. nicht beim langsamen Erstarren im Zimmer zu viel von ihrer Festigkeit verlieren. AVill man mm die Gelatine (Bouillon etc.) in meine Doppel- schalen oder anderweitig ansgiessen und verwenden, so liat man nur auf den Quetscher bei c, Figur 3 zu drücken und soviel Flüssigkeit oder verflüssigte Gelatine aus dem Kolben herauszulassen, als man davon nöthig hat. Das Ausiliessen geht ganz gut, da ja der van HEST'sche Verschluss stets otfen bleibt. Eine Verunreinigung mit Keimen ist nicht zu befürchten und mir noch niemals in 5 Jahren vorgekommen. Bevor man ausgiesst, ist natürlich das Ende des Glasrohrs bei c ein wenig durch die Flamme zu ziehen, und sind ausserdem die ersten ausfliessenden Portionen zu verwerfen. Gewöhn- lich aber ist dieses Eöhrchen auch so wie so steril, da der Kolben behufs rascherer Verflüssigung der Gelatine auf einige Zeit in kochen- des Wasser eingestellt wird. (Vorsicht wegen Springen. Jenaer Glas !) Zum Wasser kann immerhin etwa ein Procent Soda zur sichereren Desinfection noch zugefügt werden. Man kann ja immer- hin auch noch an das Rohr c verschiedene Verschlüsse , etwa den FoRSTER'schen, MAASSEN'schen, HEiM'schen etc. anbringen, doch kann ich aus Erfahrung sagen, dass man auch ohne dem auskommt. Mit Hilfe dieses Kolbens ist es möglich, in kürzester Zeit 40, 50, 60 imd mehr Doppelschalen z. B. behufs bacteriologischer Wasser- untersuchung zu beschicken, wie es nicht gar selten in Militärressorts vorkommt, z. B. beim Neubau von Kasernen, Veränderung und Auf- suchen von Terrains für neue Lagerstätten etc. Hierauf vermischt man gründlich — durch Schwenken der Schalen in verschiedenen Richtungen — die flüssige Gelatine mit der in jede Schale ein- gebrachten Portion Wasser, und stellt diese Mischungen unter den von mir angegebenen Eiskühlapparat zum Plattengiessen. - Dieser Apparat, der entgegengesetzt dem Kocn'schen Eiskühler construirt ist, bringt jede verflüssigte Nährgelatine, geschweige denn Agar in 5 bis 6 Minuten sicher zum Erstarren. In den beigegebenen Zeicli- ^) Heydenreich, L., Einige Neuerungen in der bacteriologischen Tech- nik (Diese Zeitschr. Bd. IX, 1892, p. 309). ■^) Heydenreich, L., Diese Zeitschr. Bd. IX, 1892, p. oOG u. ff. XVI, 2. Ileydenreicli : Neuerungen in der bacteriologischen Teclmik. 153 Illingen Figur 8 und 9 ist der seitlier vervollkommnete Apparat ab- gebildet. Es ist eine einfache quadratische, aber ganz ebene Messingplatte von ;! bis 4 mm Dicke, und von ."i^X.").') cm Seitenlänge. Ander l'nterseite sind drei Spitzen fest angeschraubt oder angelöthet : Zwei \(in ihnen kiuinen durch Schrauben hoch nnd niedrig gestellt werden, die dritte vordere Spitze ist fest. Das ist die Basis des Apparats, denn auf die durch Libelle nivellirte Platte werden meine Doppel- schalen mit der tiüssigen Gelatine gestellt. Xun kommt der Kühl- apparat, welcher im Gegensatz zu Koch oben auf die Platten ge- stellt wird und nicht unten, da ja die kalte Luft nicht ^„^j^.'Wlff^^^^^'^'^^'^ ^ \-on unten nach oben, son- |f|||||||iiillil|||||||||||||||||i dern von oben nach nnten strömt. Der Kühlaiiparat ist ,„ ,„„ „, „„,„„„ , , __,„„„, eine einfache Pfanne, aber ■■L- J«"" i"" iiiiiiiiiimw:kiiii.*«W'I'' fg\^ durchaus aus Metall, am l *"'™ '^-^ besten aus Messing, am bil- ligsten aus Zink. Stellt man ll-. die Pfanne anf die Doppel- schalen und legt in die Pfanne Eis, so ist alles zum Erstarren fertiü': Doch gewinnt der Ap- -- ^ parat bedeutend, wenn man l^^-^^^^^^^^J i' die Pfanne doppelseitig macht, <^l 32cm >| i lio mit der einen Oetfnung nach iscml^ 1™. .y.. oben , der anderen nach un- i.bcm ten und zwar, wenn die eine 9. der Uetfnungen, wie in Figur 8 die obere, etwas weiter gemacht wird, damit sie beim Umwenden direct auf die Platte zu liegen kommt, und die Seitenwände über die Platte von allen Seiten herabhängen (Figur 9 oben). Die andere untere Oetfnung ist kleiner als die Platte und zwar gerade so gross, dass sie, auf die Messingplatte gestellt, von allen Seiten etwa 1*5 cm vom Piande nach innen absteht. Damit ein Herabgleiten vermie- den und es leichter wird, rasch die Pfanne aufzusetzen, ist rund um die Oetfnung ein verbreiteter Rand angelöthet, der zuerst hori- zontal und darauf senkrecht nach unten umbiegt (Figur 9 im Durch- schnitt). Dieses ist die gewöhnliche Stellung der Pfanne, denn in dem nun entstandenen Hohlraum zwischen Pfannenboden und ^lessing- 154 Hejulenreich: Neuerungen in der bacteriulogiöclien Technik. XVI, 2. platte (Ilölie 7 "5 cm) können ganz bequem mehrere Schichten meiner gegossenen Doppelschalen Platz fintlen und bei dieser Anordnung in 5 längstens 10 Minuten erstarren. Figur U giebt einen Querdnrch- schnitt der Pfanne nebst genauen Maassen wieder, — bei 35 cm Seitenlänge der Messingplatte. Diese Maasse haben sich bisher in der Praxis gut bewährt. Ist nun die verflüssigte Gelatine in den Doppelschalen erstarrt, so stellt man dieselben vorsichtig eine auf die andere, und alle zu- sammen auf den Boden einer breiten Krystallisationsschale oder auf den unteren Theil einer grossen Doppelschale (Figur 10) von 18 bis 20 cm Durchmesser. Den Boden dieser Schale bedeckt man zuvor mit Schnitzeln von gebrauchtem nassem P^'iltrirpapier , welches mit Sublimatlösuug (etwa 1 : 1000 -{- 10 HCl) getränkt wurde; über die Doppelschalen, aber innerhalb der Piänder der unteren Schale , stülpt man ein ge- wöhnliches Cylinderglas wie man sie zum Einmachen der Fruchtsäfte gebraucht. Figur 10 giebt ein genügend deutliches Bild hiervon. In dieser Anordnung werden die Doppelschalen im Dunkeln bei Zimmer-, resp. Brüttemperatur aufbewahrt und wie gewöhnlich weiter verarbeitet. Wie einfach es nun auch schei- nen mag, sich einen, ja Dutzende von VAN ÜEST'schen Verschlüssen selbst zu bereiten , so möchte ich doch, um Anderen imliebsame Zeit- und Geldvergeudung zu ersparen, aus eigener Erfahrung noch darauf aufmerksam machen, dass es bei weitem nicht einerlei ist , welche Art Röhren mau hierzu nimmt. Röhren z. B. , Avelche gelöthet sind , taugen gar nichts ; denn bei Biegungen entstehen Löcher und Sprünge, welche den Bacterieu der Luft freien Eintritt gestatten, und die 16 Windungen illusorisch machen. Die Röhren, am besten aus gutem Messing oder Kupfer, sollen gezogen sein und keine Naht , respective Löthung haben , sie sollen weich sein und sich leicht und geschmeidig biegen , daher müssen sie vorher passend ausgeglüht werden, und nicht unter eine bestimmte Wauddicke herabsinken. Die besten Maasse sind : Lochdurchmesser 1 bis 3 mm, Wand- dicke ca. 0*75 mm, also voller Dickendurchmesser der ganzen Röhre ca. 3 bis 5 mm. In vorzüglicher Qualität lieferte mir solche Röhren 10. XVI, 2. Heydenrcieh : Neuerungen in der bacteriologisclien Technik, ifjö auf specielle Bestellung Max Cochius, Berlin S, Ritterstrasse 113, Messing- und Metalhvaareu-Fabrik. Doch ist bei dcf llestellung zu bemerken, dass die Röhren geglüht sein sollen, damit sie sich leiclit und weich biegen. Die Längen der einzelnen Windungen seien etwa 1"5 cm, das lange Ende kann 4 bis 5 cm genommen werden, das kurze Ende sieht nach unten und ist ein klein wenig kürzer als die Windungen zu machen. Hat man das Rohr, so muss man sicher sein, dass die Wände überall luftdicht sind, wovon man sich durch Luftaussaugen mit der Zunge leicht überzeugt. Ausserdem ist jeder van HESTSche Ver- schluss ebenso auf Luftdurchlässigkeit zu prüfen, und bei eventuellen Rissen nicht gleich zu verwerfen, sondern nachträglich zu verlöthen ; der Riss, resp. das kleine Loch, ist leicht zu linden, wenn mau bei geschlossenem einen Ende des vax HEsx'schen Verschlusses in das andere Ende durch ein Gummirohr stark hineinbläst : die Stelle, aus der unter Wasser deutlich sichtbare Luftbläschen aufsteigen, ist die Oetfnung oder der Riss. Für die laufenden Arbeiten im Laboratorium ist es am be- quemsten, obengenannten Kolben einen Inhalt von etwa 200 bis 250 cc zu geben, und sie in grösserer Zahl mit Nährmedien zu be- schicken. Für grössere Vorräthe sind solche von ein halb bis ein Liter zu nehmen. Letztere sind aber dann, ausgenommen die flüssigen Medien , immer wieder in die kleineren überzuführen und zu ver- theilen, denn keine der Gallerten verträgt, wie ja bekannt, zu häutige Erwärmungen und wiederholte Verflüssigungen. Die Arbeit mit diesen Kolben ist eine sehr rasche und spart erheblich Zeit und Mühe. Wer viel mit Plattengiessen zu thun liat, wird diese Kolben sofort vollauf würdigen und sie gewiss lieb ge- winnen. Ausser einer bedeutenden Erleichterung der Arbeit ist es von hohem Werthe, dass die Medien nie verschimmeln, es sei denn, dass in dem vax HESx'schen Verschluss selbst sich Wasser ansam- melte. Doch auch dieses verdunstet bald, und die Röhre ist wieder trocken und keimsicher. Auch ist es in jedem Augenblicke möglich, sie durch eine Flamme auf 200*^ zu bringen, ohne den Pfropfen zu verbrennen. Endlich ist es nicht minder hoch anzuschlagen, dass die Nähr- böden nicht eintrocknen. Ich hatte probeweise ein Gelatinemedium anderthalb Jahre auf einem Tisch aufgestellt, der mitten im Zimmer allem Zugwind durch Oettnen des Fensters soAvie Hin- und Hergehen von Menschen ausgesetzt Avar, und doch, trotzdem der Kolben lialb X56 Heydenreich: Neuerungen in der bacteriologischen Technik. XVI, 2. g'efiillt war, blieb die Oberfläche vollkommen eben mv\ ebenso glatt wie vorher. AVer mit Watteverschluss arbeitet, weiss, wie rasch die Oberfläche coucav wird, trocknet, schrumpft, respective .Sprünge be- kommt und sich schliesslich in ein kleines trockenes, dunkles, un- brauchbares Stück Gelatine umwandelt, und zwar bedeutend früher als in anderthalb Jahren. 3. Cylinder für steriles Wasser. Ein weiteres wichtiges Hülfsraittel für bacteriologisclie Wasser- nntersnchiingen, aber anch für viele nnd mannigfache andere Zwecke ist ein Gefäss , aus welchem man zu beliebiger Zeit , sozusagen in jedem Augenblicke, und durch Tage, Wochen und Monate hindurch bequem steriles Wasser abzapfen kann. Und zwar abzapfen sowohl in grosse wie in kleinste Gefässe , wie z. B. Probir- cylinder u. A. So ereignet es sich manchmal, dass man rasch Gefässe aus- zuspülen, Thiere, Organe, menschliche lebende , sowie todte Gewebe etc. zu reinigen , zu befeuchten , zu desiufici- ren hat, u. A. m. Jedesmal frisch steriles Wasser zu bereiten , ist sehr 11. zeitraubend , Ja manchmal überhaupt nicht möglich. Ein Gefäss, welches allen soeben erwähnten Anforderungen ent- spricht, ist in Figur 11 und 12 wiedergegeben und wohl ohne weiteres verständlich. Ein Kupfer- oder Messingcylinder von 18 cm Durch- messer, bei 20 cm Höhe und etAva 5 Liter Inhalt, ist innen überall gut verzinnt und steht auf drei Füssen. Unten , hart am Boden, befindet sich ein Ausflussrohr von 3 bis 4 mm Weite mit Hahn und von '6'ö bis 4 cm Länge. Mit diesem Rohr wird, entweder vor oder nach dem Sterilisiren, ein Glasrohr durch Gummischlauch ver- bunden , um das Wasser becjuemer in untergestellte Gefässe leiten zu können. Oben ist ein kurzer Hals eingelöthet (1*5 cm Weite bei o cm Höhe) für den Gummipfropfen mit van HESx'schem Verschluss. Sehr Avünschenswerth ist ein Wasserstandsrohr («), welches, um ein Zerbrechen bei den Manipulationen zu vermeiden, durch einen Metall- XVI, 2. Heydenreich : Neuerungen in der bactcrioloc^ischen Teelinik. i;,7 Schieber gescliützt werden kann. In Figur 11 ist der Schieber (ort- genommen. in Figur 12 (Ansiclit von oben) ist er in die Kinnen eingeschoben und scliützt das Glasrohr. Vor der Sterilisation wird der Hahn c in Figur 11 geschhjssen und der Cylinder mit destiliirtem Wasser niclit ganz bis olien hin durcli den ott'em'u Hals gefüllt. Nun setzt man den Gummii)fr(>i)ten mit dem vax llEsx'schen Verschluss fest auf den Hals , stellt den Apparat in den PAPix'schen Kochtopf, wie icli ihn in dieser Zeit- sclirift seiner Zeit beschrieb,^ und sterilisirt etwa '20 bis 30 Minuten bei 135^ (2 Atmosphären). — Um den Gummipfropf nicht unnützer Weise einer so grossen Hitze auszusetzen und ihn hierdurch möglicher- weise zu erweichen (bei mangelhafter Vulcanisirung). kann man ihn apart und gleichzeitig mit dem Glasröhrchen d in einprocentiger Sodalösuug ein Paar Minuten auskochen, den Verschluss aber über einer Spiritus- lampe scharf erhitzen, hierauf rasch beide zusammenfügen und dann erst auf den Hals des AVassercylinders aufsetzen. Die- ser letztere (der Hals) Avar unterdessen im PAPix'schen Topf mit einem Zinnhütchen, wie sie zum Verschluss von Weinflaschen verwendet werden, lose mit überhängen- den Rändern bedeckt. Man ötfnet nach ,^ der Sterilisation den PAPix'schen Topf, nimmt das Zinnhütchen ab und ersetzt dasselbe rasch und geschickt durch den eben sterilisirten Gummi- pfropf mit dem vax HEsx'schen Verschluss. Schliesslich kann mau den Pfropfen mit Paraffin dichten , doch ist dieses überflüssig, wenn alles lege artis und laut Vorschrift geschah. Will man nun steriles Wusser abzapfen, so öffnet man einfach den Hahn c f Figur 11), nachdem man vorher das Glasröhrchen d durch die Flamme gezogen hat und erkalten liess ; das Wasser wird ungehindert ausfliessen, da ja der Verschluss oben Luft durchlässt. Die ersten Portionen des AVassers werden abgegossen, die darauf folgenden dienen für die beabsichtigten Zwecke. ^) Heydenreich, L., Sterilisation mittels des Dampf kochtopfs (Papix- scher Topf) für bacteriologische Zwecke (Diese Zeitsclir. Bd. IV, 1887, p. Iff.). 158 Heydenreich: Neuerungen in der bacteriologischen Technik. XVI, 2. 4. Apparat zur "Wasserentnahme aus Tiefen für baeteriologische Untersuchungen. Dieses ist ein für einwandsfreie baeteriologische Untersuchungen sehr wiclitiger, ja unumgängliclier Apparat, und trotzdem ist es zu verwundern , dass ein solcher bis auf den heutigen Tag noch nicht zur vollen Zufriedenheit construirt worden ist. Am meisten entspricht noch den Forderungen der von Rohrbeck construirte Apparat, wäh- rend der HEYROTH'sche , ebenso der LepsiusscIic für praktische Zwecke zu complicirt, ja ungenügend sind. Auch die französische Methode des Evacuirens eines Glasrecipienten und nachherigem Ab- brechen einer ausgezogenen Spitze desselben unter Wasser in ge- wünschter Tiefe ist zu umständlich, namentlich wenn man viele Proben zu entnehmen hat. Ohne weiter in die detaillirte Kritik dieser Apparate einzu- gehen, will ich im folgenden den Wasserentuahmeapparat beschreiben, dessen wir uns im hiesigen Laboratorium seit 1893 bedienen und mit dem wir bis zur Stunde vollkommen zufrieden sind. 1894 Avurde er von Pleteneff und Ssesesnefp beschrieben. ^ Seitdem sind einige umveseutliche Verbesserungen an demselben angebracht worden, so dass sich der vollkommene Apparat nun folgendermaassen gestaltet (Figur 13): Die Entnahmeflasche ist eine gewöhnliche Glastlasche mit eiu- geschliffenem, plattem Glasstöpsel (von oben nach unten), wie sie zu chemischen Standgefässen benutzt werden; sie hat einen Inhalt von etwa 180 bis 200, selbst bis 250 cc. Alle diese Grössen passen zum Apparat , man braucht also nicht eigene Glasflaschen zu be- stellen , was die Vorrichtung mmütz vertheuern würde. Nur hat man darauf zu achten, dass die obere Platte der Glasstöpsel nicht etwa breiter sei als der Bleikopf des Apparats (a) , der die Stöpsel zu heben und zu senken hat. Ausserdem ist es erforderlich , dass der Raum unten, zwischen der Platte des Glasstöpsels und dem Hals der Flasche nicht zu eng sei , damit die Seitenzwecken im Bleikopf unten (Figur 14, 15, 16 ccc) beim Unterschieben unter die Stöpselplatte sich nicht zwischen Hals und Platte einklemmen und den Stöpsel heben , gleich beim Einlegen der Flasche in den 1) Pleteneff, W., u. Sselesxeff, A., Zur Frage über den Bacterien- gehalt der artesischen Brunnen (Wratsch, 1894, No. 32 [Russisch]). XVI, -2. ITeydenreich: Neuerungen in der bacteriologischen Technik, i.',«) Apjtarat; es würde so die Flasche nicht luftdicht geschlossen in die Tiefe gesenkt werden. fi 'j!»r 14. 15. 13. 16. Am besten nimmt man den ganzen Apparat mit und sucht sich im betreffenden Glaswaarenlager die passenden Flaschen aus. Flaschen 160 Heydenreich: Neuerungen in der bacteriologischen Technik. XVI, 2. von 180 cc Inhalt sind für l)acteriologische Untersuchungen voll- kommen genügend und haben den Vortheil der geringen Gösse. Der Apparat selbst ist zweitheilig und lässt sich rasch durch Bajonettverschluss sicher und gut vereinigen und aus einander nehmen (Figur 13, bei b). Ist der Obertheil abgenommen, so kann man be- quem eine Flasche von passender Grösse in den unteren Theil hineinstellen. Verbindet man dann beide Theile mit einander, so drückt sich der Bauch der Flasche von selbst an den verengten Messingring bei c, weil unten die Doppelfeder d die ganze Flasche hinaufdrückt. Im unteren Theil, unter den Federn ist ein mas- sives , cylindrisches Bleistück eingelegt , damit der ganze Apparat sicher und leicht im Wasser untersinkt, auch wenn im Wasser eine ziemlieh starke Strömung stattfindet. Alles bisher Beschriebene ist constructiv verhältnismässig leicht auszuführen. Viel schwerer ist es, den Ubertheil mit dem Einklemm- stück für den Glasstöpsel der Flasche , sowie die P^inrichtuug für das leichte Heben und Herabfallenlassen des Stöpsels unter Wasser herzustellen. Das Bleistück des Bleikopfes a (Figur 13) sitzt in seinem unteren Theil fest in einem Messingring, und damit dasselbe gleiehmässig auf und ab gleitet behufs Oeftuen und Schliessen der Flasche, sind seitlich zwei Führungen aa Figur 14 angebracht, die in die beiden Hohl- rinnen ee Figur 13 etwas lose hineinpassen. Zieht man mm am Strick f Figur 13, so muss der Bleikopf a leicht und glatt, ohne irgendwo anzustossen, hinauf bis zum Querstück g und wieder zurück gleiten, resp. herabfallen. In den unteren Ring b Figur 14, der innen etwas ausgehöhlt ist, kommt der Hals und die Platte des Glasstöpsels zu stehen, wenn der Apparat geschlossen ist. Die Tiefe der Aushöhlung ist gerade so gross (besser etwas tiefer) als die Dicke der Stöpselplatte , so dass, wenn man die seitlichen platten Messingklemmen (JMgur 14 c, Figur 15 c und Figur IGc; ins Innere dieser Aushöhlung drückt (durch zwei seitliche Querspaltenj , dieselben unter die Stöpselplatte zu stehen kommen und nun, beim Heben des Bleikopfes, auch den Stöpsel ergreifen und so die Flasche -öffnen. Wird die Bleikopf wieder herabgelassen, so kommt der Stöpsel genau wieder auf seine frühere Stelle in den Flaschenhals zurück, Aveil die Führung eine prompte und richtige sein muss. Eine kleine schwache Feder drückt ausserdem auf den Stöpsel von oben , damit derselbe beim Heben und Senken keine seitlichen Bewegungen ausführen kann. In Figur 15 XVI, 2. llt-ydcnreich : Neuerungen in der l^acteriolos'ischen Technik, ißi uiul 1() ist der untere Theil des Bleikopfes von unten gesellen ab- gebildet, und zwar bei Figur 15 mit geschlossenen, bei Figur 10 mit getiffneten Seitenklemmen cc. Von beiden Seiten sieht man in Projection die Fiilirungsstaugeii «ö. Die Seitenklemmen sollen etwas scliwer gehen. Das Querstück g Figur 13 ist beweglich und hat von beiden Seiten Schrauben , um es höher und niedriger stellen zu können, in der Mitte ist ein Loch mit innen abgerundeten Rändern für die Schnur, damit das Heben und Senken immer ein senkredites bleibt. Gut ist es . die Schnur im unteren Theil aus zwei dünnen ^lessingdrähten zu machen, damit dieselbe sich nicht abreil^t und im kritischen Augenblicke reisst ; zwei Drähte (nicht einer; sind wünschens- werth, weil man immer sehen kann , ob einer von ihnen bereits ge- rissen ist, und in diesem Falle garautirt der andere den ununter- lirochenen Fortgang der Untersuchung. Schliesslich ist die kleine Oese ölten im Kopf, die zum Befestigen der Schnur dient, so tief unter die Obertiäche des Bleies zu verlegen, dass sie nicht an den Ring des Querstückes anschlägt, wenn man den Bleikopf hebt. Die Erfahrung hat gezeigt, dass hier die Schnüre zuerst abreissen. Nun noch ein Wort über den Bügel und die Seukkette. Der Bügel li soll stark , aber in den Auf hängegelenken leiclit beweglich sein. In die obere Oese wird ein starker Carabiner eingelegt, welcher das Ende einer gewöhnlichen Messingkette bildet , die wieder aus quer auf einander stehenden länglichen Ringen besteht. ^\\ der Kette sind jedes halbe Meter Zeichen angebracht, um die Tiefe der Entnahme zu kennen. Das Maass wird vom Niveau des Halses der Flasche an gerechnet. Schnüre statt Ketten sind ganz zu verwerfen, denn abgesehen von ihrer zweifelhaften Haltbarkeit auf die Dauer rufen sie beim Beschweren jedesmal Drehungen des Gewichts her- vor , welche in unserem Falle die ganze Wasserentnahme in Frage stellen können. Es ist dieses namentlich deshalb von besonderer AVichtigkeit , Aveil man ja zwei Schnüre in der Hand hält, die bei Verwickelungen das Oetfnen und Schliessen der Flasche unter Wasser geradezu unmöglich machen und viel Zeit im Augenblicke der Ent- nahme erfordern, um die verwickelten Schnüre wieder zu entwirren. Hier noch einige Maasse für eine etwaige Reconstruction : Höhe des Untertheils Itis h Figur 13 == 14 cm; innerer Durchmesser desselben G"5 cm ; der Ubertheil bis zum Ende der Führungsrinnen = IT'ö cm: bis zum Oberrand des Ringes c (von unten nach oben) 7 '8 cm: Hithe des Bleikopfes 4 cm. Durchmesser des Ringes am Blei- kopf unten 4*3 cm: Entfernung der beiden Führungsrinnen von ein- Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVI, 2. 11 162 Heydenreich: Neuerungen in clor bacteriologischen Technik. XVI, 2. ander 4'(; cui. Die Duppclfedcr nuten ist zwiselien zwei parallelen Platten befestigt, die 4 cm von einander entfernt sind. Das massive Bleistück unten ist zwar lierausnehmbar, sitzt aber doch so fest im unteren Ring-, dass es weder rüttelt noch von selbst beim Umwenden herausfallen kann; es wiegt etwa 750 bis 775 g, der Bleikopf sammt Querklemmen und Fülirungsstäben 250 bis 205 g. Der ganze Apparat ist aus Messing verfertigt, gelöthet und ge- nietet, die Längsbänder sind etwa 0*5 bis 0*6 cm breit, die Dicke aller Messingplattentheile beträgt etwa 0"1 cm. Alle Tlieile sind aus einander zu nehmen und können im Noth- fall sterilisirt werden, doch genügt es meistens, den Ajjparat gründ- lich im oder mit dem betreffenden, zu untersuchenden Wasser selbst zu spülen, resp. im Wasser auf- und abzubewegen, um alle fremden, anhaftenden Keime abzuwaschen. Ist man also mit dem Boot an die be- treftende Stelle des Sees oder Flusses angekom- men, so lässt mau dasselbe anhalten. In einem Flusse wirft man einen kleinen vierzahnigen Anker mit (getheertem ) Seil aus , bringt eine gute Strecke von ihm entfernt das Boot zum Stehen, und lässt vor der Entnahme jedenfalls eine geraume Weile vergehen. Dann versenkt und bewegt man den Apparat zuerst leer im Wasser und nachher erst mit der eingelegten !'• Flasche. Letztere war vorher im Laboratorium sterilisirt worden. Das Versenken bis zur gewünschten Tiefe geht ohne weiteres glatt von Statten, dabei hat man nur darauf zu achten, dass sowohl Kette wie Schnur sich gleichzeitig von der Welle loslösen und sich nicht gegenseitig stören. Eine solche Welle ist in Figur 17 abge- bildet und wohl ohne weiteres verständlich. Die Arbeit kann eine Person allein ausführen, bequemer und sicherer mit einem Gehülfen. Ist die gewünschte Tiefe erreicht , so lässt mau den Apparat einige Zeit ruhig schweben , verändert um ein Weniges den Ort und schreitet nun schliesslich zum Oetfnen der Flasche, was durch Zug an der Schnur sehr leicht und glatt geht. Dass der Stöpsel wirk- lich in die llidie gehoben ist , fühlt man sehr gut an der Kette, weil dieselbe einen kurzen, matten Stoss des Bleikopfes an das messingne Querstück in die Hand und die Finger überleitet. Ausser- dem aber, und dies ist ausschlaggebend für das V(»llfüllen der Flasche, XXI, 2. ileydenreich: Neuerungen in der bacteriologischen Technik. 163 sieht iii.'tu einige Zeit hindurch IMasen aufsteigen; Avenn sie nicht nielir erscheinen , ist die Flasche gefüllt ; man senkt den Bleikopf auf die Flasche zurück und kann nun den Apparat herausziehen. Darauf nimmt man die Flasche aus dem Apparat heraus, giesst einige cc Wasser fort und schliesst endgültig den Hals der Flasche mit dem Glasstöpsel. Es emptiehlt sich , vor dem Versenken bei jeder Flasche vor- sichtig zu probiren, ob der Glasstöpsel sich leicht bewegen lässt, sonst kann es vorkommen, dass man an der Schnur zerrt und reisst, und die Flasche im Wasser trotz alledem geschlossen bleibt. Die Wasserentnahme aus Brunnen geschieht in derselben Weise. Die Tiefe der Versenkung- unter das Wasser wird dadurch ermittelt, dass man zuerst die Entfernung des Brunnenrandes vom Wasserspiegel mittels des bekannten PExxENKOFFER'schen Schälchenstabs bestimmt. Diese Entfernung wird auf der Kette bezeichnet und von diesem Zeichen an die Versenkungstiefe gerechnet. Jetzt bleibt noch übrig, die volle Flasche oder die Flaschen möglichst rasch keimfrei zu verpacken und an den Untersuchungsort zu transportiren. Dieses geschieht in einem eigenen Behälter, der von mir seit etwa 6 Jahren construirt wurde, von Dr. Plaskin etwas vervollkommnet und von Dr. Pleteneff und Dr. Sselesneff be- schrieben wurde. ^ Der Behälter fungirt bis heute zu voller Zu- friedenheit. 5. Behälter zum Transport der Flaschen mit den Wasserproben behufs bacteriologischer Untersuchung. Der Behälter (Figur 18) ist cylindrisch, steht auf kleinen Füssen und hat unten eine verschraubbare Düse zum Wasserablauf des schmelzenden Eises, oben einen Deckel und einen Bügel mit Griff zum Transport. Um die Wärmeleitung abzuhalten , ist er von Filz und aussen noch von Wachsleinwand umgeben, während er selbst sowie sein Inneres aus Messing verfertigt ist. Inwendig (Figur 19) ruht auf kleinen Seitenstützen a das untere Gestell für 10 Flaschen zu je 180 cc mit Glasstöpsel wie sie oben erAvähnt wurden. Dieses (bestell ist nichts anderes als eine Plattmenage (Figur 20), mit festem Hoden und Seiten, in der auf einer Höhe von etwa 7 cm federnde, ^) Pletexeff, W., u. Sselesxeff, A., 1. c. 1894. 11 = 164 Heyclenreicli: Neuerung-en in der bacteriologischen Technik. XVI, 2. seitlicli offene Kinge (alles aus Messing) angebracht sijul , um für verschiedene Grössen der Flasclien sich bequem anzupassen. In diese Ringe werden die Flaschen gestellt. Seitlieh erheben sich vier Strebestäbe mit Oesen nach innen (P'igur 20aaaa)^ welche als Unterlage dem oberen Flaschengestell (Figur 19} dienen. Ausser- dem hängt lose — um die Flascheneiitnahmen nicht zu behindern — zwischen einem Paar entgegengesetzten Strebestäben eine Kette oder Schnur in jedem Gestell, damit das ganze Gestell bequem und rasch mit einem Handgriff aus dem Behälter herausgehoben, resp. eingesetzt werden kann. Die zweite obere Abtheilung ist genau ebenso construirt und fasst ebenfalls 10 Flaschen. 18. Die dritte Abtheilung ist nichts anderes als eine runde Pfanne für Eis , mit 7 bis 8 cm hohen Rändern und einem unteren seit- lichen , kurzen Ablaufrohr für das schmelzende Wasser. Damit dieses Wasser direct in den unteren Theil des Behälters a))fliesse, ohne die beiden unteren Plattmenagen zu berühreu , ist aussen am Behälter ein Rohr angelöthet (Figur 18«), welches durch eine Riinie im oberen Abschnitt, und durch eine Oelfnung im unteren Theil mit dem Behälter communicirt. Wird die Pfanne mit Eis auf das Flaschen- gestell der zweiten Abtheilung gestellt, so muss sie so gedreht wer- den, dass ihr kurzes, schräg nach unten sehendes Ablaufsrohr in die Rinne des Aussenrohres ragt. Dann wird alles Schmelzwasser des oberen Eises, ohne auch nur einen einzigen Tropfen in die unteren XVI, 2. Heydenrt'ich: Ncuenin^icn in ilcr bacteriologischen Technik. 1(;5 FlaschenjTcestelle zu verlieren, liiiial» in den unteren Absdniitt fliessen, \(m \v(t rs uiitsainnit dem unteren Schmelzwasser durch die untere 8eitendüse h zu jeder Zeit .'ilti^elassen worden kann. Wie man sieht, ist hier dasselbe l'rinci|) diiiv li;j;efii]irt, wie bei meinem Eis-Erstarrun.esapparat für jrelatincrende Nährmedien: die Kälteqnelle wirkt von oben nach unten, und niciit umj^'ektdirt. Des- hall) l)Ieilien die Flaschen die fj:anze Zeit des Transports unter einer beständigen Temperatur von etwa +1° bis -f" -^? ""'^ wenn man Salz auf die Pfanne giebt von — 8 bis — 5^. Doch sei man mit dem Salz vorsichtig, weil wir noch nicht endgültig die Wirkungs- weise des Vereisens des Wassers auf dessen Keime kennen. Unter- wegs hat der Bote hin und wieder bloss nachzusehen, ob in der oberen Pfanne genügend Eis vorhanden ist, und solches auf den l)etreffenden Stationen nachzufüllen. Man könnte denken, dass die ohne weitere Umhüllungen in die Gestelle eingesetzten Flaschen an den Flaschenrändern leicht durch Keime verunreinigt würden. Wie- derholte Erfahrung hat jedoch ge- lehrt, dass dem so nicht ist. Dennoch wird diesem Umstände dadurch vor- gebeugt , dass über jeden Flaschen- stöpsel nocli vor dem Sterilisiren ein steriles Zinnhütchen von Weintlaschen aufgesetzt wird, welches bis fingerbreit unter die llalsötfnung der Flasche herabhängt und an den Halsrand leicht angedrückt wird. Vor dem Einstellen der Flasche in den Senkapparat f Figur 13) wird die Kapsel abgenommen , und auf einen durch die Flamme ge- zogenen und in den Boden gesteckten Glasstab , Draht etc. vor- sichtig aufgesetzt , so lange , bis die Flasche gefüllt ist und in den Behälter zurückversetzt werden soll. Da der Kaum im Behälter zwischen beiden Gestellen von oben und unten gedeckt ist, und ausserdem jede Flasche ihren breiten platten, über die Ränder des Halses ragenden Glasstöpsel hat, so ist anzunehmen , dass bei gewöhnlichen Verhältnissen dieser Band auch ohne Zinnhütchen genügend vor Keimverunreinigungen geschützt ist, und beim späteren Oetfnen des Stöpsels im Laboratorium keine 1 1 (' y d e n r e i c h : Neuerungen in der bacteriologischen Technik. XVI, 2. dem Ball A, zwecks Ansangen oder Austreiben der Luft aus der ßiirptte — bald mit dem Cyiinderbeliälter mit sterilem Wasser Ä verbunden werden, um die Pipette zwischen zwei auf einander folgenden Füllungen und Entleerungen zu durchspülen und keimfrei zu machen. Dass letzteres wirklich erreicht wird, wurde wiederholt durch Ver- suche festgestellt; es genügten 10 cc, ja bereits 5, damit das nach- folgende Wasser vollkommen steril ablief. Ausserdem steht neben dem Stativ eine Glasglocke / mit sterilisirten Papierstücken auf einer (Uasplatte zum AbAvisclien des unteren Endes der Pipette, und weiter ein Glas m von etwa 500 cc zum Auffangen des abfliessenden Spülwassers. Vor Beginn der Arbeit drückt man ein wenig auf den Ball h mit dem Fusse, wodurch aus ihm, durch den mit ihm verbundenen Hahn b und durch die Pipette etwas Luft ausgetrieben wird. Dar- auf dreht man diesen Hahn um 90^, wodurch eine Verbindung mit Cylinder Ä hergestellt wird, und die Pipette wird sofort von einem energischen sterilen Wasserstrom rasch durchströmt. I^^achdem 5 bis 10 cc in das untergestellte Gefäss m abgelaufen sind, wird die Pipette durch Hahn b wieder mit dem Ball verbunden, und mit dem Fuss gedrückt, so dass alles übrig gebliebene Wasser aus der Pipette mit Gewalt ausgetrieben wird. Dann wird das untere Ende derselben mit sterilem Filtrirpapier abgewischt, und unter die Oberfläche der zu untersuchenden Nummer der Wasserprobe gebracht. Dieses er- reicht man dadurch, dass der Gehülfe eine der oben beschriebenen, 200 bis 300 cc Wasser enthaltenden Flaschen aus ihrem Gestell des Eisbehälters herausnimmt , tüchtig durchschüttelt , öffnet und reicht. Nun wird die Flasche vom Untersuchenden gehoben , so dass das untere Pipettenende allmählich in dieselbe einsinkt und sie schliess- lich unter das Wasserniveau kommt. Darauf lüftet man ein wenig den Fuss über den gepressten Ball, wodurch das zu untersuchende Wasser in die Pipette bis weit über gezogen wird; sofort nimmt man die Flasche weg imd setzt das Gefäss m darunter. Dieses Ge- fäss kann beständig untergestellt bleiben. Durch neues Drücken des Fusses auf den Ball wird alles Probewasser aus der Pipette getrieben. Hierauf folgt ein zweites Aufsaugen des Probewassers aus der untergestellten Flasche und neues Austreiben ins Gefäss m^ endlich kann ein drittes Durchspülen der Pipette mit demselben Wasser folgen, und jetzt zum dritten oder vierten Mal saugt man endgültig das Probewasser in die Pipette bis über , wischt das Ende der Pipette ab, stellt rasch unter dasselbe eine der oben be- XVI, 2. II cydenrcicli : Neuerungen in der bacteriologisclien Technik. ] 73 reiteten, 99 cc sterilen Wassers enthaltenden Flaschen, und lässt in dieselbe 1 cc ointliessen. Bei ^öo'^^i'^^^'""^" si"d ^ cc, bei ^/^q 5 cc einzulassen. Darauf schlicsst man die Flasche, schüttelt tüchtig durch nnd stellt sie bei .Seite , nachdem man genau etiquettirt hat. Diese Mischung- nun dient dazu, um später aus der betretienden Wasser- probe 1, 7-2 7 V47 Vio ^*c- cc flirect in Gelatine auszugiessen und die Colonieu nachher zu zählen. Unterdessen iiat der Untersuchende wieder die Pipette mit sterilem Wasser durchgespült und sterilisirt, er hat darauf alles Wasser durch Fusstritt lierausgetrielien und die Pipette imten ab- gewischt. Jetzt reicht ihm der Gehülfe die otfene Wasserprobe No. 2, mit welcher die Pipette 2- bis 3nial durchgespült wird, dann saugt er endgültig dieselbe voll, bringt auf 0, wischt vorsichtig deren Ende ab und lässt in die untergestellte Flasche mit 99 cc sterilem Wasser den 1 cc fallen, und die Mischung von Probe No. 2 ist fertig. So werden alle 15, 20, 30 Proben behandelt; ist einmal die Arbeit im FIuss, so erledigt sie sich sehr rasch, nameutlich wenn Zwei arbeiten. Nun kommt der dritte und letzte Act der Arbeit: Aus den fertigen Mischungen 1 : 100 aller Wasserprobeu sollen noch 1, 0*5, 0'*2 und 0-1 cc direct in meine Doppelschalen eingelassen und mit Gelatine vermischt werden. Die Art imd Weise, wie dieses ausgeführt wird, ist genau die- selbe wie bei der vorhergehenden letzten Arbeit : der Untersuchende saugt nur statt aus den unvermischten Proben, die nun auf 1:100 vermischten und lässt die entsprechenden Quantitäten in die Doppel- schalen direct einfliessen. Diese ganze Arbeit kann der Untersuchende nur schwierig allein ausführen, die nun bevorstehende Arbeit mit den Doppelschalen : das Reichen derselben, das Etiquettiren und das Hinstellen der mit Wasser beschickten Doppelschaleu in eine Reihe an den langen Rand des Tisches oder gar an beide oder alle vier Ränder des Tisches be- sorgt der Gehülfe. •Schliesslich kommt das Eingiessen der Gelatine in die fertig und sehr bequem am Tischrande aufgestellten, vorher sterilisirten Doppelschalen. Die sehr vorsichtig verHüssigte Gelatine (im obigen Kolben mit dem vax HESx'schen Verschluss) wird durch Druck auf den Quetscher in die vom Gehülfen ein ganz klein wenig geöffneten Doppelschalen eingegossen, eine nach der anderen, was sehr rasch beendigt ist. 174 1 1 (■ y (l e n r c i c h : Neuerungen in der bacteriologischen Technik. XVI, 2. rntordessen liat der Assistent Eis in den von mir angegebenen, oben bescliriebcnen, nivellirten Eis-Erstarrungskasten füllen lassen, und sowohl die Platte als die Pfanne und der Luftzwischenraum zwischen Pfanne und Platte sind bereits eiskalt. Auf diese Platte werden nun alle Doppelschalen gestellt, nachdem die Gelatine vorher gut mit den entnommenen Wassertheilen in ihnen durchmischt worden ist. Dieses Mischen geschieht, indem man durch geeignete Be- wegungen der Schalen die Flüssigkeiten bald in kreisförmige Strö- mungen bringt, bald durch Neigen und lieben dieselben von vorn nach hinten bewegt, resp. von rechts nach links, dann wieder kreis- fia-mig etc. , bis die Vermischung erfolgt ist (Vorsicht ! nicht ü))er den Piand giessen). Können nicht alle Schalen auf einmal (in drei Reihen über einander) unter die Pfanne kommen, so lässt man die Kälte auf die erste Parthie 5 , höchstens 10 Minuten einwirken, wonach die Schalen als erstarrt entfernt Averden nnd die zweite Parthie an die Picihe kommt etc., bis alle Schalen erstarrt sind. Hiernach werden die Doppelschalen zu G bis 10 und mehr eine auf die andere gestellt, und, wie oben beschrieben (Figur 10), unter einen Cilascylinder in die feuchte Kammer gesetzt, im Dunkeln bei Zimmertemperatur so lange aufbewahrt, bis noch neue Colonien er- scheinen. Man zählt vom 3. Tag an , jeden Tag von neuem , bis die Zahlen dieselben bleiben, oder die Verflüssigung überhand nimmt. Man vergesse nicht auf den Boden der unteren Schale Schnitzel Filtrirpapier zu legen und dasselbe gründlich mit Sublimat (1 : 1000 -[-10 HCl) zu durchtränken. Sind wenig oder nicht über 500 bis 700 Colonien in der Doppelschale gewachsen, so kann man noch ziemlich gut mit unbe- waffnetem Auge oder der Lupe zählen. Ueber diese Zahl hinaus, oder wenn gar mehrere tausend Colonien auftreten, geht das nicht mehr an, denn sehr viele von ihnen wachsen nicht über mikrosko- pische Grösse, und selbst die Lupe ist nicht mehr im Stande, sie zu unterscheiden. In diesem Falle muss mit dem Mikroskop gezählt werden.^ Man wählt etwa eine 50- bis SOmalige Vergrösserung und zählt alle Colonien, die im Gesichtsfelde auftreten. Wenn man ■lucli l)eim Zählen ohne ein ins Ocular eingelegtes Netz auskommen kann, so ist es doch anderseits nöthig, sehr aufmerksam und lang- sam die ganze Dicke der Gelatine mit dem Mikroskop zu durch- suchen, denn gerade hierbei können leicht Fehler unterlaufen. Ander- 1) Mez, C, 1. c. p. 395 ff. XVI, 2. Heydenreich: Xeueriingeii in der bacteriologischen Technik. 175 seits nimmt dieses Zählen viel Zeit in Anspruch, und es kann immer bloss ein kleiner Bruchtheil der Oelatineoberfläche abgezählt werden, da das Sehfeld um 50- bis 80mal kleiner ist als es erscheint. So wird sich ein mit untergelaufener Fehler nicht nur um so viel Mal ver- grüssern, als die Vermischung der Original -Wasserprobe mit sterilem Wasser betrug, also 100-, 200-, öOO-, 1000- etc. mal, sondern noch um so viel Mal mehr, als der abgezählte Bruchtheil kleiner war als die ganze GelatineHäche. Man vergesse nicht, die au den Rändern gewachsenen Colonien zu zählen. Wie schon gesagt, ist es am besten und geht es am raschesten, wenn man zusammen mit einem guten Assistenten arbeitet, im Notli- fall bediene man sich eines geschulten Laboratoriumdieners, schliess- lich , aber nur im Xothfalle , kann man auch die grosse Arbeit allein bewältigen, freilich mit viel mehr Zeitaufwand, getheilter Auf- merksamkeit und erleiclitertem Auftreten verschiedenartiger Fehler- quellen. Meine Bürette wurde mir von Leybold's Nachfolger in Kidn aus gewöhnlichem Glase ganz vorzüglich hergestellt. 7. Trichter zur bequemen Entnahme von Bodensätzen aus Wässern zwecks mikroskopischer Wasseruntersuchungen. Wir besitzen zur Zeit kein genügendes Mittel, rasch den Boden- satz aus grösseren Quantitäten von zu untersuchendem Wasser zu erhalten und den Bodensatz als solchen mit möglichst wenig bei- gemengtem Wasser zu entnehmen. Das Ceutrifugiren ist in gewöhn- lichen Laboratorien nur mit kleinen Quantitäten möglich, und der Sil erhaltene Bodensatz ist mehr oder weniger znsammengepresst. Das Ultriren grosser Quantitäten Wasser durch kleine Filter mit nachherigem Abspülen des liückstandes vom Filter^ wäre ja sehr zu empfehlen, da der ganze Filtriruugsprocess automatisch vor sich gehen könnte (MARioxTESche Flasche). Doch zerreisst oder zergeht einestheils das Filterpapier beim Spülen, anderseits mengen sich dem Bodensatze hierbei beständig einzelne, oft sogar sehr viele pflanzliche Papierfasern aus dem Filter bei , die das mikroskopische Gutachten vollkommen in Frage stellen können, denn gerade das Auffinden von Gewebefasern, z. B. menschlicher Kleidung, ist ein schwerwiegendes Moment gegen die Picinheit von Trinkwässern, ^) Mez, C, 1. c. p. 380. 176 Heydenreich: Neuerungen in der bacteriologischen Technik. XVI, 2. Diesem Umstände suchte ich dadurch abzuhelfen, dass ich statt der gewölinlichen , gehärtete Filter anwendete. Der Faserreichtlmm war lange nicht so gross wie früher, aber doch noch genügend, um auch diesen Weg zu verlassen. Daraufhin wandte ich mich an die bekannte Firma Schleicher und Schüll in Düren, mit der Bitte, mir so stark gehärtete Filter zu verfertigen, dass sie gar keine Fasern mehr abgäben. Aus der sofortigen, liebenswürdigen Antwort war je- doch zu ersehen, dass technisch es wohl nicht unmöglich scheine, ein solches Papier zu fabriciren, dass zur Zeit jedoch die nothwendigen Vorarbeiten und Einrichtungen fehlen. Und doch ist gerade das Fil- triren ein physikalischer Vorgang, bei dem „sicher" alles zu unter- suchende Wasser durch das Filter gehen und alles Corpusculäre auf dem Filter bleiben muss , während ein Absetzen , wie ich es weiter unten vorschlage und wie es bisher geübt wird , lange nicht alles Sinkfähige abgiebt; immer bleibt ein guter Theil an den Wänden haften, ein anderer gar schwimmt oben, und ein dritter setzt sich überhaupt nicht ab, sondern bleibt schweben. Um nicht ganz die Methodik eines so vorzüglichen Mittels zu berauben, erlaube ich mir, den V^orschlag zu macheu, das l)etretfende Filter mit irgend einer grellen leuchtenden Substanz zu färben, z. B. mit Anilinfarben, und zwar mit den sauren, z. B. Pikrinsäure, Bismarckbraun, Eosin, Tro- päolin , Guineagrün etc. , oder auch mit den basischen als Methyl- violett 5 B, Methylenblau, Fuchsin, Malachitgrün. Die Farben müssen in destillirtem Wasser gelöst sein, und die Filter müssen nach dem Färben auf das allersorgfältigste mit Wasser abgespült werden. Da namentlich die sauren Farben eine chemische Verbindung mit der C'ellu- lose eingehen, so ist nicht zu befürchten, dass sich die Farbe der etwa beim Spülen abgelösten Filterfasern später dem Untersuchuügs- wasser mittheilt; letztere werden dann durch ihre grelle, leuchtende Farbe sofort beim Mikroskopiren kenntlich sein und sich stets von allen anderen beigemengten Pflanzenfasern, sei es aus Papier, Kleidungs- stücken, Wäsche etc. unterscheiden lassen. Sollte zufällig der Ver- dacht aufkommen , man habe es mit Fasern aus gefärbten Kleidern zu thun , die dieselbe Farbe haben wie die mitabgespülten Filter- fasern, so hat man ein Filter von anderer Farbe anzuwenden und ein neues Präparat zu machen um die Frage über die Herkunft zu entscheiden. Da es jedoch nicht selten vorkommt, dass sich Pflanzenfasern in Wasser , Sputum , Eiter etc. , blau und rotli und zwar intensiv färben, so wäre zur Filterfarbe wohl am besten Gelb zu nehmen, XVI, 2. Heyilenreich: Neuerungen in der bacteriologischen Technik. 177 also Pikrinsäure, Tropäolin, Auramin etc. Noch besser sclieint mir die bekannte unauslöschliclie Anilin -Wäscbetinte zu sein, die eine intensiv scinvarze Farbe hat, denn gelbe und schwarze Fasern wür- den in natürlichen Wässern wohl nur ausnahmsweise anzutreffen sein. Diese scinvarze Anilintinte , die sich chemisch mit der Faser verbindet, nie abfärbt und nicht ausgesüsst zu werden braucht, wird folgenderweise bereitet : 'o^ A. Kupferchlorid, krystallisirt 4 Chlorsaures Natrium 5 Chlorammonium 3 AVasser, destillirt 30 B. Salzsaures Anilin 40 Wasser 95 Gummi arabicum 15 Vor dem Gebrauch ist 1 Th. der Flüssigkeit A mit 1 Th. der Flüssigkeit B zu vermischen ; die betreffenden Filter, resp. das P'iltrir- papier sind darin zu tränken und darauf während 2 Tagen zu trocknen. Xun werden dieselben strömenden Dämpfen ausgesetzt etwa 10 bis 15 Minuten und dann in Seifenwasser und später in destiUirtem Wasser gewaschen. Beide Flüssigkeiten müssen getrennt im Dunkeln aufbewahrt werden ; sie werden unmittelbar vor dem Gebrauch mit einander vermischt. Will man diesem aus dem Wege gehen und eine einzige Flüssigkeit haben, so versetzt man Lösung B vor dem Mischen mit Lösung A mit ca. lOO'O Salzsäure, und kocht das Ganze längere Zeit. Man lässt dann im verschlossenem Gefäss absetzen und füllt auf kleine Flaschen (Buchheister, Yorschriftenbiich für Drogisten, 1*. Aufl., 1894, p. 292j. Zuletzt wird getrocknet, und das Filter ist fertig zum Gebrauch. Wird Wäsche mit einer ana- logen Tinte aus Anilin gezeichnet , so ist , wie ich aus Gjähriger Hospitaljjraxis bezüglich der Wäsche sagen kann, die Farbe unver- wüstlich. Ob aber dasselbe sich mit Filtrirpapier wiederholen wird, kann ich nicht sagen. Vorläufig sei mit dem Färben des Filters über- haui)t bloss ein Vorschlag gemacht . über dessen Anwendbarkeit in der Praxis ich noch keine genügende eigene Erfahrung besitze. Dagegen kann ich folgenden, von mir construirten Trichter zum Sammeln sowie Entnehmen des Bodensatzes aus zu untersuchenden Wässern aus eigener l->rfahrung vollauf und warm empfehlen (Figur 24). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVI, 2. 12 17S Heydenieicli: Neuerungen in der bacteriologischen Technik. XVI, 2. Ein gewölmlicher Trichter mit möglichst steil abfallenden Seiten, von etwa 2 bis 3 Liter Inhalt, hat in seiner Röhre (0*6 cm Weite) zwei Hähne a und b. Der lichte Durchmesser beider Hahnbohrungen muss genau dieselbe Weite haben wie die Trichterröhre , also auch ()'6 cm. Aus dem Zwischenräume zwischen den Hähnen steigt die dünne Röhre c de (0'3 bis 0*4 cm innere Weite) von unten hinauf und wird bei ^/, wegen leichter Zerbrechlichkeit, durch einen Pfropfen oder anderswie an den Trichter befestigt. Diese Röhre soll mög- lichst steil gleich von Anfang hinaufstreben. Bei c ist ein Kautschukrohr mit einem MoHR'schen Quetscher in LEiss'scher Mo- dification angebracht. Dieselbe besteht darin, dass der Quetschhahn durch einen kleinen Haken unten beliebig lange otfen gehalten werden kann, damit die Kaut- schukröhre durch den beständigen starken Druck nicht zusammenklebt und mit der Zeit verdirbt. Das ist sehr wichtig, denn, wenn während der Untersuchung sich der Gummischlauch beschädigt erweist , kann die ganze Arbeit missglücken und das Was- ser ausfliessen. Nachdem man beide Hähne geschlos- sen hat, giesst man in den Trichter die ganze Quantität des zu untersuchenden Wassers und bedeckt ihn mit einer Glas- scheibe. Ist nach einigen Stunden der Bodensatz unten angesammelt, so öffnet man den Hahn «, während der Quetscher bei c die Gummiröhre schliesst. Es wird also wird noch kein Wasser in die Kammer fliessen, sie bleibt leer. So- bald man jedoch den Quetscher durch einen raschen plittzlichen Druck öffnet , und ebenso rasch wieder schliesst , strömt der ganze Bodensatz sammt einer geringen Menge Wasser in die Kammer ab. Jetzt schliesst man a und öffnet h. Der Kammerinhalt wird jedoch nur dann in ein untergestelltes Porzellanschälchen fliessen, wenn man oben den Quetschhahn lüftet. Auf diese einfache Weise bekommt man den ganzen Bodensatz mit einer ganz geringen Menge Wasser in die Porzellanschale. Will man auch die an den Wänden des Trichters haften gebliebenen 24. XVI. 2. Starlinger: Zur Marchi-Bebancllung-. I79 Theilclieii in dtii l'xjileusatz bringen, so brauclit man nur das Wasser im Tricliter mit einem langen Glasstab tüchtig umzurühren, nachdem der erste Bodensatz in die Kammer gebracht wurde und a geschlossen ist. Ist das Wasser zur Ruhe gekommen, so öftnet mau ohne weiteres «, und der Bodensatz wird sich von selbst langsam mit dem in der Kammer schon belindliclien absetzen und vermischen. Es muss jedoch bemerkt werden , dass es trotz dem Mischen Wässer giebt , die immer wieder einen kleinen Theil ihrer corpus- culären Elemente ;ui die Seitenwände absetzen. In diesem Falle, und falls es nöthig erscheinen sollte , kann man das Aufrühren und Abstreifen der Wände mehrere Male wiederholen. Die Maasse sind etwa folgende : Zwischen a und h = o cm, zwischen h und dem unteren Ende des Rohres gleichfalls 3 cm. Weite des Trichterrohres 0'6 cm. Weite des dünnen aufsteigenden Rohres cdc = 0'3 bis 0'4 cm. Höhe und Weite des Trichters sind verschieden, je nach den entsprechenden Erfordernissen, z. B. 1, 2 , 3 etc. Liter. Das Ganze ist auf einem eisernen Gestelle zu fixiren. [Eingegangen am 10. Juni 1899.] Zur Marchi- Behandlung. — Ein Apparat zur Zerlegung in dünne, vollkommen planparallele Scheiben. Von Dr. Jos. Starliiis:er, Primararzt an der Niederösterr. Landes -Irrenanstalt in Wien. Hierzu ein Holzschnitt. Die Wiclitigkeit der technischen Hülfsmittel kommt bei keiner Methode der histologischen Untersuchung sprechender zum Ausdruck als bei der Methode nach Marchi und Algheri. Gerade bei ihr zeigt sich so recht, was diese anscheinenden Nebensächlichkeiten zu leisten vermögen. 12 = 1^0 Starlinger: Zur Marchi- Behandlung. XVI, 2. Die Osmiiimsäure ist bisher ein unersetzliches Reagenz auf die Zerfjxllsproducte der Nerven, nnd an ihr liängt eben auch die Wichtig- keit der MARCui'schen Methode. Leider dnrclidringt die Osmium- säure nur dünne Lamellen, und das beschränkte auch die genannte Metliode in ilirer Anwendung für lange Zeit fast nur auf die expe- rimentellen Untersuchungen des kleinen Thiergehirnes und auch da nur grösstentlieils für Stichproben. P^ine lückenlose Serie hat erst Verf. mit der MARCHi'scheu Methode in seiner Arbeit über die Durch- trennung der Pyramiden^ beim Hunde einwandsfrei liergestellt. Die Nothwendigkeit solcher lückenloser Serienschnitte ist einleuchtend und hat sich dem Verf. im Laufe der Jahre geradezu als unerläss- lich erwiesen, so zwar, dass ich glaube, eine ex^^erimentelle Unter- suchung nacli Marchi (oder einer anderen Methode), die nicht, wenig- stens nicht im Bereiche der Läsion (1 cc z. B.) auf eine solche lückenlose Methode aufgebaut ist, kann nicht den Anspruch auf volle Exactheit machen. Die Schwierigkeit , sagen wir ein Hundegehirn von der Pyra- midenkreuzung bis zum Gyrus cruciatus in eine lückenlose Präparaten- reihe nach Marchi umzuwandeln , ist immer hier noch bedeutend und kostet eine Arbeit von 15 bis 20 Stunden, aber sie ist mög- lich, und niemand wird eine solche Mühe bereuen, während die Unterlassung nicht selten unliebsame Lücken und Missverständnisse nach sich zieht. Noch ungünstiger, hinsichtlich der MARCHi-Methode , lagen die Verhältnisse für die Pathologie, insbesondere für das Menschengehirn, soweit es die Forderung mehr oder weniger lückenloser Durchforschung anbetrifft, zumal auch Stichproben an einzelneu kleinen Stückchen nicht besonders ermuthigend ausfielen : aber auch da hat sich nach meinen Untersuchungen an der Hand solcher Serien -Präparate ein neuer Ausblick^ ergeben, und ich hege die Ueberzeugung , dass auch für das Grosshirn eine solche Untersuchung mit der Zeit als unabAveis- lich sich wird herausstellen müssen. So wiederliolt wurde z. B. schon die allgemeine progressive Paralyse, die senile Demenz mit Marchi stich])robenmässig untersucht, aber mit wenig Erfolg. Erst seit auch hier von mir eine solche fast lückenlose Durchforschung Platz gegriffen hatte, wurde diese Forderung klar und ersichtlich, ') Starlinger, J., Jahrb. f. Psychiatr. u. Neurol. Bd. XV, H. 1, p. 10: vgl. auch diese Zeitschr. Bd. XII, 189,5, p. 295—299. ^) Vgl. Referat der psychiatr. Vereins-Sitzung vom 14./III. 1899 in Wiener klin. Wochenschr. vom 29.111. 1899. X\'I, 2. Ötarlinger: Zur Marelii-llehandlun'^. löl eine wie reiche Fuiulgrube in dem Paraljtikergeliirne sowohl für die Patholoj^ie der genannten Erkrankung- als aucli für die Anotomie des Gehirnes überhaupt noch orten steht. Hierzu ist aber der hier abgebildete Apparat unerlässlidi. Diese Detailarbeit fordert eine solche handliche und schnelle Zerlegung des (Jehirnes, will man von einer derartigen anscheinend sehr mühevollen tnid schwierigen Arbeit nicht von vornherein abgeschreckt werden. Die Marchi -Methode erfordert zur gehörigen Durchtränkung immer höchstens 2 mm dicke und vollkommen planparallele Scheiben. Diese konnten bisher sicher nur mit dem Mikrotome hergestellt werden. Dazu musste aber das Gehirn erst eingebettet werden, und dann konnte man erst nicht das ganze Gehirn auf einmal zerlegen, weil man das ganze Gehirn nicht in toto in ein Mikrotom einspannen konnte. Das alles fällt hier weg. Man kann gleich eine ganze Hemisphäre ohne alle weitere Vor- behandlung (so wie man Futter schneidet) in (bis zu 1 mm herab) ganz gleichdicke Scheiben schneiden , ohne alle Uebung und besondere Sorgfalt. Ich gehe dabei so vor. Ich zerlege mir nach der gewöhn- lichen Erhärtung für Marchi in MüLLER'scher Flüssigkeit (d. i. etwa 8 bis 10 Tage unter Beigabe von 2 Procent Formol) die ganze Hemisphäre mit dem in Frage stehenden Apparat in gleichdicke, 1*5 bis 2*0 cm dicke Scheiben, lege sie aber dann in ihrer natür- lichen Folge wieder zusammen in verdünnte MtJLLER'sche Lösung. 4 bis 5 Schnitte lege ich probeweise in Marchi -Lösung; an ihre Stelle lege ich Fliesspapier ein in die Hemisphäre. Die Probeschnitte entnehme ich bei jedem Gehirne aus denselben Stellen. Beginn das Hinterhirn und zwar je 1 aus dem Occipitallappen und der Gegend des Splenium, 2 thalamus (Parietellappen, Centralwindungen), 1 Stirn- hirn. Dieser erste Versuch bildet gewissermaassen eine Stichprobe. Habe ich dabei Degenerationen irgendwo gefunden, kann ich dieselben leicht nach hinten oder vorn verfolgen. Selbstverständlich handelt es sich dabei immer um ganze Frontalschnitte , doch kann man natürlich auch jede andere Schnittrichtung wählen. Für die bessere Durchtränkung in der MARCHi-Lösung lege ich unter die Schnitte eine dünne Wattelage. Da sich dünne Lamellen in der schnell härtenden Osmiumsäurelösung meist werfen, püege ich sie daher, nachdem sie einen Tag in Celloidin gelegen haben, mit Blei- stückchen, nach erfolgter Aufklebung auf einem Holzblock, egal zu drücken. Schneide ich mehrere Stücke hinter einander, so klebe ich 1S2 Starliiiffcr: Zur .AIjirclii-liclKindlung-. XVI, '2. sie vorerst in ihrer natürlichen Itcilienfolge .-nif (k-nsflltcii liolzblock. So Avar es mir möglicli , selbst das Grosshirn an wichtigen Stellen lückenlos zu behandeln. Für die Weiterbehandlung der Schnitte erlaube ich mir auch da wieder auf die schon angezogene Stelle in dieser Zeitschrift zu verweisen. Was den beistehenden Apparat selbst anlangt, so kann ich denselben als eri)robt empfehlen , uiul ich halte ihn für unerlässlicli nothwendig für die MARCHi-üntersuchung, zumal des Grosshirns. P> hat manche Wandlungen bis zu seiner jetzigen Gestalt durchgemacht innerhalb mehrerer Jahre. Zur Zeit dürfte er kaum udch einen wirklichen Uebelstand an sich haben, er wird in unseren Anstalts- laboratorien von allen Aerzten ausschliesslich zu dem besprochenen Zweck verwendet. Der Apparat besteht aus zwei Theilen, aus dem Messer A und dem Stützapparat B. Das Messer ist in einen Sägebogeu gespannt, weil es dünn und biegsam ist, was von principieller Bedeutung ist. Jedes andere Messer mit stärkerem Kücken ist uuverweudbar. Der Stützapparat ist eine Art Schlitten, dessen fixer Theil h eine senk- rechte Glastafel f in dem Rahmen e gefasst hält, die ausziehbar ist und am Boden eine kleine Glasleiste angekittet hat. Der verschieb- liche Theil {/ trägt einen Metallbogen (11x9 cm als Oetfnuug). Die Verschiebung geschieht mit einer Triebbewegung bei ö; ge- messen wird die Distanz des Bogens d von der Glasplatte f mit einem Mikrometer c. Zur Fixation beider Theile g und h dient die Schraube a. XVI, 2. Behreus: Notizen über optische Projection 1. 18;^'. o Die Zerlegung- wird folgendermaassen ausgefülirt. Niiclidem der Apparat auf die gewünschte Dicke eingestellt und iixiit ist, schiebt man die Hemisphäre mit der linken Hand durch den liegen d und hält sie leicht angedrückt au der Glastafel. Mit der Rechten fasst man das Sägemesser, legt es an den Bogen d als Führer an und schneidet durch. Meist bleibt der Schnitt an der Glastafel vermöge der grösseren Cohäsiou kleben, man zieht dann die Glas- tafel sowie den Schnitt heraus und schwemmt den Schnitt ab , man brauclit an demselben gar nicht weiter herumzuzerren. Zum Schluss erlaube ich mir der Firma Reichert (Wien VHl, Bennogasse 24, 25), bei der der Apparat erhältlich ist, meinen besten Dank auszudrücken für das opferwillige und freundliche Ent- gegenkommen bei der Ausführung desselben. Der Preis des Api)a- rates stellt sich auf 25 Fl. ö. W. oder 40 Mark. Wien, 28. März 1899. [Eingegangen am 9. Juli 1899.] Notizen über optische Projection 1. (Elektrischer Handregulator für mikroskopische Projec- tionen. — Zur Projection mikroskopischer Uebersichts- präparate.) Von Wilhelm Behreus in Göttingen. Hierzu drei Holzschnitte. Vor etwa Jahresfrist habe ich in dieser Zeitschrift einen neuen Projectionsapparat beschrieben und abgebildet, '^ den ich im besonderen mit Rücksicht auf die Ansprüche wissenschaftlicher Institute construirt ^) Behrens, W., Neuer Projectionsapparat für wissenschaftliche Zwecke (Diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 1—23). j^4 Bohrens: Notizen über optische Projection I. XVI, 2. liabe, iiiul der vor allem auch zur Projection mikroskopischer Prä- parate geeignet ist. Inzwisclien ist der neue Apparat in einer Anzahl von Univer- sitäts-Instituten in Gebrauch genommen worden. Es gelangen häutig an mich Anfragen der Leiter dieser Institute über die Verwendbar- keit des Apj[)arates für diesen oder jenen besonderen Zweck. Mehr- fach iät es vorgekommen, dass für diese besonderen Zwecke eigene ^'orrichtungen construirt werden mussten. Ich selbst habe mich stets gern bereit erklärt , die Neuconstructiou solcher Vorrichtungen an- zugeben und ihre Ausführung zu überwachen. Auch jetzt sind wieder derartige Arbeiten im Gange ; ich halte es daher für angebracht, an dieser Stelle von Zeit zu Zeit über jene Dinge zu berichten, da anzunehmen ist, dass manche dieser Neuconstructionen auch für wei- tere Kreise Interesse haben werden. Je mehr ich mich mit Fragen über optische Projection be- schäftige — und ich habe seit fünf Jahren intensiv auf diesem Ge- biete gearbeitet — desto mehr drängt sich mir die Ueberzeugung auf, dass die ganze Angelegenheit noch in den Kinderschuhen steckt. Es ist das um so mehr zu verwundern, als es kaum ein wichtigeres Hülfsmittel für den naturwissenschaftlichen und den medicinischen Unterricht giebt als dieses. Wie unpraktisch und zum Theil wie widersinnig sind die meisten Projectionsapparate construirt ! Wie unbequem sind z. B. die Wechsel- vorrichtungeu für die Diapositive, ganz abgesehen davon, dass man bei jenen Apparaten nicht verschiedene Formate durch einander verwenden kann. Dagegen stattet man die Apparate mit ganz un- nützen Dingen aus, wie mit den bekannten, mit Wasser gefüllten Absorptiouskästen für die Wärmestrahlen. Es ist das ein nutzloser, unbequemer Luxus, eine recht theuere Verdunkelungsvorrichtung, zumal dann, wenn man sie nicht in das telecentrische Strahlenbündel des Condensors stellt, sondern in Nichtbeachtung der einfachsten optischen Grundsätze in den divergenten oder den convergenten Lichtkegel. Ich habe viele Hunderte von Projectionen vorgenommen mit Kalklicht wie mit elektrischem Bogeulicht bei Stromstärken bis zu 20 Ampere , aber noch nie ist mir auch nur ein einziges Diapo- sitiv zersprungen. Höchstens lauwarm sind die Glasbilder geworden ; ich sehe daher wirklich nicht ein, weshalb mau sich die Benutzung des Apparates durch die unbequeme Zuthat der Absorptionscüvetten verleiden soll, wenn man durch eine rationelle Umspüluug des Con- densors durch kalte Luft Dasselbe erreichen kann. XVI, 2. Behrens: Notizen über oi^tische Projection I. 1Ö5 "Welche falschen Ansichten sind nocli allgemein verbreitet über die Projection mikroskopischer Präparate ! Wie häufig habe ich die Erfahrung gemacht, dass selbst Männer der Wissenschaft Anforde- rungen an den Projectionsapparat in dieser Beziehung stellten, die er nie und nimmer wird erfüllen können. Trotz aller gegentheiliger Angaben behaupte ich, dass Projectionen mikroskopisclier Präparate bei starken Vergrösserungen und unter Zuhülfenahme des AsBE^sclien l)cleuchtungsapparates und des mikroskopisclien Oculares ein Ding der Unmöglichkeit sind. Ich behaupte dieses, nachdem ich experimentell alle Modalitäten mit negativem Erfolge erschöpft habe. — 1. Elektrischer Handregulator für mikroskopische Projectionen. In meinem oben citirten Aufsatze habe ich als die beiden einzigen zur Projection genügenden Lichtquellen elektrisches l^ogenlicht und Kalklicht aufgeführt, und es wurde damals eine Form des Apparates beschrieben, bei welcher Kalklicht mit Hilfe eines von mir neu construirten Brenners in Anwendung kam. Inzwischen hat es sich in mehreren hiesigen Universitäts-Instituteu, in denen der neue Apparat in häufigem Gebrauch ist, zur Evidenz herausgestellt, dass die Helligkeit des Kalklichtes mit meinem Brenner auch bei geräuschlosem Brennen der Flamme selbst für die grössten Auditorien zur Projection von Glasbildern völlig ausreichend ist. Es wurde mir sogar von mehreren Seiten die Bemerkung ge- macht , dass mau das Kalklicht wegen seines warmen, augenehmen Tones dem violetten Bogenlichte entschieden vorziehe. Sobald es sich aber nicht mehr um die Projection von Glas- bildern handelt, sondern um die objective Darstellung der mikro- skopischen Präparate selbst, dann wird der Wunsch nach einer viel stärkeren Lichtquelle rege, als sie das Kalklicht mit gewöhnlichem Leuchtgas und Sauerstoff zu bieten vermag. Um zu verstehen, in wieweit sich Kalklicht und Bogenlicht in ihrer Helligkeit bei Projectionen unterscheiden, ist die gewöhnliche Angabe der absoluten Helligkeit der Lichtquellen in Normal- kerzen wenig geeignet. Abgesehen davon, dass diese Angaben in den Preisverzeichnissen der Händler meist bis zu einer lächerlichen Höhe übertrieben sind, die thatsächlich auch nicht annähernd von jy^3 Behrens: Notizen über optische Projection I. XVI, 2. den dabei eniplbhleüen IJrennern erreicht wird, geben nneh dies- beziigliclie wahre Angaben kein richtiges Bild von Dem, was die entsprechende Liclitquelle für unseren Zweck wirklich leistet. Hier ist vielmehr die relative Fläch enhelligkeit des Projec- tious Schirmes das einzig Ausschlaggebende und zwar eine An- gabe in sogenannten Meterkerzen. Diese Messungen, bei denen natürlich alle Bedingungen stets die gleichen sein müssen, lassen sich z. Ü. anstellen mit dem WEBER'schen Photometer, von dem sich eine für unseren Zweck genügende Beschreibung in dem Vogel- schen Handbuch der Photographie^ findet, woselbst auch der Begritf Meterkerze erklärt ist. Nach den diesbezüglichen, photometri- schen Messungen des Herrn Privatdocent Dr. Reichexbach, Assistent am Hygienischen Institut der hiesigen Universität, ergaben sich die folgenden, hier interessirenden Werthe : L i eil t q 11 e 1 1 e Helligkeit in Meterkerzen Zirkonbrenner von Schmidt u. Haensch Kalklichtbrenner von Behrens- Differcntiallampe von Schuckert u. Co. bei 20 Ampere Stromstärke 12 26 125 Diese Zahlen besagen, dass die Flächenhelligkeit des Projections- schirraes bei Anwendung meines Kalklichtbrenners 2- bis 2^/omal, bei Anwendung der Ditferentiallampe 12mal so gross ist als bei Anwendung eines Zirkonbrenners von Schmidt u. Haensch, dass ferner die Hellig- keit bei Anwendung der Bogenlampe 4- bis 5mal so gross ist, als bei 1) Vogel, H. W., Handbuch der Photographie Th. H, p. 12—28. ■^) Die angegebene Zahl ist das arithmetische Mittel aus drei Messungen, welche Herr Dr. Reichenbach die Güte hatte, anzustellen und welche die Werthe 23, 25, oO ergaben. Diese Differenz findet ihre Erklärung in der Verschiedenheit des Druckes, unter welchem das gewöhnliche Leuchtgas steht. Die Zahl 23 ist während des Vormittages erhalten, wo das Gas an hiesigem Orte stets unter sehr geringem Druck steht, die beiden anderen ergaben sich während des Abends. Ich habe oben absichtlich nur den Durchschnittswert)! gegeben, welcher also die Helligkeit bei mittlerem Gasdruck repräsentiren dürfte. — Ich will übrigens bemerken, dass ich augenblicklich mit der Construction einer neuen Brennerdüse beschäftigt bin, die nacli den angestellten Versuchen abends wahrscheinlich eine Hellig- keit von mindestens oG Meterkerzen ergeben dürfte ; ich denke später dar- über berichten zu können. XVI, 2. Behrens: Notizen über optische Projectiuii I. 1Ö7 Anweiulung- meines Kalkliclitbrenners. lioj^enlampen von geringerer Stromstärke ergeben natürlich geringere Helligkeiten. Von dieser bedeutend grösseren Helligkeit des Bogenliclites dem Kalklicht gegenüber wird man bei Projectionen mikroskopischer l'rä- parate stets Gebrauch machen, wenn diese Bilder einem nur irgend- wie grösseren Zuhörerkreise vorgeführt werden sollen. Ich habe daher den von mir construirten Projectionsapparat auch für die Benutzung der ScHUCKERx'schen Ditferentiallampe (System Piette- Kkizik) einrichten lassen , bei welcher J]inrichtung jedoch nur die Lampe selbst, nicht das zugehörige schwere, aus Messing und Guss- eisen gefertigte Gehäuse zur Anwendung kam, die Lampe vielmehr in einer leichten Aluminiumcamera moutirt wird. Von einer Beschreibung dieses Apparates sehe ich hier ab : ich will nur bemerken, dass in diesem Falle die Projicirung des Licht- bildes in die hintere Hauptebene des Objectivsystems nicht durch Verschiebung der Lichtquelle geschieht (wie bei dem früher be- schriebenen Apparate), sondern durch Trieb- oder Handverstellung des zweitheiligen Condensor-Hintertheiles gegen seine Vorderlinse. Ich bin der Meinung-, dass selbstregulirende, elektrische Lam- pen immer mit einem gewissen Misstrauen zu betrachten sind. So habe ich vor längerer Zeit selbst die unliebsame Erfahrung gemacht, dass mir während einer Demonstration vor einem grossen Auditorium die ScHUCKERx'sche Lampe den Dienst plötzlich versagte ; es musste, da augenblicklich Piemedur nicht zu schaffen war, mit Hilfe eines angebundenen Bindfadens der Lichtbogen von einem Gehülfen an- dauernd auf der richtigen Grösse gehalten werden. Die Differentiallampe hat in meinen Augen noch einige andere Nachtheile : sie ist ziemlich kostspielig, sie ist auf eine gewisse Strom- stärke regulirt und lässt sich nur bei dieser innerlialb geringer Grenzen verwenden , sie macht den Apparat unverhältnissmässig schwer , und sie lässt sich nicht gegen einen Kalklichtbrenuer aus- wechseln. Von diesen Erwägungen ausgehend, habe ich vor längerer Zeit einen Handregulator für elektrisches Bogenlicht construirt (wie ich glaube , nach einem neuen Princip) , den ich hier beschreiben will, nachdem derselbe von anderer Seite genügend erprobt und mir die wiederholte Versicherung gegeben wurde , dass seine Leistung bei leichtester Bedienung eine vollkommene ist. Dieser Handregulator erfüllt die folgenden Bedingungen: 1) Er ist gegen den Kalklichtbrenuer auswechselbar. 2) Er ist sowohl für 188 Behrens: Notizen über optische Projection I. XVI, 2. Gleichstrom wie für ^Vechselstrom verwendbar. 3) Er ist für die verschiedensten Stromstärken verwendbar. 4) Der Strom durcliÜiesst nur die Kolilen, niclit den Regulator selbst. 5) Der Lichtbogen ist in horizontaler und in verticaler Richtung centrirbar. 6) Die Grösse des Lichtbogens ist durch einen einzigen Handgriff zu reguliren. 7) Der ganze Regulator ist in horizontaler Richtung um etwa 14 cm verschiebbar. 8) S ii m m 1 1 i c h e Regulirungen sind ausserhalb der Camera gelegen. Der Regulator ist auf einer Aluminiumplatte montirt, welche die Rückwand der Camera bildet, und welche vermittels der Kopf- schrauben rrrr (Figur 1) an der Camera befestigt wird, nachdem man die auf gleiche Weise befestigte, den Kalklichtbrenner tragende Rückwand entfernt hat. Jene Rückwand besitzt einen kreisförmigen Ausschnitt Ä'; seitlich von demselben, bei f, l)etindet sich ein Trieb- kopf, durch welchen die Centrirung des Lichtbogens in verticaler XVI, 2. Behrens: Notizen über optische Projection I. 1.S9 Richtung erfolgt •, die Klcmmmutter (j iixirt den Regulator nach er- folgter Centrirung. Durch den Triebkopf bei e erfolgt die Centri- rung des Lichtbogens in horizontaler Richtung. Litst man die Klemm- schraube et, ^o kann man den ganzen Regulator, also c. //. d, nach vorwärts oder rückwärts bewegen, indem man an den Kopf r fasst. Diese Bewegung des Regulators dient also dazu , um das Rild des Lichtbogens in die hintere Hauptebene des Objectivs /u projiciren. ^ Durch Drehen an dem Triebkopfe d endlich wird die (J rosse des Lichtbogens von Zeit zu Zeit regulirt. Von innen betrachtet sieht man , wie bei dem Regulator die Centrirung des Lichtbogens bewirkt wird. Dreht man an e (Figur 1), so beschreibt der Regulator eine kleine Strecke eines Kreisbogens um den Drehpunkt n (Figur 2). dreht man an f. so beschreibt er eine dazu senkrechte um den Drehpunkt tu. Thatsächlich erfolgt also die Centrirung nicht in geradliniger Richtung, sondern in Ce- stalt ganz tlacher Kreisbögen, die aber so wenig von einer geraden Linie abweichen, dass sie praktisch als solche aufgefasst werden können. Die Regidirung der Grösse des Lichtbogens durch Drehen an d (Figur 1) geschieht durch Zahnrad-Uel »ertragung. Die Achse von d (Figur 2) ruht im Lager / und endet in das Couusrad o. 1) Vgl. diese Zeitsehr. Bd. XV, 18ii8, p. 13 ff. ^.H, Behrens: Notizen über optische Projection I. XVI, 2. welches seinerseits in ein gleiches Ratl p eingreift und die verticale Bewegung von d in eine solche umsetzt, welche zu der verticalen um 45 ^ geneigt ist. Diese üebertragung ist nöthig, Aveil die Kohlen- spitzen xy einen Winkel von 45 ^^ gegen die Horizontale haben müssen, wenn ihr Licht zur Projection möglichst ausgenützt werden soll. Die Achse des Rades p geht durch die Führungen ([S, sie greift mit ihren Triebzähnen in die Triebstangen tu ein, welche sich, sobald man dop in Bewegung setzt, in der Führung qs ver- schieben , und zwar die eine in entgegengesetzter Richtung zur anderen. Es sind aber ut die Träger für die Kohlen xij, welche also durch eine sehr geringe Drehung an r/ einander genähert oder aber von einander entfernt werden. Von den Trägern tu gehen rechtwinklig kurze Messingarme ab, an denen sich, isolirt durch die zwischengelegten Porzellanstücke ivu\ die Klauen i'^v befinden, von denen die beiden Kohlen gehalten werden. In diese Klauen werden die in passende, etwas federnde Messinghülsen x gesteckten Kohlen ge- schoben, indem man die Druckfedern vv ein Wenig hebt, welche nach Loslassen die Kohlen fest in die Klauen hineindrücken. Jede Klaue trägt eine Polschraube (in der Figur nicht sichtbar), in welcher die Zuleitungssclmüre für den Strom mittels Polschuhen befestigt werden. Steht Wechselstrom zur Verfügung, so werden in den beiden Klauen zwei gleiche Homo gen kohlen eingesetzt von einem Durchmesser, der der verwandten Stromstärke entspricht. Ist jedoch, wie jetzt fast überall, Gleichstrom vorhanden, so wird der obere Kohlenhalter an dem -|-PoI angeschlossen und erhält eine dickere, sogenannte Dochtkohle (.r) , während dem unteren ( — ) die jener entsprechende Homogenkohle {y) eingesetzt wird. In diesem Falle brennt in die obere , dicke Kohle ein Krater hinein , und die Stellung der Kohle ist eben so gewählt Avorden , dass ein möglichst grosser Theil des vom Krater ausgestrahlten Lichtes von dem Con- densor aufgefangen wird. ^ Den verschiedenen Stromstärken entsprechen verschiedene Kohlen- durchmesser, welche ausgeglichen werden durch die Messinghülsen x (mit verschiedenem Lumen) , in die die Kohlen vor dem Einsetzen in die Klauen geschoben werden. Für Projectionszwecke dürfte die Stromstärke innerhalb 5 bis 20 Ampere schwanken ; unter 5 Ampere ^) Hat man versehentlich die beiden Pole verwechselt, so erkennt man dies sofort an einem starken Sausen des Lichtbogens, sowie daran, dass sich an der dünnen Kohle ein Krater bildet. XVI, 2. Behrens: Notizen über optische Projection I. 191 lierunterzngchen ist iiitlit ratlisam , da man alsdann keinerlei Vor- theile vor dein Kalklicdit hat, und ein Licht bei 20 Ampere besitzt eine Helligkeit, die auch für die grössten Anforderungen genügt, ^yill man bei einer festen elektrischen Anlage stets diesell)e •Stromstärke verwenden, so kann man einen entsprechenden, festen Widerstand vorschalten, und man überträgt seine AusAvahl und die Ausführung einem elektrotechnischen Fachgeschäft. Soll aber mit verschiedenen Stromstärken gearbeitet werden , so ist die Be- schart'ung eines regulir baren Widerstandes nöthig. Aus eigener Erfahrung empfehle ich die regulir baren Widerstände von ScHUCKERT u. C o. in Nürnberg, welche im Gebrauch sehr bequem sind. Die Neusilberspiralen liegen hier in einem, mit durchbrochenem Schwarzblech gedeckten Gusseisen-Rahmen. Vorn oben befindet sich ein Halbkreis von Tasten, über die eine Kurbel mit Handgritf schleift. Die Tasten entsprechen den verschiedenen Stromstärken in Ampere, und man braucht die Kurbel nur auf die gewünschte Stromstärke zu drehen, so ist Alles in Ordnung. Das Ganze ist schwarz lackirt und wird an eine Wand des Auditoriums verschraubt. Um den Regulator in Betrieb zu setzen, schraubt man die beiden Poldrähte der Leitung in den Polklemmen -f-, — (Figur 1) fest und schliesst den Strom durch Zudrehen des Ausschalters A (Figur 1, 3). Sodann dreht man ein wenig an dem Kopf ^/ (Figur 1), bis die beiden Kohlenenden sich völlig berühren und macht sofort an d eine entgegengesetzte Bewegimg, bis die Kohlen einen gegen- seitigen Abstand von etwa 4 mm haben. War im Anschluss kein Fehler gemacht, so ist jetzt ein ruhig brennender Lichtbogen vor- handen , der vor der Benutzung in bekannter Weise eingestellt und centrirt wird durch c, c, g (Figur 1). Der beschriebene Handregulator wird gefertigt von Ernst Ru- dolph, mechanische Werstätte Göttingen, zum Preise von 75 Mark. Er ist n u r an dem von mir construirteu Projectionsapparate ver- wendbar ; ein Anpassen an andere Apparate ist wegen der eigen- artigen Construction nicht möghch. 2. Zur Projection mikroskopischer Uebersichtspräparate. Bei der heutigen, hohen Ausbildung der Mikrotomtechnik fällt es bekanntlich nicht schwer, grössere Organe in mikroskopisch feine Schnitte bis zu 10 cm Durchmesser zu zerlegen, zu tingiren und !()•) Behrens: Notizen über optische Projection I. XVI, 2. in Balsam oder auf andere Weise zwischen Glasplatten zu montiren. Diese Uebersiclits])räparate , deren Demonstration für Lelirzwecke von grösster AViehtigkeit ist, sind zur Projection vermittels eines gewöhnlichen photographischen l'rojectionsobjectives in hervorragen- der Weise geeignet. Sie vertragen sehr wohl eine Vergrösserung von 25 bei Anwendung eines solchen Objeetives ; haben sie daher z. ]}. einen Durchmesser von 8 cm, so werden sie auf diese Weise einem Auditorium in der Grösse von 2 Meter Durchmesser vor- geführt, können also auch von den auf den hinteren Bankreiheu Sitzenden völlig deutlich gesehen werden. Man könnte nun solche Präparate auf Glasplatten von 9X12 cm Grösse montiren, und sie in den von mir früher beschriebenen Wechsel- rahmen zur Projection einsetzen, allein gewöhnlieh wird schon eine solche Sammlung von Präparaten in verschiedensten Formaten vor- handen sein, ehe man an deren Projection dachte. Ferner werden die Ränder der aufgelegten Deckgläser, an denen sich vielleicht ein Wulst von übergeflossenem Cauadabalsam befindet, auf diese Weise mit projicirt, was aus Schönheitsrücksichten zu vermeiden ist. Ich habe daher (auf Veranlassung von Herrn Prof. Dr. F. Hermann, Anatomisches Institut Erlangen) für die Projection solcher Präparate verschiedensten Formates eine eigene Vorrichtung construirt, die zu- gleich ermöglicht, nicht gewünschte Theile des Präparates durch eine Irisblende abzudecken. Figur 3 zeigt diese Vorrichtung am Projectionsapparat. Von den l*rismenführungen ^jp ist der Diapositivträger und der ihn mit dem Objectivbrett verbindende Balgen ganz entfernt ; an ihre Stelle ist vermittels der Führungen f der zu beschreibende kleine Apparat eingescholjen. Er besteht aus der dicken, kreisrunden, geschwärzten Messing- platte D von 22 cm Durchmesser, welche senkrecht steht und ein mittleres kreisrundes Diaphragma i von 10 cm Durchmesser besitzt. Dieses Diaphragma kann durch eine Irisbleude durch Drehen an der Handhabe h auf eine gewünschte Grösse verringert werden. Auf der Messingplatte D befinden sich ausserdem die Metallklammern ÄVf, ähnlich den Klammern auf Mikroskoptischen, aber entsprechend länger und stärker. Sie sind nicht in D eingesteckt, sondern vermittels einer längeren Schraube verschraubt. Einmal wird hierdurch ein Herausfallen der Klammern verhindert, sodann aber ist es auch möglich , durch Dreheu an den Schraubenköpfeu den Abstand der Klammern - von der Platte D zu vergrössern , Avenn man nämlich XVI, 2. Behrens: Notizen über optische Projection I. VJo Präparate einsi)annen will, die mit dicken Sehutzleisteu versehen sind. Man kann also Präparate verschiedensten Formates und ver- schiedener Dicke benutzen; sind sie kleiner als das mittlere Dia- phra.üraa, so muss man natürlich eine Spiegelglasplatte unterlegen. Wenn es nöthig sein sollte, kann man in diesem Falle dadurch an Licht gewinnen, dass man zwischen beide Platten Cedernholzöl bringt. Um einer zu starken Erhitzung der Präparate während der Projection vorzubeugen, ist der Ausschnitt der Platte D auf der Rückseite durch eine in der Figur nicht sichtbare Glimmerplatte be- deckt. Diese Glimmerplatte ist in einen mit Handhaben versehenen Messingring gefasst, welcher durch einen Bajonnet-Verschluss hinten aufgesetzt wird. Anf meine Bitte hin hatte Herr Prof. Hermann die Güte , den Apparat in Pjczug auf die Erhitzung der Präparate bei elektri- schem Licht zu prüfen. Es kam eine ScHucKERTSche Lampe von 20 Ampere Stromstärke zur Verwendung. Herr Prof. Hermann schrieb mir darüber Folgendes : „Was die eventuelle Erhitzung der Präparate bei elektrischem Licht betrifft, so scheint die Gefahr nicht gross zu sein, und dürfte die eingeschaltete Glimmerplatte genügen. Ich habe ein Präparat zehn Minnten lang exponirt , ohne dass der Canadabalsam ge- schmolzen ist. Das Präparat wurde natürlich tüchtig heiss , aber Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVI, 2. 13 ^94 Behrens: Notizen über optische Projection I. XVI, 2. man wird doch nur in grossen Ansnahmefälleu ein Präparat so lange Zeit zur Demonstration exponiren, und kürzere Dauer scheint absohit gefahrlos zu sein." Ich habe diesen Ausspruch hier wörtlich angeführt, weil da- durch die völlige Nutzlosigkeit von Absorptionscüvetten (p. 184) aufs neue bewiesen wird. Zur Anwendung des Apparates ist noch zu bemerken , dass sein Abstand vom Condensor {CD Figur 3) so gross sein soll, dass der ihn treffende convergente Lichtkegel des Condensors nur wenig grösser ist als das mittlere Diaphragma. Hiernach hat sich dann die Stellung der Lichtquelle und des Objectivs in bekannter Weise zu richten. Die Platte D sowie das Objectivbrett halten das Licht von dem Projectiousschirm völlig genügend ab ; ein Bedecken der Vorrichtung oder ein Anschlussbalgen sind daher gänzlich überflüssig. Die beschriebene Irisblende ist in der mechanischen Werk- stätte von R. Winkel hierselbst hergestellt worden. Wegen der Schwierigkeit, mit der sich sogrosse, exact wirkende Irisblenden nur herstellen lassen, ist der Preis leider ein hoher zu nennen; er beträgt für den fertig montirten Apparat 75 Mark. Ich sagte oben, dass mau bei der Projection mikroskopischer üebersichtspräparate vermittels des gewöhnlichen Objectivsystemes bis zu einer Vergrösserung von 25 gehen kann. Will mau einzelne Theile des Präparates stärker vergrösseru, dann empfiehlt sich die Anwendung eines Mikroprojectionsobjectives, wie solche jetzt von Zeiss, Leitz und Winkel gefertigt werden ; sie sind gleich- zeitig auch zu mikrophotographischen Aufnahmen bei schwachen Ver- grösserungeu sehr geeignet. Zeiss liefert fünf verschiedene , sogenannte M i k r o p 1 a n a r e von 20, 35, 50, 75 und 100 mm Brennweite bei einer Lichtstärke von 1 : 4'5, das Stück zu 120 Mark; ausserdem zwei einfache Projectionssysteme von 35 und 70 mm Brennweite zu 35 und 40 Mark. Leitz führt drei derartige Projectionssysteme von 24, 42 und 64 mm Brennweite zu 40 und 50 Mark. Von der Firma II. Winkel sind drei Mikroprojectionssysteme construirt worden von 25, 60 und 80 mm Brennweite mit einer Lichstärke von 1 : 4-5 ; ihr Preis beträgt je 65 Mark ohne Irisblende und 75 Mark mit solcher.^ ^) Für Projectionszwecke wird die Irisblende nicht gebraucht, dagegen X\'l, 2. Behrens: Notizen über optische Projection I. I95 Alle diese Systeme haben das Normalgewinde der mikrosko- pischen Objectivsysterae ; sie lassen sich also am Mikroskoptubus verwenden, wenn letzterer eine genügende Weite hat. Ich habe jedoch eine eigene kleine Vorrichtung anfertigen lassen, um speciell die WiNKEL'schen Systeme ohne Mikroskop an meinem Projections- apparat verwenden zu können, vorausgesetzt, dass eine montirte Irisblende wie die oben beschriebene vorhanden ist. Diese Vorrichtung wird an das Objectivquerbrett (Figur 3) des Projectionsapparates angeschraubt, lässt sich also durch einen ein- zigen Handgriff gegen das gewöhnliche Objectiv auswechseln. Sie besteht aus zwei kurzen, in einander schleifenden Tubusstücken, von denen der innere fest ist, während der äussere vermittels eines Schneckenganges, einer sogenannten Archimedesschraube, gegen den inneren verstellt werden kann. An das Vorderende des äusseren, beweglichen Tubus ist ein nach innen ragender Hals angeschraubt, der einen geringeren Durchmesser hat als das feste Tubusstück. An dem unteren Ende des Halses befindet sich die Schraubenmutter für das Objectiv, welches also mit seiner Frontlinse dem Condensor zu- gekehrt ist. Das Ganze wird in das Objectivbrett eingesetzt. Die grobe Einstellung gegen das auf der Platte D befindliche mikrosko- pische Präparat geschieht durch den Triebkopf H, während die feine Einstellung durch die Handliabe der Archimedesschraube bewirkt wird. Es ist ferner eine Einrichtung vorhanden, um das Objectiv in horizontaler und in verticaler Richtung zu centriren. — Ich halte diese Einrichtung zumal dann für sehr empfehlenswerth, wenn hinter einander eine grössere Zahl mikroskopischer Uebersichtsprä- parate erst mit gewöhnlichem Projectiousobjectiv in ganzer Aus- dehnung gezeigt werden soll, und dann aus jedem ein Stück mit dem Mikroprojectionsobjectiv stärker vergrössert. In diesem Falle wäre ein jedesmaliges Aufstellen und Fortnehmen des Mikroskopes oder des mikroskopischen Projections- Vorsatzes mit grossen Umständ- lichkeiten verknüpft. ist sie erforderlich, wenn man diese Systeme auch zu mikrophotographischen Aufnahmen verwenden will. Göttingen, 17. Juli 18'J'J. 13* 1<)6 Mayer: Uebor Hämatoxylin, Canuin und verwandte Materien. XVI, 2. Ueber Hämatoxylin, Carmin und verwandte Materien. Von Paul Mayer in Neapel. Vor nunmehr zwei Jahren wurde ich gebeten, für ein Hand- wörterbuch der -wissenschaftlichen Mikroskopie , das für Zoologen, Botaniker und Mineralogen bestimmt war, einige Artikel über Farb- stoffe zu schreiben. Leider ist das Werk nicht zu Stande gekommen. Es will mir aber scheinen, als wenn die kritische Zusammenstellung, wie ich sie seinerzeit für das gescheiterte Unternehmen geliefert hatte, trotz oder vielleicht gerade wegen ihrer lexikalischen, knappen Form auch isolirt gut zu brauchen sein würde, und so veröffentliche ich sie hier , nicht ohne sie natürlich vorher bis zur Gegenwart er- gänzt zu haben. Behandelt werden Blauholz, Hämatoxylin und Hä- matein, ferner Cochenille, Carmin und Carmiusäure. Vorher jedoch seien mir einige Worte über die Begriffe Beize und Farbstoffe erlaubt, die ja beide in der Mikrotinction ^ eine grosse Rolle spielen. Sie stehen durchaus nicht, wie Manche glauben, in schroffem Gegensätze zu einander, vielmehr ergänzen sie sich, und je nach Umständen kann die Beize zum Farbstoffe werden und um- gekehrt. Durchtränkt man z. B. ein thierisches oder pflanzliches Gewebe zuerst mit einer Lösung von Alaun und bringt es nachher in eine Lösung von Carmiusäure , so hat mau es nach dem gewöhn- lichen Sprachgebrauch mit Alaun gebeizt und mit Carmiusäure ge- färbt. In der That ist die Färbung ganz anders ausgefallen, als sie der „Farbstoö"" Carmiusäure allein hervorgebracht hätte. Man kann aber genau so gut mit Carmiusäure durchtränken (beizen) und dann mit Alaun die Färbung hervorrufen (färben). Statt des Bei- zens würde man daher auch von V o r b e h a n d e 1 n reden können. Selbst in den Fällen, wo scheinbar eine Beizung nicht ins Spiel ^) In der Mikrotinction ist es durchaus einerlei, ob man Kali- oder Ammoniakalaun verwendet. Wenn Rawitz (Anat. Anz. Bd. XV, 1899, p. 4o8 u. 442) dem letzteren besonders werthvoUe Eigenschaften vindicirt, so kann ich ihm darin nicht beistimmen. XVI, 2. Mayer: lieber ILimatoxylin, Caiiuin und verwandte Materien. 197 kommt, ist sie meist indirect schon durch die Fixirung besorgt wor- den, oft allerdings ohne geradezu beabsichtigt gewesen zu sein. Streng genommen braucht daher ein Farbstoff nicht selber ge- färbt zu sein, aui allerwenigsten genau die Farbe zu haben, die er sogar nach Behandlung mit einer farblosen Beize einem farblosen Gewebe verleiht. So ist z. B. die Lösung von Indigweiss, aus der sich auf die Baumwollfaser beim Contact mit Luft das Indigblau niederschlägt, farblos. Ferner sieht eine Lösung von Hämateiu braun aus und verleiht doch dem Gewebe , wenn dieses ausserdem noch Thonerde aufzunehmen Gelegenheit findet , eine violette Färbung. Warum sich aber die Bestaudtheile der Gewebe überhaupt färben, ist noch genau so unbekannt, wie warum sie aus den Beizflüssigkeiten etwas zurückbehalten und an sich binden, was dann mit dem Farb- stotfe zusammen die definitive Färbung liefert. Blauholz. Blauholz (Blut- oder Campecheholz, Logwood) ist das Kernholz der in Mittelamerika heimischen Leguminose Haeynatoxylon cam- pcchianiün. Frisch ist es ganz farblos , „fermentirt" oder „ge- reift" dunkel rothbraun oder carmiuroth, da in ihm das Hämatoxylin bereits zum Theil in Hämatein umgewandelt ist. Der Absud gereif- ten Holzes enthält beide Stoffe zugleich, das Blauholzextract im wesentlichen Hämatein. lu der Mikrotechnik ist früher Blauholz oder das Extract in England viel benutzt worden 5 neuerdings w^er- den sie nur ausnahmsweise noch empfohlen (so von Breglia, Dippel, Paneth, Petrone und Spuler), zum Theil wiegen der Billigkeit, aber auch weil man zu glauben scheint, das Tannin des Holzes wirke beim P^ärben irgendwie mit. Jedenfalls ist aber ihre Verwendung complicirter als die von Hämatoxylin oder Hämatein und wohl kaum uoch ernstlich rathsam. Hämatoxylin. Hämatoxylin (C^g H^^ Og), das färbende Princip im Blauholz (s. oben), wird daraus durch Ausziehen mit wasserhaltigem Aether gewonnen und bildet farblose , jedoch meist durch Oxydation au der Oberfläche etwas gefärbte Krystalle mit 1 oder o Molekülen 198 Mayer: lieber Hämatoxjlin, Carmin und verwandte Materien. XVI, 2. Krystallwasser , die süss schmecken und sich in Wasser, Glycerin und Alkohol ziemlich leicht, in Aether und Schwefelkohlenstoff schwer lösen. Die Lösungen oxydiren sich, namentlich bei Gegenwart eines Alkalis, schon an der Luft und gehen in das braune Hämatein (s. unten p. 206) oder in noch höhere Oxydationsstufen über. Es ist nicht flüchtig, verhält sich wie eine schwache Säure und bildet Salze, die begierig Sauerstoff aufnehmen und zu Hämateaten werden. Zum Färben taugt Hämatoxyliu allein nicht, vielmehr muss stets eine Base entweder 1) im Objecte bereits vorhanden sein oder 2) eigens durch eine Beize vor- oder nachher hineingebracht oder 3) dem Gewebe zugleich mit dem Hämatoxyliu dargeboten werden. Als Basen kom- men hierbei besonders Verbindungen der Metalle Aluminium, Chrom, Eisen und Kupfer in Betracht (s. unten Genaueres), und die Salze (sogenannte Farblacke), die hierbei entstehen, enthalten nie das Hä- matoxyliu selber, sondern wenigstens das Hämatein oder eine noch höhere, nicht genau bekannte Oxydationsstufe in sich, sind also min- destens Häniateate. 1. Hämatoxjiin allein. Zum Färben pflanzlicher Zellen ist es zuerst von Schmitz (Verh. d. nat. Ver., Bonn, Jahrg. XXXVH, 1880, Sitz.-Ber., p. 160; Strasburger, Botan. Prakticum, .3. Aufl., p. 345) verwandt worden; die Methode wird auch jetzt noch in der Weise geübt, dass man zu den Objecten, die in Pikrinsäure fixirt und dann gut ausgewaschen worden sind , auf dem Objectträger etwas Hämatoxyliu in Substanz bringt und dann Dämpfe von Ammoniak zutreten lässt: das Hämatoxyliu löst sich unter Bildung von Häma- tein-Ammoniak violett auf und färbt besonders die Zellkerne. Welche Basen hierbei ins Spiel kommen, ist nicht näher bekannt; ich habe früher an Thonerde gedacht, glaube jetzt aber, dass auch Eisen und Kupfer damit zu thun haben. Thierische Gewebe färben sich übri- gens mit Hämatoxyliu allein nur sehr wenig, und speciell die Kerne darin wohl nie, falls sie nicht etwa aus den Fixirmitteln die uöthigen Basen bereits aufgenommen haben. In Carbolsäure gelöst färbt Hämatoxyliu nach Klebahn (Prings- heim's Jahrb. f. wiss. Botan. Bd. XXII, 1891, p. 419) in den Sporen der Desmidiaceen die Kerne und Pyrenoide blau. In der Literatur finden sich ungemein viele Angaben über Färbung mit Hämatoxyliu oder Hämatein; wohl immer handelt es sich aber dabei, wie aus dem Charakter der Färbung hervorgeht, nicht um reines Hämatoxyliu, sondern um die Verbindung mit Alumi- nium. Es wäre, wie ich schon wiederholt ausgesprochen habe, wirk- XVI, 2. Mayer: Ueber Häiriatoxylin, Carmin und verwandte Materien. 199 lieh an der Zeit, diesen Usus aufzugeben und d i e G e m i s cli e oder Methoden, deren man sieh bedient, ganz genau zu be- zeichnen. Ob die „verdünnte wässerige Hämatoxylinlösung", die Brandt (Biol. Centralbl. Bd. I, 1881, p. 203) bei seinen Versuchen zur Färbung lebender einzelliger Organismen gebrauchte, wirklich nur diese war, lässt sich aus der Beschreibung nicht klar entnehmen; auf meine Anfrage bei Brandt hat sich aber ergeben, dass doch etwas Alaim zugesetzt war, allerdings so wenig, dass er den Orga- nismen nicht schädlich wurde. Als Mikroreagens auf Eisen ist Hämatoxylin in wässeriger Lösung von Macallum (Journ. ot Physiol. Cambridge vol. XXII, 1897, p. 92), auf Eisen und Kupfer von Boyce and Herdman (Proceed. of the R. Soc. London vol. LXII, 1897, p. 36) empfohlen worden. Nach meinen Erfahrungen lassen sich auch Spuren von Aluminium damit nachweisen, jedoch sehen sich die Niederschläge von Hämatein- Aluminium, Hämateiu-Eisen und Hämatein-Kupfer recht ähnlich, und so wird die ünterscheidimg zwischen diesen drei Metallen schwierig. 2. Hämatoxylin mit Aluminium s. bei Hämatein (unten p. 207). 3. Hämatoxylin mit Chrom. Zuerst von Böhmer (1865) verwandt, der die Schnitte mit Hämatoxylin in wässeriger Lösung durchtränkte und dann mit einem Chromgemisch auswusch ; dann von R. Heidenhain. Dieser nahm anfänglich Kaliumbichromat (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XXIV, 188.5, p. 468), später Monochromat (ibid. Bd. XXVII, 1886, p. 383), da sich die Präparate mit diesem besser halten. Die Objecte bringt er auf 12 bis 24 Stunden in eine ^/g procentige wässerige Lösung von Hämatoxylin, daraus auf ebenso lang in eine ^/^procentige wässerige Lösung von Kaliummonochromat, von da durch Alkohol und Xylol in Paraffin. — Apathy (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. V, 1888, p. 47; und nach ihm Platner (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XXXIII, 1889, p. 126), ändern die erste Vor- schrift von Heidenhain dahin ab , dass sie sowohl das Hämatoxj^lin als auch das Bichromat in Alkohol lösen und die Operationen alle womöglich im Dunkeln vornehmen. Serien von Celloidinschnitten be- handelt Apathy (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. VI, 1889, p. 170) 10 Minuten laug mit seiner Hämatein-Lösung (Iprocentig in Alkohol von 70 bis 80 Procent), trocknet sie mit Löschpapier ab (damit sich das Celloidin nicht mitfärbe) und bringt sie im Dunkeln auf 5 bis 10 Minuten in Alkohol von 70 Procent plus einigen Tropfen der öprocentigen Lösung des Bichromates. Auch färbt er wohl Objecte 200 Mayer: lieber Ilämatoxylin, Carmin und verwandte Materien. XVI, 2. nach der älteren Methode von Heidenhaix durch und tiugirt die Celloidiuschnitte mit einem Hämalaun nacli. Speciell für die Markscheiden im Centrabiervensystem der Wirbelthierc gilt Weigert's Färbung (Fortschr. d. Med, Bd. II, 1884, p. 190; Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. I, 1884, p. 291j. Die Schnitte aus Material, das in Müller's (oder Erlicki's) Gemisch gehärtet und noch nicht grün geworden ist, kommen bei 35 bis 40° auf 1 bis 2 Stvmden (oder nach Edinger auf 24 Stunden bei ge- Avöhnlicher Temperatur) in eine Lösung von Hämatoxylin ('^/^ bis 1 g auf 10 cc Alkohol und 90 cc Wasser), die einige Tage alt ist, also schon Hämatein enthält , werden darin ganz schwarz und müssen dann in einem Gemische von Borax (4 g), rothem Blutlaugensalz (5 g) und Wasser (200 cc) so lang verweilen, bis die graue Substanz gelblich geworden ist. — Flesch (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. I, 1884, p. 564) ändert diese Methode dahin ab, dass er die Schnitte zunächst auf einige Minuten in ^/^procentige Chromsäure und dann erst in die Hämatoxylinlösung bringt. Eine andere Moditicatiou dieser Methode rührt von Pal her. Dieser (Wiener med. Jahrb. 1886, p. 619; Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. IV, 1887, p. 92) weicht von Weigert nur darin ab, dass er die überfärbten Schnitte zuerst mit Kaliumhypermanganat (in ■'^/^ procentiger Lösung) und dann mit Oxal- säure und Kaliumsulfit (je 1 zu 200 Wasser) behandelt : er erhält so die graue Substanz völlig farblos, während die weisse blau bleibt, und kann mm die Schnitte noch beliebig nachfärben, namentlich mit einer Carminlösung. Die übrigen Abänderungen der WEiGERT'schen Methode sind zwar zahlreich , aber unwesentlich. Sie laufen darauf hinaus , ent- weder beliebig fixirtes Material zu benutzen, indem mau erst in die Schnitte das Chrom durch Beizen einführt — so Kaiser (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. IX, 189.3, p. 468) und Gudden (Neurol. Centralbl. Jahrg. XVI, 1897, p. 24) — oder statt der WEiGERT'schen Hämatoxylinlösung die von Kultschitzky (s. unten p. 204) anzu- wenden — so Wolters (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. VII, 1891, p. 466). Mercier (ibid. p. 481) verwendet zum Färben der Schnitte nicht reines Hämatoxylin, sondern eine Art Glychämalaun (s. unten p. 209) und differenzirt entweder nur nach Weigert oder noch besser hinterher mit einer schwachen Kalilauge (lOprocentige Kalilösung 2, Wasser 10, Aether 1 cc). 4. Hämatoxylin mit Eisen. Ebenso wenig wie beim Chrom oder beim Kupfer ist beim Eisen die Verbindung mit dem Hämat- XVI, 2. Mayer: Ueber Hämatoxylin, Carmin und verwandte Materien. 201 osylin chemisch genau bekannt , jedoch ist sie eine höhere Oxyda- tionsstufe als das Hämatein (s. auch Mayer in Anat. Anz. , Bd. XIII, 1897, p. 318). Mit letzterem lassen sich zwar die Resultate der HEiDEXHAix'öchen Tinction (s. unten) auch erhalten, in der Kegel werden aber die hierher gehörigen Lösungen alle mit Hämatoxylin bereitet. Man führt gewöhnlich zunächst das Eisen in die Schnitte ein, bringt sie dann in die Lösung des Hämatoxj^lins , wo sie sich ganz ditfus tingiren, und diff'erenzirt die Färbung zuletzt durch ein saures Gemisch : entweder durch die Eisenbeize selber oder durch eine freie Säure. Im Einzelnen gestalten sich die Hauptmethoden wie folgt : a) Bexda (Verh. d. anat. Gesellsch. , 7. Vers., Berlin 1893, p. 1()1) bringt die Schnitte von beliebig fixirten Objecten auf 24 Stunden in Liq. ferri sulf. oxyd. Pharm. Germ, (verdünnt mit dem Doppelten an Wasser), wäscht sie gut aus und legt sie in eine ein- procentige wässerige Lösung von Hämatoxylin , worin sie schwarz werden müssen. Dann wäscht er sie nochmals und ditferenzirt sie : entweder in Essigsäure (30 Procent oder schwächer) oder in stark (1 : 20) verdünntem Liq. ferri sulf. oxyd. (s. hierzu die unwesent- lichen Bemerkungen von Eisen in Zeitschr. f. wiss. Mikrosk., Bd. XIV, 1897, p. 199, sowie die ältere Methode von Benda in Arch. f. Anat. u. Physiol., Physiol. Abth., 1886, p. 564). b) M. Heidenhain (Festschrift f. Kölliker, Leipzig 1892, p. 118) bringt die Schnitte erst auf ^/.-, bis höchstens 3 Stunden in eine l^/o- bis 4procentige Lösung von Eisenalaim, d. h. dem schwefel- saurem Eisen oxyd- Ammoniak , in klaren violetten Krystallen ; das grüne Oxydul-Doppelsalz taugt dazu nicht; die Krystalle dürfen nicht gelb und angelaufen aussehen, auch darf man die Lösung nicht er- wärmen (s. Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XLIII, 1894, p. 435). Dann wäscht er sie mit Wasser ab, legt sie auf eine halbe Stunde in eine etwa ^/o procentige Lösung von Hämatoxylin (Hämatein wirkt nicht so gut), wäscht sie wieder uud bringt sie zur Ditferenzirung in die Eiseulösung zurück. Sind sie gut ditferenzirt, so wäscht er sie in fliessendem Wasser eine viertel bis eine Stunde lang und schafft sie auf die gewöhnliche Art in Balsam. Die Färbung soll je nach der Länge der Bäder und der Ditferenzirung verschieden (blau oder schwarz) ausfallen. Die Objecto dürfen beliebig tixirt sein, indessen in toto lassen sie sich nicht färben , auch schreibt Heidenhain die Schnitt- dicke auf höchstens 6 ^ vor (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XIII, 1896, p. 186 5 hier noch viele Einzelheiten über die Färbung der 202 Mayer: lieber Hämatoxylin, Canuin und verwandte Materien. XVI, 2. Centralkörper: Eisenlösiiug- 2^/.,procentig-, 6 bis 12 Stundenlang anzuwenden; Hämatoxylinlösung- Iprocentig, wenigstens 4 Wochen alt, 24 bis 36 Stunden lang). — R. Krause (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XLV, 1895, p. 94) oxydirt die Hämatoxylinlösung durch Zusatz von 3 bis 5 Procent einer Iprocentigen Lösung- von Kaliumhyperman- g-anat. — Francotte (Arch. de Zool. exper. (3) t. VI, 1898, p. 200) beizt die Objecte mit Eisentartrat, nimmt aber zum Ausziehen Eisen- ahxim. — Peter (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LIII, 1898, p. 183) verwendet lauter spirituöse Lösungen: Eisenalauu 2procentig in 70- procentigem Alkohol, Hämatoxylin Iprocentig in absolutem Alkohol 70 plus Wasser 30 Theilen; Auswaschen ebenfalls in Alkohol. Heidenhain combinirt seine Methode mit einer Vorfärbung der Schnitte mit Bordeauxroth oder Anilinblau (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XLHI, 1894, p. 665), um zu verhindern, dass die Eiseii- verbindung auch an das Chromatin und Plasma gehe (sogen. Theorie der subtractiven Färbung oder, nach Unna, der tiuctoriellen Prä- occupation; s. Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XII, 1896, p. 454). c) BüTSCHLi (Untersuch, mikrosk. Schäume, Leipzig 1892, p. 80) bringt zur Färbung des Zellplasmas die Schnitte erst in eine schwache Lösung von Eisenacetat und dann in das Hämatoxylin (^/2 procentige Lösung), erhält sie ganz dunkel, differenzirt sie aber nicht weiter. d) Weigert (Allg. Zeitschr. f. Psychiatrie Bd. L, 1894, p. 245) legt die Schnitte erst in Tinct. ferri acet, Rademacheri, dann in sein Hämatoxylin (s. oben p. 200) und wäscht sie mit saurem Alkohol (von 70 Procent mit 1 Procent Salzsäure) aus, so dass nur die Mi- tosen gefärbt bleiben. e) Kaiser (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. IX, 1892, p. 469) beizt zur Färbung der Markscheiden die Schnitte mit Eisen- chlorid (Liq. ferri sesquichl. und Wasser je ein Theil, Spir. rectif. 3 Theile), bringt sie in Weigert's Hämatoxylin, difterenzirt sie nach Pal und färbt sie mit Fuchsin oder Naphthylaminbraun nach. Oder (Neurol. Centralbl. Bd. XII, 1893, p. 363 ; Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XI, 1894, p. 249) er fixirt die Objecte erst in Müller's Gemisch, legt sie noch in Marchi's Gemisch (MIjller's Gemisch mit Osmium- säure) und behandelt dann die Schnitte wie oben, combinirt also mit dem Eisen das Chrom und vielleicht auch das Osmium. i) Janssens (La Cellule t. XIV, 1898, p. 207) ersetzt im DELAFiELD'schen Gemisch (s. unten p. 208) den Alaun durch Eisen- alaun und erhält so eine „hematoxyline uoire" zur Färbung der XVI, 2. Mayer: lieber Hämatoxylin, Carmin und verwandte Materien. 203 Kerne in den Hefezellen : 100 Wasser heiss mit Eisenalaun gesntti, p. 442) benutzt sein Gemisch zur Färbung der un- verholzteu und unverkorkten Zellwände der Pflanzen. Unna (Zeitsclir. f. wiss. Mikrosk. Bd. VIII, 1892, p. 483) will dem Verderben der Alaunhäniatoxyline dadurch vorbeugen, dass er ein reducirendes Agens, am besten sublimirteu Schwefel, zusetzt, indessen liilft auch dies Mittel nicht. Relativ unveränderlich sind die Gemische von Ehrlich, Apathy und das Glychämalaun von Mayer (s. unten). 2. Hämalaun nach Mayer (Mittheil. d. Zool. Station Neapel Bd. X, 1891, p. 172): 1 g Hämatein (oder Hämatein-Ammouiakj, 50 cc Alkohol von 90 Proceut (zum Lösen des Hämateins ; neuer- dings nimmt Mayer dafür etwas Glyceriuj , 50 g Alaun, 1 Liter Wasser. Färbt im Gegensatz zu den Alaunhämatoxylinen , die alle erst allmählich Hämatein in sich bilden, sofort, hält sich aber nicht lange unzersetzt (länger bei Zusatz von 2 Procent Essigsäure : saures Hämalaun). Nach dem Färben wird am besten erst mit Alaun- wasser (1 Procentj, dann mit Brunnenwasser ausgewaschen, um ganz reine , blauviolette Kerufärbuug zu erzielen ; Verdünnung des Häm- alauns am besten mit Alaunwasser. — Das Gemisch von Mann (Zeitsclir. f. wiss. Mikrosk. Bd. XI, 1895, p. 487) enthält relativ zu viel Hämatein um reine Kernfärbungen zu liefern. Hansex (Zool. Anz. Bd. XVHI, 1895, p. 158) oxydirt sein Alaunhämatoxyliu durch Kochen mit Kaliumhypermanganat und gewinnt so ein Hämalaun, das aber dem von Mayer an Haltbarkeit nachsteht. Theoretisch richtiger geht Harris (Microsc. Bull. Philadelphia vol. XV, 1898, p. 47) zu Werke , wenn er dem Hämatoxylin seinen Sauerstoft' durch Queck- silberoxyd zuführt , da sowohl dieses als auch das aus ihm ent- stehende Oxydul sich mit dem Hämatein nicht verbinden: er erhitzt einfach das fertige Gemisch von 1 g Hämatoxylin, 20 g Alaun und 200 cc Wasser mit ^/^ g Quecksilberoxyd zum Kochen. Die Lö- sung enthält freilich nach meinen Versuchen viel zu viel Hämatein, nimmt man aber die Proportionen wie beim Hämalaun (also 1 : 1000), so ist sie gut , indessen durchaus nicht etwa so haltbar wie mau nach Harris glauben könnte. 3, Glychämalaun nach Mayer (Mittheil. d. Zool. Station Neapel Bd. XII, 1896, p. 301): 2 g Hämatein (oder Hämatein- Ammoniak), 25 g Alaun, 150 cc Glycerin, 350 cc Wasser. Das Hämatein wird in ein wenig Glycerin gelöst und zur Alaunlösung gegeben. Keine ausschliessliche Kerufärbuug; will man diese, so Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVI, 2. 14 210 Mayer: Ueber Hämatoxylin, Carrain und verwandte Materien. XVI, 2. muss man mit Alaunwasser oder sogar mit Säure auswaschen. — Rawitz (Leitfaden f. bist. Untersuch. , Jena, 2. Auti., p. 63) nimmt auf 1 g Ilämatein, 6 g Ammoniakalaun und je 200 cc Wasser und Glycerin. 4. Muchä matein nach Mayer (Mittheil. d. Zool. Station Neapel Bd. XII, 1896, p. 307). a) wässeriges: 2 g Hämatein (oder Hämatein-Ammoniak) , in Glycerin durch Verreiben zu lösen, 1 g Chloraluminium, 400 cc Glycerin und 600 cc destillirtes Wasser; b) alkoholisches: 2 g Hämatein (oder Hämatein-Ammoniak), 1 g Chloraluminium, 1 Liter Alkohol von 70 Procent, 10 bis 20 Tropfen Salpetersäure. Beide Gemische dienen zur Färbung des Schleimes in Schnitten oder dünnen Membranen ; namentlich das wässerige färbt ihn rasch. Die Kerne mag man mit Paracarmin färben, aber stets vorher. 5. Hämatoxylin mit Aluminiumacetat nach Haug (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. VIII, 1891, p. 51): 1 g Hämatoxylin, 10 cc absoluter Alkohol, 200 cc Liq. alum. acet. 6. Hämacalcium nach Mayer (Mitth. d. Zool. Station Neapel Bd. X, 1891, p. 182): je 1 g Hämatein (oder Hämatein- Ammoniak) und Chloraluminium, 50 g Chlorcalcium, 10 cc Eisessig (oder 20 cc Essigsäure von 50 Proceut), 600 cc Alkohol von 70 Pro- cent. Das Gemisch ist rothviolett; nach einigen Monaten setzt es ab, man kann dies aber einigermaassen verhindern, indem man sich zwei Gemische macht, jedes mit der Hälfte des Alkohols und der Säure , und das eine mit allem Chlorcalcium, das andere mit allem Chloraluminium und Hämatein, um sie erst beim Gebrauch zu mischen. Das Hämacalcium färbt nicht so präcis wie Hämalaun, dies gilt aber auch von den anderen alkoholischen Hämateingemischen : gewöhnlich muss man kräftig überfärben und mit saurem Alkohol auswaschen. 7. Hämatoxylingemisch nach Ivleinenberg (Quart. Journ. Microsc. Sei. [2] vol. XIX, 1879, p. 208). Wenig rationell und inconstant : es enthält neben etwas Hämatein wechselnde Mengen von Hämatoxylin, Chlorahiminium und Chlorcalcium. S. die Kritiken von Mayer (Mittheil. d. Zool. Stat. Neapel Bd. X, 1891, p. 174) und Squire (Methods and Formulae. London 1892 p. 25), ferner die Formeln von Squire (1. c.) und W^istixghausen (Mittheil. d. Zool. Station Neapel Bd. X, 1891, p. 41 j. Eine Auflösung von Chloraluminium und Hämatoxylin in Alkohol giebt DippEL (Mikroskop 2. Aufl. Bd. I, 1882, p. 719) an; s. auch hierzu die Kritik von Mayer. XVI, 2. 3Iayer: lieber Ilämatoxylin, Carmin und vorwandte Materien. 211 Doppelfärbuugeu. Sehr gebriiiichlich ist die Anwendung von lOoöin, Orange, Pikrinsäure oder Säurefuchsin , um andere Gebilde in der Zelle zu färben , nachdem man mit Hämateinthonerde die Kerne tingirt hat. Auch kann man die Procedur umkehren oder endlich Plasma und Kern zugleich färbe